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H1N1流感病毒血凝素对人肺细胞的损伤作用及机制研究

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现代生物医学进展 2018年第6期18卷 1029-1033页

作者：李慧瑾李正堃连媛媛贺春霞秦魏孙丽君孙晶莹赵栋曹慧玲陕西省缺血性心血管疾病重点实验室西安医学院基础与转化医学研究所陕西西安710021 陕西省人民医院中心实验室陕西西安710062 西安医学院医学技术系陕西西安710021 福建医科大学药学院福建福州350108

目的:研究H1N1流感病毒血凝素HA对人胚肺成纤维细胞的损伤作用并初步探讨其机理。方法:合成2009 H1N1的HA基因全长,分别将HA的PCR产物和pEGFP-N1质粒经Hind Ⅲ和EcoRI酶切电泳、纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α,构建真核表达质粒pEGFP-N1... 详细信息

目的:研究H1N1流感病毒血凝素HA对人胚肺成纤维细胞的损伤作用并初步探讨其机理。方法:合成2009 H1N1的HA基因全长,分别将HA的PCR产物和pEGFP-N1质粒经Hind Ⅲ和EcoRI酶切电泳、纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α,构建真核表达质粒pEGFP-N1/HA。质粒转染293细胞,检测其转染效率,并收获细胞总蛋白进行Western blotting检测。将阳性质粒转染MRC-5细胞,CCK-8检测HA的表达对细胞增殖活性,线粒体膜电位检测试剂盒检测其对细胞的早期凋亡的影响,ATP检测试剂盒检测HA的表达对ATP水平的改变。结果:PCR电泳检测获得分子量为1700 bp左右的目的条带,菌落PCR鉴定HA片段成功插入pEGFP-N1载体。荧光显微镜下检测pEGFP-N1/HA转染293细胞有明显荧光,Western blotting结果显示pEGFP-N1/HA转染细胞有单一的目的蛋白表达。HA的表达可明显抑制MRC-5细胞活力,HA的高表达降低MRC-5细胞的线粒体膜电位及ATP水平。结论:H1N1流感病毒HA对人肺细胞的损伤作用可能与影响肺细胞的线粒体功能有关。

关键词： H1N1流感病毒血凝素人胚肺成纤维细胞线粒体

伴有e1a3型BCR-ABL且T315I突变的Ph染色体阳性成人急性淋巴细胞白血病1例并文献复习

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现代肿瘤医学 2018年第11期26卷 1752-1756页

作者：董莹原瑞凤朱华锋冯苗娟常子维侯莉萍辛晓丽高山于书春苏小丽赵亚萍田志强陈协群高广勋第四军医大学第一附属医院陕西西安710032

目的:通过分析1例具有e1a3型BCR-ABL融合基因的Ph染色体阳性成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者,结合文献回顾,阐述其临床和生物学特点。方法:采用骨髓细胞形态学及流式细胞术确定白血病诊断及免疫分型,常规染色体及荧光原位杂交技术检测... 详细信息

目的:通过分析1例具有e1a3型BCR-ABL融合基因的Ph染色体阳性成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者,结合文献回顾,阐述其临床和生物学特点。方法:采用骨髓细胞形态学及流式细胞术确定白血病诊断及免疫分型,常规染色体及荧光原位杂交技术检测细胞遗传学异常,实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法确定BCR-ABL融合基因类型及拷贝数,并进行系统的文献复习。结果:患者临床表现符合典型ALL特征,FISH检测核型结果示Ph染色体阳性。常规BCR-ABL分型试剂盒未检测出任何扩增曲线,进一步用BCR-ABL少见型融合基因检测试剂盒检测发现e1a3型BCR-ABL融合基因。患者给予达沙替尼联合VICP方案化疗,首次化疗达完全缓解,后巩固及强化治疗,5个月后复发,出现T315I突变,再诱导未缓解,于发病6月后因感染死亡。结论:少见型e1a3型BCR-ABL融合基因可见于典型Ph染色体阳性ALL患者并产生异常的RQ-PCR扩增条带。结合文献复习,单纯e1a3型Ph染色体阳性ALL治疗反应及预后与其他类型者间未见明显异常,但伴有T315I突变者预后仍较差。

关键词： BCR-ABL e1a3 Ph染色体急性淋巴细胞白血病 T315I突变

新型冠状病毒肺炎康复者恢复期血浆中新型冠状病毒核酸检测方法的验证

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国际生物制品学杂志 2021年第1期44卷 7-12页

作者：王月喻剑虹刘莹罗艳郭佳茹张林林李璞赵传波陈玲向阳张雪陈鄂湘彭干李耀雄何彦林李策生国药集团武汉血液制品有限公司质量控制室 430207 国药集团武汉血液制品有限公司质量保证室 430207 国药集团武汉血液制品有限公司质量管理部 430207 国药集团武汉血液制品有限公司科研开发部 430207

目的对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸检测方法进行系统性验证。方法根据血浆样本实际情况,并结合试剂盒要求,建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时... 详细信息

目的对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸检测方法进行系统性验证。方法根据血浆样本实际情况,并结合试剂盒要求,建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时荧光定量PCR检测方法,并从专属性、检测限(limit of detection, LOD)、重复性及中间精密度对该方法进行系统性的验证,对20份COVID-19康复者恢复期血浆样本进行性能确认。结果专属性:阳性样本及阴性样本均能被有效检出;检测限:1×LOD~2×LOD企业参考品19次检测开放阅读框1a/b和/或核衣壳蛋白基因为阳性;重复性和中间精密度:两种阳性对照基因以及内部质控在不同荧光通道的循环阈值的相对标准偏差均符合要求。性能确认:康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测结果均为阴性。结论该检测方法专属性强、稳定可靠、重复性好,适用于COVID-19康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测。

关键词：新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒核酸检测恢复期血浆

WISP1基因多态性与肺癌易感性及铂类药物化疗敏感性的关系

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肿瘤药学 2013年第6期3卷 479-479页

作者：陈娟尹继业王瑛李湘平郑艺钱晨月刘昭前中南大学临床药理研究所遗传药理学湖南省重点实验室湖南长沙410078

wnt诱导信号通路蛋白1（wntinduciblesignalingpathwayprotein1，WISPl）是生长因子CCN家族的成员。前期研究发现WISPl基因多态性与多种肺疾病的发生发展相关，包括哮喘、急性肺损伤等。本研究旨在探索WISPl基因多态性是否与肺癌易感性... 详细信息

wnt诱导信号通路蛋白1（wntinduciblesignalingpathwayprotein1，WISPl）是生长因子CCN家族的成员。前期研究发现WISPl基因多态性与多种肺疾病的发生发展相关，包括哮喘、急性肺损伤等。本研究旨在探索WISPl基因多态性是否与肺癌易感性及肺癌铂类药物化疗敏感性相关。我们在中南大学湘雅医院收集了325例肺癌患者及254例健康对照血样。根据实体瘤化疗敏感性评价指南（RECIST）筛选出118例化疗敏感和174例化疗耐药的患者。所有血液样本均用Promega公司生产的基因组DNA纯化试剂盒提取基因组DNA。我们根据以下原则挑选了47个候选单核苷酸多态性位点（singlenucleotidePolymorphism，SNP）：（1）在中国人群中最小等位基因频率（MinorAlleleFrequency，MAF）不小于5％；（2）2基因区域的标签SNP；（3）位于启动子、3’非翻译区（UTR）和外显子区的SNPs。基因区域的标签SNPs（r^2≥0．8）运用Haploview4．2软件来挑选，所有SNPs都通过飞行质谱（sequenom）方法进行分型。所有SNP位点都进行Hardy—Weinberg平衡检验，并通过非条件Logistic回归计算OR值来评价多态与肺癌易感性及化疗敏感性的关系。OR值的计算校正了以下因素：年龄、性别、吸烟状况、肿瘤病理类型、肿瘤分级和化疗方案，并且运用Bonferroni校正法进行多重检验校正。所有统计分析采用SPSS130和PLINK1．07软件完成。经统计学分析，我们发现rs2977549与非小细胞肺癌患者化疗敏感性显著相关（P≤0．001），并且与小细胞肺癌患者化疗敏感性（P=0．017）及肺癌易感性（P=0．026）也具有相关性，但后两者经校正后差异无统计学意义。因此，我们认为WISPrs2977549有可能是非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性的一个诊断标志物。

关键词：化疗敏感性肺癌易感性基因多态性铂类药物条件Logistic 单核苷酸多态性位点非小细胞肺癌中南大学湘雅医院

实时荧光核酸恒温扩增检测技术辅助诊断肺外结核的临床价值

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中国防痨杂志 2018年第10期40卷 1066-1070页

作者：聂晓平李桓杨洪英罗明杨国强周刊黄正谷王鹏森廖传玉张汇征周刚陈玉陈耀凯石涛李同心重庆市公共卫生医疗救治中心检验科 400036 重庆市公共卫生医疗救治中心质量管理科 400036 重庆市公共卫生医疗救治中心康复医学科 400036 重庆市公共卫生医疗救治中心中心实验室 400036 重庆市公共卫生医疗救治中心普通外科与骨科 400036 重庆市公共卫生医疗救治中心病案室 400036 重庆医科大学附属第三医院骨科 400036

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing，SAT）辅助诊断肺外结核的价值。方法收集2016年1月至2017年12月期间重庆市公共卫生医疗救治中心结核科、普通外科与骨科收治的482例患者肺外样本（主... 详细信息

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing，SAT）辅助诊断肺外结核的价值。方法收集2016年1月至2017年12月期间重庆市公共卫生医疗救治中心结核科、普通外科与骨科收治的482例患者肺外样本（主要为病变部位的脓液或手术取出物），根据患者病历记录的临床诊断分为肺外结核（试验组，433例）和排除结核病的其他疾病（对照组，49例）。所有标本同步采用培养法（联合罗氏培养法和BACTECMGIT960液体培养法两种方法，只要其中一种培养阳性就视为“培养法”结果为阳性）和SAT检测结核分枝杆菌，并对培养法阳性、SAT检测结果阴性的标本进行菌种鉴定。分别与培养法、患者临床诊断比较，并分析SAT检测的敏感度、特异度和临床辅助诊断肺外结核的价值。采用SPSS13．0软件进行分析，计数资料采用χ2检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果试验组127例培养法阳性的标本中TB-SAT检测阳性107例，阴性20例；306例培养法阴性的患者中Tt-SAT检测阳性73例，阴性233例。对照组1例标本培养法阳性、TB-SAT检测阴性，其余48例标本培养法与TB-SAT检测均为阴性。以培养法为标准，SAT检测MTB的敏感度、特异度分别是83．6％（107／128）、79．4％（281／354）。与患者临床诊断相比，则培养法的敏感度、特异度分别为29．3％（127／433）、98．0％（48／49）；SAT检测MTB的敏感度、特异度分别为41．6％（180／433）、100．0％（49／49）。培养法检测阳性率为29．3％（127／433），SAT法检测阳性率为41．6％（180／433），两者检测阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=14．17，P〈0．05）。结论SAT检测技术辅助诊断肺外结核具有方便快速、检出率高、敏感度和特异度高等优势，具有较高的临床价值。

关键词：分枝杆菌,结核核酸扩增技术实验室技术和方法对比研究肺外结核

Eg犬粪抗原与多克隆抗体结合的条件筛选与纯化

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草食家畜 2020年第3期 39-50页

作者：徐晶班万里王冰洁赵莉穆尼拉·特列吾汗吴小霞陈云英段兰利艾沙江郭涛王方乌云花布于其其格张壮志新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830000 新疆畜牧科学院兽医研究所(新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心) 乌鲁木齐830000 新疆畜牧科学院乌鲁木齐830000 新疆博尔塔拉蒙古自治州博乐市畜牧兽医站新疆博乐833400 新疆博尔塔拉蒙古自治州温泉县畜牧兽医站新疆温泉县833500

包虫病又称棘球蚴病,此病是由细粒棘球绦虫引起的一类严重的人兽共患寄生虫病,它严重危害人类与家畜的健康,并对畜牧业造成危害与阻碍。了解终末宿主犬科动物粪样中细粒棘球绦虫虫体蛋白组成,寻找特异性的靶抗原能对包虫病的预防和提高... 详细信息

包虫病又称棘球蚴病,此病是由细粒棘球绦虫引起的一类严重的人兽共患寄生虫病,它严重危害人类与家畜的健康,并对畜牧业造成危害与阻碍。了解终末宿主犬科动物粪样中细粒棘球绦虫虫体蛋白组成,寻找特异性的靶抗原能对包虫病的预防和提高双抗夹心ELISA检测的敏感性与特异性提供重要依据。本文通过对缓冲溶液的筛选,多克隆血清与粪抗原结合条件的筛选,确定抗体与抗原结合最佳配比浓度,用亲和层析与凝胶层析对抗原抗体结合物纯化分离,并检测纯化后样品的敏感性和特异性。最终确定PBST和柠檬酸缓冲液都能用于溶解犬粪中细粒棘球绦虫可溶性抗原,且抗原抗体最佳结合浓度选用溶液体积不变情况下,多克隆血清占比20%与粪抗原结合。抗原抗体结合物通过凝胶层析柱在A峰(45.5~50.5 min附近)接收的样品中含有纯化的抗原抗体结合物。本研究的结果与方法可以为以后筛选鉴定靶抗原,提高粪抗原ELISA检测试剂盒的敏感性与特异性提供重要依据。

关键词：细粒棘球绦虫棘球蚴抗原抗体结合物

人碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达质粒的构建

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第四军医大学学报 1999年第5期20卷 399-403页

作者：胡大海陈璧汤朝武苏映军惠宏襄阎小君贾赤宇徐明达第四军医大学

目的：构建人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因真核表达质粒，为深入研究ｈｂＦＧＦ在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础．方法：含ｈｂＦＧＦｃＤＮＡ的ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒于大肠杆菌ＪＭ１０９内扩增... 详细信息

目的：构建人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因真核表达质粒，为深入研究ｈｂＦＧＦ在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础．方法：含ｈｂＦＧＦｃＤＮＡ的ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒于大肠杆菌ＪＭ１０９内扩增；提取及纯化ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒；经ＤＮＡ序列分析所含ｈｂＦＧＦｃＤＮＡ；限制性酶切ｈｂＦＧＦｃＤＮＡ片段，连接酶连接到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｎｅｏ内，克隆出真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈｂＦＧＦ．结果：提取及纯化的ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒含有大小正确的ｈｂＦＧＦｃＤＮＡ碱基片段，其碱基序列为编码目的基因的正确序列；凝胶电泳结果证明已将此片段正确地克隆到ｐｃＤＮＡ３－ｈｂＦＧＦ内．结论：成功地构建了ｈｂＦＧＦ基因的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈｂＦＧＦ．

关键词： hbFGF 真核表达质粒构建

异基因造血干细胞移植后人类巨细胞病毒pp65的监测及疗效、危险因素分析

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中国实验血液学杂志 2006年第4期14卷 749-754页

作者：贾晋松刘东平黄晓军吴彤刘代红张耀臣苏宏王静波周葭蕤刘强殷宇明孙瑞娟段萱陆道培北京市道培医院北京100049

本研究探讨异基因造血干细胞移植(alloHSCT)后受者外周血白细胞巨细胞病毒(CMV)pp65抗原阳性细胞数的变化及临床意义。以104例HSCT受者为研究对象,采集移植前后及恢复期受者的抗凝血标本,用CMVpp65单克隆抗体荧光免疫组织化学法检测CMV... 详细信息

本研究探讨异基因造血干细胞移植(alloHSCT)后受者外周血白细胞巨细胞病毒(CMV)pp65抗原阳性细胞数的变化及临床意义。以104例HSCT受者为研究对象,采集移植前后及恢复期受者的抗凝血标本,用CMVpp65单克隆抗体荧光免疫组织化学法检测CMV早期抗原,并进行动态观察。结果表明104例HSCT受者中29例移植后检出CMVpp65抗原阳性,检出率27.88%,其中16例为CMV血症,13例为CMV病。29例经抗病毒治疗后25例抗原转为阴性,有效率86.21%,死亡4例,病死率13.79%。CMV感染患者中,受非血缘或单倍体相合异基因HSCT的患者与受同胞全相合异基因HSCT的患者CMV感染率分别为39.29%和14.58%,两者相比较有显著性差异(P<0.05)。0-Ⅰ度急性GVHD组CMV感染的发生率为19.44%,而Ⅱ-IV度急性GVHD组为46.88%,两者间的差异有显著意义(P<0·05)。CMV抗原阳性与阴性患者的急性GVHD发生率有显著性差异(P<0·05)。结论外周血白细胞CMVpp65病毒抗原检测可作为造血干细胞移植后CMV病的监测指标,用于指导移植后抗病毒的治疗和疗效评价。

关键词：造血干细胞移植巨细胞病毒 pp65抗原荧光免疫组织化学测定

硬毛常山中EHP对人结直肠癌细胞HCT-15增殖和凋亡的影响

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云南民族大学学报（自然科学版） 2022年第1期31卷 8-14页

作者：吕典冷露芬张琪王阿英赖祺易春蝶马燕华尹俊林曾广智云南民族大学民族医药学院民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室云南昆明650500

从常山属植物硬毛常山中分离得到化合物(E)-6-(4-羟基苯基)庚-3-烯-2-酮(EHP),发现其具有较好的抑制人结直肠癌HCT-15细胞增殖活性.深入探究其抗肿瘤活性机理,发现其主要通过细胞周期阻滞,诱导HCT-15细胞的凋亡,抑制了人结直肠癌HCT-15... 详细信息

从常山属植物硬毛常山中分离得到化合物(E)-6-(4-羟基苯基)庚-3-烯-2-酮(EHP),发现其具有较好的抑制人结直肠癌HCT-15细胞增殖活性.深入探究其抗肿瘤活性机理,发现其主要通过细胞周期阻滞,诱导HCT-15细胞的凋亡,抑制了人结直肠癌HCT-15细胞增殖.采用SRB细胞活性检测法、台盼蓝染色、平板克隆实验、流式细胞仪、周期试剂盒检测、Western blot检测和Annexin-FITC/PI双染法,研究EHP抑制人结直肠癌HCT-15细胞增殖机理,发现EHP通过抑制P53、P27、P21、CDK4、Cyclin A2和Cyclin D1蛋白表达,促进蛋白CDK1、CDK2、Cyclin B1和Cyclin E1表达,阻滞肿瘤细胞停留在G2期,抑制了细胞的增殖;另外,EHP通过上调cleaved PARP1、active Caspase 9和active Caspase 3活性蛋白表达,诱导HCT-15凋亡作用.

关键词：硬毛常山增殖细胞周期凋亡