H1N1流感病毒血凝素对人肺细胞的损伤作用及机制研究

作     者：李慧瑾 李正堃 连媛媛 贺春霞 秦魏 孙丽君 孙晶莹 赵栋 曹慧玲 LI Hui-jin1,4, LI Zheng-kun2, LIAN Yuan-yuan3, HE Chun-xia1, QIN Wei1, SUN Li-jun4, SUN Jing-ying4 , ZHAO Dong1, CAO Hui-ling1

作者机构：陕西省缺血性心血管疾病重点实验室西安医学院基础与转化医学研究所陕西西安710021 陕西省人民医院中心实验室陕西西安710062 西安医学院医学技术系陕西西安710021 福建医科大学药学院福建福州350108 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2018年第18卷第6期

页      面：1029-1033页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(81202373) 陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20170408) 西安医学院2016年博士科研启动基金项目(2016DOC13) 

主　　题：H1N1流感病毒 血凝素 人胚肺成纤维细胞 线粒体 

摘      要：目的:研究H1N1流感病毒血凝素HA对人胚肺成纤维细胞的损伤作用并初步探讨其机理。方法:合成2009 H1N1的HA基因全长,分别将HA的PCR产物和pEGFP-N1质粒经Hind Ⅲ和EcoRI酶切电泳、纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α,构建真核表达质粒pEGFP-N1/HA。质粒转染293细胞,检测其转染效率,并收获细胞总蛋白进行Western blotting检测。将阳性质粒转染MRC-5细胞,CCK-8检测HA的表达对细胞增殖活性,线粒体膜电位检测试剂盒检测其对细胞的早期凋亡的影响,ATP检测试剂盒检测HA的表达对ATP水平的改变。结果:PCR电泳检测获得分子量为1700 bp左右的目的条带,菌落PCR鉴定HA片段成功插入pEGFP-N1载体。荧光显微镜下检测pEGFP-N1/HA转染293细胞有明显荧光,Western blotting结果显示pEGFP-N1/HA转染细胞有单一的目的蛋白表达。HA的表达可明显抑制MRC-5细胞活力,HA的高表达降低MRC-5细胞的线粒体膜电位及ATP水平。结论:H1N1流感病毒HA对人肺细胞的损伤作用可能与影响肺细胞的线粒体功能有关。