氧糖剥夺再灌注后CDK1对GRASP65及高尔基体形态的影响

作     者：李晶 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周文胜

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：氧糖剥夺再灌注 PC12 高尔基体碎裂 CDK1 GRASP65 

摘      要：目的:探讨在氧糖剥夺再灌注后CDK1对GRASP65及高尔基体形态的影响。方法:1.建立氧糖剥夺再灌注(OGD/R)细胞模型;2.实验分为正常对照组、OGD/R组和Roscovitine干预组(OGD/R+Roscovitine);根据再灌注时间点不同将OGD/R组和药物干预组分为0h、6h、12h和24h亚组;***-8法检测细胞活性和流式细胞术检测细胞凋亡率;4.荧光显微镜观察高尔基体的形态;*** blot分别检测CDK1、GRASP65和pGRASP65的蛋白水平。结果:***-8结果显示:经氧糖剥夺6h再灌注6h、12h和24h组细胞的OD值均明显低于同时间点正常对照组(P0.05)。Roscovitine干预组各亚组细胞的OD值均高于同时间点的OGD/R亚组,其中在再灌注12h时间点两亚组间比较差异明显(P0.05)。2.流式细胞术检测结果显示:经氧糖剥夺6h再灌注6h、12h和24h组细胞凋亡率均较同时间点正常对照组明显升高(P0.05)。Roscovitine干预组各亚组细胞的凋亡率均明显低于同时间点的OGD/R组(P0.05)。*** blot结果显示:经氧糖剥夺6h再灌注6h、12h和24h组细胞CDK1的表达均明显高于正常对照组(P0.05);Roscovitine干预组各亚组细胞的CDK1表达水平均较同时间点OGD/R组有明显下降(P0.05)。在各组中,GRASP65的表达水平无明显变化。经氧糖剥夺6h再灌注6h、12h和24h组细胞的pGRASP65表达水平较正常对照组明显升高(P0.05);Roscovitine干预组各亚组的pGRASP65表达水平均较同时间点的OGD/R组明显减少(P0.05)。4.免疫荧光结果显示:氧糖剥夺6h再灌注0h和6h后,高尔基体形态未出现明显碎裂;再灌注12h和24h后,大部分的高尔基体结构出现明显的碎裂。Roscovitine干预后各亚组细胞的高尔基体形态变化情况均较同时间点OGD/R组改善。结论:氧糖剥夺再灌注后CDK1介导的GRASP65磷酸化可能是高尔基体碎裂机制之一。