检索结果-南通市图书馆

作者：李琼璘兰州大学

学位级别：硕士

目的:探讨槲皮素激活核因子E2相关因子-2（Nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2）信号通路对大脑缺血再灌注损伤的作用及其机制,为减轻缺血再灌注损伤提供理论依据。方法:1.体外实验:（1）以无糖培养基与低氧工作站（5%CO,... 详细信息

目的:探讨槲皮素激活核因子E2相关因子-2（Nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2）信号通路对大脑缺血再灌注损伤的作用及其机制,为减轻缺血再灌注损伤提供理论依据。方法:1.体外实验:（1）以无糖培养基与低氧工作站（5%CO,94.5%N,0.5%O）建立大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（高分化型）pc12细胞的糖氧剥夺/再灌注（Glucose and oxygen deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,糖氧剥夺6小时,再灌注12小时,用梯度浓度的槲皮素干预。（2）CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测细胞活性,初步筛选槲皮素最佳剂量范围。（3）流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平,四甲基罗丹明乙酯（Tetramethylrhodamine,ethyl ester,TMRE）检测线粒体膜电位水平。（4）免疫荧光指示Nrf2在细胞中的位置,蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测总Nrf2与核Nrf2及其相关信号通路蛋白:Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Kelch like epichlor-ohydrin related protein 1,Keap1）、血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLC）、NAD（P）H:醌氧化还原酶1(NAD（P）H:quinone oxidoreductase 1,NQO1)、选择性自噬接头蛋白（sequestosome 1,P62/SQSTM1）的表达。（5）小干扰RNA（Small Interfering Ribonucleic Acid,si RNA）沉默Nrf2的表达,实时荧光定量pcR（Real-Time q pcR,RT-q pcR）检测m RNA的表达。（6）检测Nrf2表达被抑制后相关通路蛋白的表达。检测细胞的凋亡率、细胞内ROS水平、超氧阴离子水平,验证Nrf2是否是槲皮素的作用靶点。2.体内实验:（1）在大鼠体内用线栓法建立大脑中动脉栓塞（Middle Cerebral Artery Obstruction,MCAO）模型:栓塞2小时后恢复血流供应,再灌注72小时;再灌注开始时给予不同剂量槲皮素（10 mg/kg·bw、25 mg/kg·bw、50 mg/kg·bw）腹腔注射。（2）2,3,5-氯化三苯基四氮唑溶液（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride solution,TTC）染色检测大鼠脑梗死体积,改良神经系统缺损程度评分（Modified Neurological Severity Score Points,m NSS）进行大鼠行为学评价。（3）用免疫荧光的TUNEL（d T-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL）染色检测大脑梗死侧神经元凋亡,苏木精-伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色、尼氏（Nissl）染色检测大鼠脑皮层病理损伤情况。（4）透射电镜检测线粒体形态。（5）硫代巴比妥酸（Thibabituric Acid,TBA）法检测大鼠血清中丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量,羟胺法检测血清总超氧化物歧化酶（Total-Superoxide dismutas,T-SOD）含量。（6）免疫荧光指示Nrf2的分布与入核情况,Western Blot检测总Nrf2与其相关信号通路蛋白Keap1、HO-1、GCLC、NQO1的表达。结果:1.体外实验:（1）在常规培养条件下,与对照组（Ctrl）相比,槲皮素各剂量组的细胞活性无明显改变,差异无统计学意义;与Ctrl组相比,糖氧剥夺/再灌注（OGD/R）组的细胞活性显著下降,且差异有统计学意义（P<0.01）;与OGD/R组相比,槲皮素1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L三个剂量组细胞活性均显著提高,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）与Ctrl组相比,OGD/R组细胞凋亡率显著上升,且差异有统计学意义（P<0.01）;与OGD/R组相比,三组槲皮素干预组的细胞凋亡率均降低,其中5μmol/L剂量组的细胞凋亡率降低最明显,差异有统计学意义（P<0.01）。ROS实验结果显示,相较于Ctrl组,OGD/R组的细胞内ROS水平翻倍升高,且差异有统计学意义（P<0.01）;与OGD/R组相比,三组槲皮素干预组ROS水平均降低,5μmol/L组ROS水平下降最明显,差异有统计学意

关键词：槲皮素大鼠 pc12 MCAO OGD/R Nrf2

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

蜘蛛香化学成分及其神经保护活性

引用

中成药 2017年第4期39卷 756-760页

作者：王茹静陈银黄青雍妍张海张仕瑾陈雅兰谭玉柱成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室-省部共建国家实验室培育基地四川成都611137

目的研究蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones的化学成分及其神经保护活性。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS、HPLC制备柱,对蜘蛛香75%乙醇提取物的石油醚部位进行分离纯化,通过波谱数据鉴定所得化合物的结构。再观察其对CoCl_2诱导大... 详细信息

目的研究蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones的化学成分及其神经保护活性。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS、HPLC制备柱,对蜘蛛香75%乙醇提取物的石油醚部位进行分离纯化,通过波谱数据鉴定所得化合物的结构。再观察其对CoCl_2诱导大鼠嗜铬细胞瘤(pc12)细胞凋亡的抑制作用。结果从中分得11个化合物,分别鉴定为蜂斗菜内酯B(1)、蜂斗菜内酯D(2)、jatamanvaltrate E(3)、jatamanvaltrate A(4)、valtrate hydrine B8(5)、valeriotetrate C(6)、valtral C(7)、chlorovaltrate A(8)、β-谷甾醇(9)、β-谷甾醇乙酸酯(10)、棕榈酸(11)。化合物2、4、6、8能显著抑制pc12细胞凋亡(P<0.05)。结论化合物2为首次从败酱科植物中分离得到,化合物10为首次从该植物中分离得到,化合物2、4、6、8具有神经保护活性。

关键词：蜘蛛香化学成分分离鉴定神经保护 pc12

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

氧糖剥夺再灌注后CDK1对GRASP65及高尔基体形态的影响

氧糖剥夺再灌注后CDK1对GRASP65及高尔基体形态的影响

引用

作者：李晶南华大学

学位级别：硕士

目的:探讨在氧糖剥夺再灌注后CDK1对GRASP65及高尔基体形态的影响。方法:1.建立氧糖剥夺再灌注(OGD/R)细胞模型;2.实验分为正常对照组、OGD/R组和Roscovitine干预组(OGD/R+Roscovitine);根据再灌注时间点不同将OGD/R组和药物干预组分为0... 详细信息

目的:探讨在氧糖剥夺再灌注后CDK1对GRASP65及高尔基体形态的影响。方法:1.建立氧糖剥夺再灌注(OGD/R)细胞模型;2.实验分为正常对照组、OGD/R组和Roscovitine干预组(OGD/R+Roscovitine);根据再灌注时间点不同将OGD/R组和药物干预组分为0h、6h、12h和24h亚组;***-8法检测细胞活性和流式细胞术检测细胞凋亡率;4.荧光显微镜观察高尔基体的形态;*** blot分别检测CDK1、GRASP65和pGRASP65的蛋白水平。结果:***-8结果显示:经氧糖剥夺6h再灌注6h、12h和24h组细胞的OD值均明显低于同时间点正常对照组(P12h时间点两亚组间比较差异明显(P12h和24h组细胞凋亡率均较同时间点正常对照组明显升高(P12h和24h组细胞CDK1的表达均明显高于正常对照组(P12h和24h组细胞的pGRASP65表达水平较正常对照组明显升高(P12h和24h后,大部分的高尔基体结构出现明显的碎裂。Roscovitine干预后各亚组细胞的高尔基体形态变化情况均较同时间点OGD/R组改善。结论:氧糖剥夺再灌注后CDK1介导的GRASP65磷酸化可能是高尔基体碎裂机制之一。

关键词：氧糖剥夺再灌注 pc12 高尔基体碎裂 CDK1 GRASP65

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

编码大鼠RGMa的shRNA真核表达载体构建及其干扰效率的筛选鉴定

编码大鼠RGMa的shRNA真核表达载体构建及其干扰效率的筛选鉴定

引用

作者：殷成重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:中枢神经系统神经元缺血缺氧损伤后再生极其困难,但近年研究表明,神经元轴突在遭受缺血缺氧或机械损害后却可以在干预因素下再生[1,2],同时再生的轴突促使原受损轴突支配区域的功能恢复。鉴于离体细胞模型能更好的反映神经元轴突... 详细信息

目的:中枢神经系统神经元缺血缺氧损伤后再生极其困难,但近年研究表明,神经元轴突在遭受缺血缺氧或机械损害后却可以在干预因素下再生[1,2],同时再生的轴突促使原受损轴突支配区域的功能恢复。鉴于离体细胞模型能更好的反映神经元轴突的形态变化并便于研究者描述[3],因此为了更好的观察神经元轴突的受损和干预后的再生状态,建立准确有效的轴突模型显得必要。本研究利用无血清培养基体外培养[4]SD乳鼠海马神经元为基础,建立轴突糖氧剥夺/复氧模型,为神经元糖氧剥夺/复氧后损伤及轴突再生的研究提供实验依据。方法:1.海马神经元培养无菌条件下取出生后24 h内的乳鼠大脑海马,使用巴氏管和340目筛网吹打及过滤,制备细胞悬液,接种于细胞培养板中[5]。在37℃、5%的二氧化碳培养箱(美国Thermo公司)中培养,2.神经元鉴定及纯度检测海马神经元培养6 d后,NSE单克隆抗体免疫组化染色鉴定神经元。阴性对照用0.01 mol/L PBS代替一抗。镜下观察,阳性细胞胞浆内有棕黄色颗粒沉着。3.原代神经元糖氧剥夺/复氧损伤模型制备[6]神经元以24孔培养板培养,实验分为正常对照组、糖氧剥夺/复氧组。正常对照组在常规条件下继续培养;糖氧剥夺/复氧组分别为糖氧剥夺0.5、1.0、1.5 h后再复氧。制备模型前以平衡盐缓冲液冲洗数次,使葡萄糖终浓度小于1 mmol/ml。每孔加入100 ml无糖D-Hanks液,放人缺氧盒内,持续缓慢通人含有95% N2、5% CO2的混合气体分别0.5、1.0、1.5 h,取出并吸弃平衡盐缓冲液,换以完全培养基孵育,置人CO2培养箱孵育。4.乳酸脱氢酶(LDH)的测定于不同时间点收集各组神经元的培养液,使用LDH试剂盒进行乳酸脱氢酶检测,使用550型全自动酶标仪(美国BioRad公司)。在波长440 nm处检测各管吸光度。结果:1.神经元生长及鉴定使用倒置相差显微镜观察,接种初期海马神经元呈圆形, 3～4 d细胞有明显增长的突起并相互连接形成稀疏的网络, 6 d神经元细胞体进一步增大,突起增粗增长,连接成网,细胞体突起光晕明显,立体感及折光性强。第6天的细胞,NSE免疫组化染色(DAB),细胞被染成棕褐色为阳性,不被染色的为阴性细胞。2.糖氧剥夺/复氧对海马神经元存活率以及LDH的影响,与正常对照组细胞比较,糖氧剥夺/复氧3组细胞培养液中LDH活力均升高且有统计学意义(P12.30,65.97±16.91,61.48±9.37,57.73±16.74(um),且各组之间轴突长度比较有统计学意义(P<0.05)。结论:在糖氧剥夺/复氧模型的建立过程中,发现糖氧剥夺0.5 h再复氧后,神经元存活率较高,同时轴突有变短尚未完全消失,由此显示成功了建立神经元的轴突糖氧剥夺模型。目的RGMa为一种膜蛋白,能特异性的与其受体Neogenin结合,激活下游的Rho kinas途径使神经元生长锥崩解,从而抑制了受损轴突的再生。目前已报道使用RGMa蛋白抗体干预RGMa功能从而达到促进受损后轴突再生的目的,而RNA干扰技术能在在基因水平上降解编码RGMa蛋白的mRNA,降低其蛋白的翻译从而达到阻断RGMa-Neogenin途径。本研究中,在离体细胞模型上面,使用RNA干扰技术,检测RNAi对RGMa蛋白表达的影响,并筛选出最佳沉默效率的RNAi片段,为后继的在体动物实验打下基础。方法1.表达RGMa-shRNA质粒设计、构建和酶切鉴定根据GenBank中RGMa的核苷酸序列(No. NM01107524)和shRNA设计原则,运用RNA设计软件设计3对shRNA将化学合成的正义链和反义链加热到94摄氏度退火获得上游形成BamHI位点、下游形成HindlII位点的双链DNA片段形成双链的siRNA表达模板。以BamHl、HindlII双酶切质粒载体pgensil线性化,琼脂糖凝胶回收试剂盒回收酶切片段。将退火获得的双链DNA片段和酶切载体在T4 DNA连接酶作用下,4摄氏度过夜连接。取5ul连接产物热休克法转化入感受态大肠杆菌DH 5a,均匀涂抹在含3

关键词：糖氧剥夺/复氧模型海马神经元体外培养轴突 RNAi 质粒转染 pc12

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

缺氧对二价金属转运体（DMT1）表达的影响

缺氧对二价金属转运体（DMT1）表达的影响

引用

作者：张蕾南通大学

学位级别：硕士

目的：研究不同的缺氧方法对培养细胞二价金属转运体(Divalent metal transporter 1，DMTl)表达的影响，初步探讨低氧诱导因子1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)与DMTl两种异构体(+IRE DMTl和-IRE DMTl)之间的关系。方法：用CoCl诱... 详细信息

目的：研究不同的缺氧方法对培养细胞二价金属转运体(Divalent metal transporter 1，DMTl)表达的影响，初步探讨低氧诱导因子1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)与DMTl两种异构体(+IRE DMTl和-IRE DMTl)之间的关系。方法：用CoCl诱导pc12细胞及HepG2细胞缺氧，检测DMTl的表达，确定对COCl缺氧敏感的细胞株。在此基础上用Western Blot法检测低氧(1％O)及呼吸链抑制剂叠氮钠(NaN)和鱼藤酮(Rotenone)对该细胞株HIF-1α及DMTl表达的影响，用免疫细胞化学法检测低氧(1％O)对HIF-1α及DMTl在该细胞内分布的影响。结果： 1．用不同浓度的COCl(0.025mM、0.05mM、0.125mM、0.25mM、0.5mM、1mM)处理pc12细胞4小时后，其+IRE DMTl的表达量与未用COCl处理时相比，均无明显改变。 ***2细胞在经过不同浓度的COCl处理4小时后，随着COCl浓度的增加，HIF-1α及DMTl的两种异构体的表达均逐渐增加。当COCl浓度为1mM时HIF-1α表达量最大，在COCl浓度为0.5mM时+IRE DMTl和-IRE DMTl的表达量达到最高值。 ***2细胞HIF-1α在低氧(1％O)处理1小时开始即有表达，3小时至6小时其表达量达到高峰。+IRE DMTl在低氧处理1小时也有增加，6小时达到最高峰。-IRE DMTl在低氧3小时开始表达有明显增加，6小时达到最高并持续至12小时处。 ***2细胞HIF-1α在低氧6小时有明显表达，复氧24小时后，HIF-1α被降解。复氧24小时后，+IRE DMTl的表达也明显少于单纯低氧6小时的表达量，而-IRE DMTl的表达量却无明显改变。 ***2细胞用NaN处理1小时后，DMTl的两种异构体在NaN浓度为10mM及20mM时，其表达量均比对照组明显增加;用rotenone处理24小时后，+IRE DMTl在rotenone浓度为20μM时，其表达量与对照组相比有明显的增加，-IRE DMTl在rotenone浓度为1μM及20μM时，其表达量与对照组相比均无明显改变;NaN和rotenone都不能使HepG2细胞HIF-1α明显表达。 6．在常氧环境中，DMTl两种异构体在HepG2细胞胞浆及胞核中均匀分布，HIF-1α无明显表达。低氧(1％O)可使+IREDMTl聚集于胞浆及核膜上，而原本位于胞浆中的-IRE DMTl更趋向于胞膜，胞核中的-IRE DMTl也有向核膜集中的趋势，但不如+IRE DMTl明显，HIF-1α则在细胞核中大量表达。结论： ***和低氧(1％O)可使HepG2细胞的HIF-1α蓄积和DMTl两种异构体的表达增加，并且三者的变化趋势基本一致，提示DMTl的表达可能受到HIF-1的调控，DMTl可能是HIF-1的下游基因。 ***和rotenone虽不能使HepG2细胞HIF-1α产生蓄积，但却能使DMTl的表达发生变化，提示DMTl表达的调控可能除HIF-1之外还有其它的调控途径。 3．低氧(1％O)可使HepG2细胞+IRE DMTl和-IRE DMTl在细胞内的分布发生不同的改变，提示低氧对DMTl两种异构体在细胞内分布的调节不同，这可能与两种异构体的功能不完全一致有关。

关键词：低氧 Divalent Metal Transporter 1(DMT1) Hypoxia Inducible Factor-1 (HIF-1α) CoCl2 HepG2 pc12

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

心肌缺血大鼠颈部交感神经节神经元P2X7受体介导电生理变化的研究

心肌缺血大鼠颈部交感神经节神经元P2X7受体介导电生理变化的研究

引用

作者：孔繁君南昌大学

学位级别：硕士

研究背景和目的：心交感神经节后神经元位于颈上神经节(SCG)或星状神经节(SG)。临床研究发现切除SCG和SG等交感神经节可缓解500%冠心病患者的心绞痛症状，表明颈部交感神经参与心肌缺血伤害性传递。心肌缺血产生的炎性介质包括三磷酸腺... 详细信息

研究背景和目的：心交感神经节后神经元位于颈上神经节(SCG)或星状神经节(SG)。临床研究发现切除SCG和SG等交感神经节可缓解500%冠心病患者的心绞痛症状，表明颈部交感神经参与心肌缺血伤害性传递。心肌缺血产生的炎性介质包括三磷酸腺苷(ATP)和缓激肽等可兴奋心脏感觉传入神经并将信息传递到大脑中枢，随后兴奋交感传出神经引起心率加快和血压升高等交感兴奋性反射的现象。本实验室的前期实验证明颈部交感神经节P2X，P2X和P2X/3受体参与心肌缺血信号传递。目前尚无颈部交感神经节P2X受体参与心肌缺血损伤性交感兴奋反射传递的文献报道，P2X受体在心肌缺血引发的交感反射中是否产生作用及可能机理尚不清楚。本实验拟通过观察心肌缺血大鼠颈上交感神经节细胞介导的电生理变化、颈部交感神经节、心肌P2X受体mRNA变化和pc12细胞P2X受体介导的细胞钙变化，了解P2X受体在心肌缺血引发的交感兴奋反射中的作用及可能机理，为心肌缺血损伤的防治寻找新的药物作用靶点。方法：随机将实验大鼠分为生理盐水对照组、心肌缺血模型组、假手术组和结扎冠状动脉P2X受体拮抗剂(oxATP)干预组。⑴结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌缺血动物模型，通过Real-time pcR方法观察以上各组大鼠颈上、星状交感神经节及心肌P2X受体mRNA表达的变化。⑵全细胞膜片钳实验观察心肌缺血对P2X受体激动剂在颈部交感神经细胞激活电流的影响，并了解P2X受体拮抗剂对此电流的作用。⑶体外建立pc12细胞“缺糖缺氧”模型，拟体内缺血模型。用小干扰RNA技术特异性敲低“缺糖缺氧”培养条件下的pc12神经细胞的P2X受体，合成的可抑制相关基因的一群小干扰RNA片段转染到培养的神经细胞中，用Real-time pcR技术验证敲低效果。⑷通过采用Ca特异性荧光探针fura-2/AM并用荧光分光光度法测定“缺糖缺氧”条件下pc12神经细胞分别在P2X受体激动剂BzATP、P2X受体拮抗剂oxATP、siRNA-P2X和ERK抑制剂U0126处理后，观察P2X受体激动剂ATP和BzATP引起pc12细胞内钙离子浓度([Ca]i)峰值的变化。结果：⑴Real-time pcR结果显示心肌缺血模型组大鼠颈上、星状交感神经节和心肌P2X受体mRNA的表达高于生理盐水对照组、假手术组、结扎冠状动脉P2X受体拮抗剂干预组(n=10)(p0.05)。⑵全细胞膜片钳实验结果显示，心肌缺血大鼠颈部交感神经节细胞P2X受体激动剂激活电流明显高于对照组;P2X受体拮抗剂呈剂量依赖性地抑制颈部交感神经节细胞P2X受体激动剂激活电流，且同一浓度P2X受体拮抗剂对心肌缺血大鼠颈部交感神经节细胞P2X受体激动剂激活电流的抑制作用明显高于对照组;ATP-激活电流的电流-电压关系曲线(I-V曲线)显示，心肌缺血组与对照组的电流翻转电位值均在0mV左右。⑶小干扰RNA敲低实验结果显示缺糖缺氧组与缺糖缺氧+siRNA-NC组pc12细胞P2X受体mRNA表达水平无明显差异(p>0.05)，说明Lipofectamine2000试剂不会对P2X受体表达水平造成影响;缺糖缺氧+siRNA-P2X组与缺糖缺氧组pc12细胞相比，P2X受体mRNA表达水平明显降低(ppc12细胞[Ca]i增高，出现一个峰值;缺糖缺氧+BzATP组pc12细胞起始[Ca2+]i较高;缺糖缺氧+oxATP组、缺糖缺氧+siRNA-P2X组和缺糖缺氧+U0126组可以部分抑制100μM ATP引起的[Ca]i增高程度，与缺糖缺氧组相比，[Ca]i峰值分别降低28.8%、37.4%和49.9%(ppc12细胞[Ca]i增高，出现一个峰值;缺糖缺氧+BzATP组pc12细胞起始[Ca]i较高;缺糖缺氧+oxATP组、缺糖缺氧+siRNA-P2X组和缺糖缺氧+U0126组可以明显抑制100μM BzATP引起的[Ca2+]i增高程度，与缺糖缺氧组相比，[Ca]i峰值分别降低68.9%、70.7%和55.1%(p<0.05, n=5)。结论：实验结果表明，心肌缺血后颈上、星状神经节和心肌的P2X受体mRNA表达上调，PKC、ERK1/2信号转导途参与P2X受体兴奋诱发的病理生理变化。心肌缺血使P2X受体激动剂在颈部交感神经细胞激活电流增大，P2X受体拮抗剂明显抑制增大的P2X受体激动剂激活电流。缺糖缺氧状态下，P2X受体兴奋导致ERK1/2磷酸化可引发[Ca]i增加，P2X受体抑制

关键词：颈上神经节星状神经节 pc12 细胞 P2X7受体激动剂 P2X7受体拮抗剂全细胞膜片钳技术

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

乳香—没药配伍有效部位的制备工艺研究及其对缺血性中风的保护作用

乳香—没药配伍有效部位的制备工艺研究及其对缺血性中风的保护作...

引用

作者：缪晓冬南京中医药大学

学位级别：硕士

本研究在国家自然科学基金(No.30973885)及江苏省中药资源产业化过程协同创新中心重点项目(***-2015-12)的支持下完成,主要围绕乳香、没药有效部位的制备工艺优化,有效部位配伍对缺血性中风的改善作用与机制研究等,以期为该药对的进一... 详细信息

本研究在国家自然科学基金(No.30973885)及江苏省中药资源产业化过程协同创新中心重点项目(***-2015-12)的支持下完成,主要围绕乳香、没药有效部位的制备工艺优化,有效部位配伍对缺血性中风的改善作用与机制研究等,以期为该药对的进一步开发利用奠定基础。主要研究内容与结果简述如下:一、文献研究较为系统的归纳整理了乳香和没药的主要有效成分及药理活性,分析发现,乳香的主要有效成分为乳香酸类成分,包括五环三萜、大环二萜类成分等;没药的主要有效成分包括单萜类、倍半萜类、二萜类、三萜类,而以倍半萜类成分为主。现代药理活性研究表明,乳香、没药均具有抗炎、镇痛、抗肿瘤等多种生物活性。为乳香、没药的进一步开放利用提供了科学依据。通过对缺血性中风的中医认识、病因病机及中风损伤的机制进行归纳总结,发现该疾病与去极化、钙超载、氧化应激、细胞凋亡及炎症反应等关系密切,为试验研究提供了理论指导。二、乳香没药有效部位的制备工艺研究1.乳香-没药配伍的中医临床应用特点分析通过数据挖掘方法分析乳香、没药药对在方剂中的配伍应用规律,将中医方剂数据库中含有乳香、没药的2236首方剂信息读取出来。统计出乳香-没药的配伍比例有50种,其中1:1、2:1、1:2、2:3、3:2、5:3、3:4等7个比例出现频次较高,而以1:1形式配比的方剂高达1863首,故进一步围绕乳香-没药为1:1的方剂,对其所治疗疾病的科属、方剂功效和剂型及其网络关联性进行挖掘分析。结果发现,乳香、没药配伍多用于外科疾病,主要功效为活血化瘀、敛疮生肌、止痛、祛风、消痈散结、解毒、接骨续筋等,主要剂型为散剂、丸剂、膏剂等。2.乳香-没药不同配伍比例化学成分溶出分析应用UPLC-TQ/MS联用技术对乳香-没药不同配伍比例(1:1、1:2、2:1、2:3、3:2、3:4、5:3)的化学成分溶出变化进行分析。结果表明,乳香-没药不同配伍比例的化学成分溶出量不同,且配伍比例为1:1和2:1时溶出化学成分种类最为丰富,成分含量最高或较高。3.乳香中乳香三萜酸类成分的提取纯化工艺优化采用UPLC-TQ/MS检测,以乳香中13个乳香三萜酸类成分(3-羰基甘遂-8,24-二烯-21-酸、3α-乙酰甘遂-7,24-二烯-21-酸、3-羟基甘遂烷-8,24-二烯-21-酸、乙酰11α-甲氧基-β-乳香酸、3α-羟基甘燧烷-7,24-二烯-21-酸、11-酮基乳香酸、3-O-乙酰基-α-乳香酸、3α-乙酰氧基-羊毛甾-8,24-二烯-21-酸、3β-乙酰氧基-5α-8,24-羊毛甾二烯-21-酸、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、3-乙酰基甲氧基甘遂-8,24-二烯-21-羧酸、α-乳香酸、β-乳香酸)的提取量及浸膏得率为评价指标,通过单因素及响应曲面考察提取方法、提取溶剂、料液比、提取时间及提取次数对乳香提取工艺的影响;采用碱溶酸沉法纯化乳香提取物并对纯化工艺参数进行单因素和正交试验考察,确定最佳纯化工艺为:95%乙醇20倍量回流提取4次,每次62 min为最佳提取工艺;以碱液pH为12～13溶解,在0～4℃用酸液pH12-环氧吉马烷-1(10),7,11-三烯-6-酮、2-甲氧基-5-乙酰基-呋喃吉马烷-1(10)-烯-6-酮)的提取量及浸膏得率为评价指标,通过单因素及响应曲面考察提取方法、提取溶剂、料液比、提取时间及提取次数对没药提取工艺的影响;采用硅胶柱层析法纯化没药提取物并对纯化工艺参数进行单因素试验考察,确定最佳纯化工艺为:92%乙醇7倍量回流提取2.5 h/次,提取2次为最佳提取工艺;将乙酸乙酯部位用300-400目硅胶纯化,上样量为1:40,先用石油醚(PE)除杂,再用石油醚-乙酸乙酯(PE:EA)20:1的溶液作为洗脱剂洗脱3-6 BV为最佳纯化工艺,倍半萜类成分纯度可达 61.43%。三、乳香-没药有效部位配伍对SD大鼠MCAO模型的改善作用及机制研究1.乳香-没药有效部位配伍对SD大鼠MCAO模型的改善作用采用中脑动脉闭塞(MCAO)建立SD大鼠缺血性中风模型,通过神经功能评分确定模型建立成功,即模型大鼠出现提尾时损伤对侧前肢不能伸直;向损伤侧旋转;向对侧倾倒;不能自发行走,意识不清等。以乳香总三萜酸与没药倍半萜(BA-MS)的不同配伍比例(10:1、5:1、20:1,由药材配伍比例1:1、1:2、2:1折算)每天给药两次,给药3天后,收集血浆、尿液及脑/肺样本,分别进行生化指标测定、脑梗死面积测定,脑、肺组织病理学分析及Western blot法分析脑组织中AngI/AngII/Tie2信号通路与TLR4/N

关键词：乳香三萜酸没药倍半萜不同配比缺血性中风 MCAO大鼠神经炎症血管生成生长 pc12 BV2 网络药理

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于石墨烯复合支架的3D生物打印制备及检测

基于石墨烯复合支架的3D生物打印制备及检测

引用

作者：彭俊大连理工大学

学位级别：硕士

随着工业机械化和运输业的发展,人们获得高风险工作的机会越来越多,出现脊髓和周围神经损伤的概率大大增加,周围神经损伤已成为世界上最严重的健康问题之一。神经系统修复自身神经损伤的能力有限,通常需要外部辅助治疗。目前,临床修复... 详细信息

随着工业机械化和运输业的发展,人们获得高风险工作的机会越来越多,出现脊髓和周围神经损伤的概率大大增加,周围神经损伤已成为世界上最严重的健康问题之一。神经系统修复自身神经损伤的能力有限,通常需要外部辅助治疗。目前,临床修复周围神经缺损的主要方法是断续再连接,但断续时过度紧张可能会导致继发性神经元坏死。异体或异种神经是理想的神经源,但是治疗失败通常会导致严重的免疫排斥。因此,修复神经是最具挑战性的领域之一。组织工程学是生命科学和材料科学的跨学科领域,并为神经细胞的植入提供了潜在的替代平台。3D生物打印可以将混有细胞的生物材料准确地构建为具有复杂结构的仿生支架。与传统构造组织工程仿生支架的方法相比,它具有更丰富和多样的支架形态,可支持更广泛的应用。由于其在材料制备中具有快速的原型制作和控制能力,因此3D生物打印为开发可用于治疗特定患者的不同类型的神经支架开辟了新的前景,3D生物打印技术在医疗组织工程应用中具有巨大潜力。3D生物打印技术研发制备功能性活组织的一大重点是需要有优异性能的生物墨水。本文首先通过离子液体分散石墨烯(Gr),制备石墨烯分散体系,使得石墨烯的团聚效应大大减少,有利于后续水凝胶的打印。之后将明胶(Gel)和海藻酸钠(SA)混入石墨烯分散体系得到混合生物墨水,使用流变仪等仪器对生物墨水进行一些表征分析。进行了可打印性分析,得到最佳打印性条件为:Gel=6%、SA=2%且Ca=2%;就材料的流变性而言,交联前后生物墨水的粘弹性和稳态粘度有明显的变化,海藻酸钠经过Ca交联之后使得支架有稳定的结构和较强的力学性能,从而其粘弹性和稳态粘度都有明显的增强;海藻酸钠溶液的储能模量随温度的变化不大,说明海藻酸钠温敏性较弱,生物墨水的温敏性取决于明胶,而明胶的储能模量随温度的降低而明显增高,在22℃左右会有一个临界点,说明生物墨水在此种状态下开始慢慢凝胶;用傅里叶红外光谱仪检测交联反应的结果,检测发现有2940 cm、890 cm和950 cm波数这三个特征吸收峰;为了打印出最佳状态的支架,本文参考生物墨水的综合性能对打印机的针筒和平台温度、打印速度、打印压力及填充间距等等参数进行了调节。本文进而介绍了复合支架的制备及表征。由于3D打印操作,支架会形成排列整齐的大孔,孔径大致为300微米,支架还会因为自身水凝胶的特性,形成直径在50到100微米的小孔,高度多孔的支架能够在培养细胞时使得营养物质顺利传递以及清除细胞代谢垃圾,这样可以更好的培养细胞。石墨烯的添加增加了支架的机械强度,但是机械强度并未无限增加。支架的吸水率随石墨烯的增加略有下降,因此含有石墨烯的支架的吸水能力降低。96小时后,Gel/SA,0.02%Gr/Gel/SA,0.08%Gr/Gel/SA和0.2%Gr/Gel/SA支架的吸水率分别为1100.5±18.96%,1041.2±11.21%,1019.5±29.65%和1031.8±15.54%。添加少量石墨烯不会引起支架孔隙率的显着变化,然而,随着石墨烯含量的增加,支架的孔壁变厚,这导致支架的孔隙率略微降低。Gel/SA,0.02%Gr/Gel/SA,0.08%Gr/Gel/SA和0.2%Gr/Gel/SA支架的孔隙率分别为89.01±1.02%,89.98±0.56%,76.99±2.41%和65.47±3.15%。石墨烯的添加增加了材料的无机含量,并使材料的亲水性变差,所以孔隙率变小,导致降解变慢,最终导致支架降解率降低。Gel/SA,0.02%Gr/Gel/SA,0.08%Gr/Gel/SA和0.2%Gr/Gel/SA支架的降解15天之后的降解率分别为70.32%,62.79%,58.25%和52.54%。随着石墨烯含量的增加,支架的接触角变得越来越大,表明该材料的亲水性变得越来越差。Gels/SA,0.02%Gr/Gel/SA,0.08%Gr/Gel/SA和0.2%Gr/Gel/SA支架的接触角分别为56.21±1.24°,64.38±2.45°,96.20±0.25°和116.37±3.54°。本文使用的pc12细胞生长良好,细胞状态稳定,可以很好的进行实验。当在支架上接种pc12细胞5天后,取出细胞—支架复合物,处理好固定在显微镜下,可以观察到细胞在支架上很好的增殖,在支架上黏附的细胞清晰可见,细胞生长旺盛的支架还可以看到在叠层生长。细胞在支架上培养五天后,用荧光显微镜对细胞在支架上生长做了定性的考察,观察的结果显示,pc12细胞具有很好的生长状态。在荧光图片中可以观察到大量的活细胞,几乎看不到死细胞,细胞已经在支架上铺展生长开来,开始生长到细胞的内部;通过Calcein-AM染色、PI染色和Hochest 33258三种染色发现,可以定性的看出支架上的细胞生长良好,具有很高的活性;在每组支架上生长的细

关键词： 3D打印石墨烯支架明胶海藻酸钠 pc12

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

组织工程支架生物打印及细胞培养研究

组织工程支架生物打印及细胞培养研究

引用

作者：亓春伟大连交通大学

学位级别：硕士

组织工程学主要涉及细胞、支架和生长因子三部分内容。在组织工程中,组织工程支架是细胞附着的场所,使细胞在支架上增殖、分化,用来修复、替代缺损的组织和器官。与传统的组织工程支架制备方法相比,快速成型技术具有能够按设计的空间结... 详细信息

组织工程学主要涉及细胞、支架和生长因子三部分内容。在组织工程中,组织工程支架是细胞附着的场所,使细胞在支架上增殖、分化,用来修复、替代缺损的组织和器官。与传统的组织工程支架制备方法相比,快速成型技术具有能够按设计的空间结构进行打印,可精确控制支架的孔隙率,孔径大小,保证孔隙连通性的优点,其制备出的组织工程支架更有利于细胞在支架上进行增殖、分化。本文通过生物3D打印快速成型技术制备组织工程支架,进行三维细胞培养,观察细胞在支架上的生长状况,为后期进行抗药性检测奠定基础。在分析组织工程中应用的相关材料与组织工程支架材料应具有的相关特性的基础上,结合生物打印具有的特性,选择出支架材料,测试配置材料的相关特性,以材料粘度和生物打印机的挤出长度为依据来进行材料配比优化。依据理想组织工程支架应具有的相关特性进行组织工程支架的宏观结构和微观结构设计,并对打印过程进行流体仿真分析,得出速度矢量图、胶体流线图,胶体压力分布图以及出入口压力与出口速度的关系图,为进一步优化打印参数奠定基础。采用3D-Bioplotter生物打印机,依据流体仿真分析的结果,进行打印参数优化,得出打印适合打印的工艺参数,以优化配比的材料和设计的打印结构,制备不同间距、空间结构的组织工程支架。对制备的组织工程支架进行预处理,进行复苏细胞,将pc12细胞接种到组织工程支架上,进行三维细胞培养,观察细胞在支架上的生长状况,观察细胞的形态与分布,以及细胞在支架上的增长周期。

关键词：组织工程支架 3D生物打印细胞培养 pc12

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

梓醇对缺血损伤神经细胞的保护作用研究

梓醇对缺血损伤神经细胞的保护作用研究

引用

作者：汪卓大连理工大学

学位级别：硕士

本研究旨在探讨梓醇对缺血损伤神经细胞的保护作用及机制。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell line，pc12)是常用的神经生物和神经化学研究的细胞模型。本文以pc12细胞建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型，利用MTT(3-(4，5-d... 详细信息

本研究旨在探讨梓醇对缺血损伤神经细胞的保护作用及机制。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell line，pc12)是常用的神经生物和神经化学研究的细胞模型。本文以pc12细胞建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型，利用MTT(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenylterazolium bromide)法检测了梓醇对缺血损伤的pc12细胞的保护效应;采用LBH(lactate dehydrogenase)法和荧光染色法，检测了梓醇对细胞膜的影响。结果表明梓醇对损伤细胞具有明显的保护活性，稳定了膜结构，保护细胞免受损伤。应用生物化学方法，借助于紫外分光光度仪、荧光酶标仪和流式细胞技术，观察梓醇对pc12细胞缺血损伤抗氧化酶SOD(superoxide dismutase)、GSH-Px(glutachione peroxidase)和iNOS酶活性以及脂质过氧化物MDA(malondialdehyde)和ROS含量，线粒体膜电位，P53和Bcl-2蛋白，凋亡通路下游半胱氨酸酶-3(Caspase-3)状态的影响。结果显示，梓醇可明显提高SOD和GSH-Px酶活性，降低iNOS酶活性以及MDA和ROS含量，提高Bcl-2蛋白的表达和线粒体膜电位，抑制P53蛋白的表达和Caspase-3的活性，表明梓醇保护机制可能是提高内源性抗氧化酶活力，增加自由基清除，抑制自由基生成，降低自由基的含量，并通过抑制线粒体介导的细胞凋亡途径，虽口通过调节线粒体膜上Bcl-2和P53蛋白表达和线粒体膜电位来实现的。同时，梓醇抑制caspase-3的活化，从而抑制了pc12细胞的凋亡。为了进一步说明梓醇对缺血诱导神经细胞的保护作用，本文采用了皮层神经元建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型，观察梓醇对皮层神经元细胞缺血损伤抗氧化酶SOD、GSH-Px和iNOS酶活性以及脂质过氧化物MDA的含量的影响。结果显示，梓醇可明显提高SOD和GSH-Px酶活性，降低MDA含量和iNOS酶活性，进一步说明梓醇对缺血诱导神经细胞的保护作用。

关键词：梓醇 pc12 皮层神经元缺血再灌注细胞凋亡

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：