检索结果-南通市图书馆

猴d型逆转录病毒p27基因的克隆表达及诊断价值评价

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实验动物与比较医学 2016年第4期36卷 270-275页

作者：周洁杨燕飞胡建华陶凌云高诚上海实验动物研究中心上海201203 扬州大学兽医学院扬州225009

目的克隆表达猴d型逆转录病毒（SRV） p27基因,评价其诊断价值.方法 PCR扩增p27基因片段,定向克隆至原核表达载体pET-28b（＋）,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta （dE3）中诱导表达,利用SdS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定,目的蛋... 详细信息

目的克隆表达猴d型逆转录病毒（SRV） p27基因,评价其诊断价值.方法 PCR扩增p27基因片段,定向克隆至原核表达载体pET-28b（＋）,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta （dE3）中诱导表达,利用SdS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后用ELISA方法评价其诊断价值.结果重组质粒转化宿主菌后在37℃,异丙基-β-d-硫代半乳糖苷（IPTG）浓-度为0.5 mmol/L的条件下诱导4h,可溶性p27蛋白表达量最大,且具有免疫学活性.纯化后测定融合蛋白浓度为2.043 g/L,纯度93.3％,以融合蛋白为诊断抗原包被ELISA板检测3份标准阳性血清和22份阴性血清,检出率为100％.结论 p27基因成功表达并具有良好的反应原性,可作为猴d型逆转录病毒血清学检测的候选抗原.

关键词：猴d型逆转录病毒 p27基因原核表达血清学检测

猴d型逆转录病毒P27基因的表达、纯化及重组蛋白的鉴定

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中国动物检疫 2010年第5期27卷 31-33页

作者：程昀静张利仙段纲艾军龙云凤董俊严树发周晓黎云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 昆明理工大学云南昆明650224 云南出入境检验检疫局云南昆明650228

根据GenBank上已发表的猴d型逆转录病毒SRV-2株基因组序列设计合成了一对特异性引物,通过PCR扩增出P27基因。将扩增出的片段克隆到原核表达载体pBAd/Thio-TOPO上,通过序列分析证实该片段与猴d型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致。将阳... 详细信息

根据GenBank上已发表的猴d型逆转录病毒SRV-2株基因组序列设计合成了一对特异性引物,通过PCR扩增出P27基因。将扩增出的片段克隆到原核表达载体pBAd/Thio-TOPO上,通过序列分析证实该片段与猴d型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致。将阳性重组质粒转化至大肠杆菌T0P010中,用阿拉伯糖诱导表达,表达的融合蛋白进行SdS-PAGE和WesternBlot分析,并用proBondTM柱在天然状态下进行纯化。结果表明,表达的融合蛋白分子量约为50Kda,其大小与预期相符。

关键词：猴d型逆转录病毒 P27基因表达纯化

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猴d型逆转录病毒的研究进展

猴D型逆转录病毒的研究进展

猴d型逆转录病毒P27基因的表达、纯化及鉴定

中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：程昀静段纲周晓黎艾军云南农业大学动物科学技术学院云南出入境检验检疫局

＜正＞猴d型逆转录病毒（simian type-d retrovirus,SRV）,是猴获得性免疫缺陷综合征（Simian acquiredimmunodeficienc syndrome,SAIdS）即猴艾滋病的病原体之一（另一个病原为猴免疫缺陷病毒SIV）。SAId的两个病原体中SIV在天然宿主... 详细信息

＜正＞猴d型逆转录病毒（simian type-d retrovirus,SRV）,是猴获得性免疫缺陷综合征（Simian acquiredimmunodeficienc syndrome,SAIdS）即猴艾滋病的病原体之一（另一个病原为猴免疫缺陷病毒SIV）。SAId的两个病原体中SIV在天然宿主非洲来源的猴中不致病,美国某些灵长类中心研究表明SIV在致病宿主亚洲猴中流行率低于1%;但SRV对其天然宿主亚洲猴中致病,其发病率较高,在有的猴群中可达100%,

关键词：猴d型逆转录病毒基因组结构血清学

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猴D型逆转录病毒P27基因的表达、纯化及鉴定

上海地区猴免疫缺陷病毒和猴d型逆转录病毒感染的血清学调查

中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：程昀静张利仙陶俊段纲艾军龙云凤董俊严树发周晓黎云南农业大学动物科学技术学院昆明理工大学昆明医学院云南出入境检验检疫局

利用PCR扩增SRV-2型病毒株的P27基因,将扩增片段克隆入原核表达载体pBAd/Thio-TOPO,通过序列分析证实该片段与猴d型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致。将阳性重组质粒转化至大肠杆菌TOPO10中,用阿拉伯糖诱导表达,表达的融合蛋白进行SdS... 详细信息

利用PCR扩增SRV-2型病毒株的P27基因,将扩增片段克隆入原核表达载体pBAd/Thio-TOPO,通过序列分析证实该片段与猴d型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致。将阳性重组质粒转化至大肠杆菌TOPO10中,用阿拉伯糖诱导表达,表达的融合蛋白进行SdS-PAGE和WesternBlot分析,并用proBondTM柱进行纯化。结果表明,表达的融合蛋白分子量约为50Kda,其大小与理论值相符。

关键词：猴d型逆转录病毒 P27基因原核表达

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畜牧与兽医 2018年第1期50卷 91-92页

作者：周洁杨燕飞陶凌云胡建华高诚上海实验动物研究中心上海201203 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为了解上海地区实验用猴感染猴免疫缺陷病毒（SIV）和猴d型逆转录病毒（SRV）的情况,用间接ELISA方法对2012—2015年上海各实验用猴生产单位送检的475份猴血清进行了检测。结果显示SIV抗体阳性血清20份,阳性率4.21%;SRV抗体阳性血清1份... 详细信息

为了解上海地区实验用猴感染猴免疫缺陷病毒（SIV）和猴d型逆转录病毒（SRV）的情况,用间接ELISA方法对2012—2015年上海各实验用猴生产单位送检的475份猴血清进行了检测。结果显示SIV抗体阳性血清20份,阳性率4.21%;SRV抗体阳性血清1份,阳性率0.21%,阳性率与送检年份和无相关性。本研究为上海地区实验用猴SIV和SRV的预防提供参考依据。

关键词：猴免疫缺陷病毒猴d型逆转录病毒血清学调查酶联免疫吸附试验

国内部分地区猴场猴d型逆转录病毒血清学调查

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中国动物检疫 2021年第11期38卷 27-30页

作者：刘洋铨余航吴瑞可王静何丽芳黄树武张晖闵凡贵佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528231 广东省实验动物监测所广东省实验动物重点实验室广东广州510663

为了解国内不同地区猴场猴d型逆转录病毒(simian type d retrovirus,SRV)感染情况,采集广东、云南、海南、广西、河南境内主要猴场的实验猴血清752份,通过ELISA法检测SRV抗体,评估不同猴场感染情况。结果显示:受检样本总阳性率为5.19%,... 详细信息

为了解国内不同地区猴场猴d型逆转录病毒(simian type d retrovirus,SRV)感染情况,采集广东、云南、海南、广西、河南境内主要猴场的实验猴血清752份,通过ELISA法检测SRV抗体,评估不同猴场感染情况。结果显示:受检样本总阳性率为5.19%,繁殖单元阳性率为16.15%。不同地区猴场实验猴群的感染率存在一定差异,其中云南实验猴感染率最高,样本和繁殖单元阳性率分别为13.50%和46.15%;其次是海南猴场实验猴,样本和繁殖单元阳性率分别为5.00%和17.65%;广东省两家猴场的感染率较低,样本阳性率分别为2.50%和1.00%,繁殖单元阳性率分别为12.90%和5.00%;广西与河南猴场未检出SRV阳性。不同猴种的感染率有明显差异(P猴样本和繁殖单元阳性率分别为11.64%和35.29%,而食蟹猴分别为2.31%和9.38%。结果表明,SRV在国内人工饲养猴群中感染较普遍,部分地区感染较为严重,尤其是恒河猴,应采取措施加强对猴场SRV流行的控制。

关键词：猴d型逆转录病毒流行病学调查抗体检测

中国猕猴d型逆转录病毒(SRV)感染猴体的病理学改变

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西南国防医药 1999年第2期9卷 65-67,130页

作者：伍治平张新生倪燕萍许健安克贵成都军区联勤部军事医学研究所昆明650032

1990年3月,我们用从中国猕猴分离到的猴d型逆转录病毒(SRV)感染3只幼龄恒河猴(90101、90102、90103),接种后23～60d,3只感染猴出现全身淋巴结病、脾脏肿大、中性白细胞减少症等。其中1只实验猴(901O3)在接种后354～489d,间断出现抽搐、... 详细信息

1990年3月,我们用从中国猕猴分离到的猴d型逆转录病毒(SRV)感染3只幼龄恒河猴(90101、90102、90103),接种后23～60d,3只感染猴出现全身淋巴结病、脾脏肿大、中性白细胞减少症等。其中1只实验猴(901O3)在接种后354～489d,间断出现抽搐、强直及四肢痉挛等神经系统症状。经678d观察后处死,3只实验猴淋巴网状内皮组织显微镜下观察显示典型的猴艾滋病(SAIdS)病理改变;1只实验猴(90103)还显示有大脑脱髓鞘、噬神经细胞现象和神经细胞缩裂死亡等病理改变。

关键词：猴d型逆转录病毒中国猕猴 SAIdS 病理改变

MBV、SRV、SIV血清抗体调查及间接ELISA检测方法的初步建立

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MBV、SRV、SIV血清抗体调查及间接ELISA检测方法的初步建立

作者：杨燕飞扬州大学

学位级别：硕士

猴B病毒(Monkey B virus, MBV)是普通级实验猴的必须检测项目,要求阴性,可感染多种动物和人,人感染后的死亡率高达80%,幸存者有神经后遗症,而猴感染后仅表现轻微的疱疹症状或无症状,但长期带毒、间歇排毒,其潜伏感染的特性常造成假阴性... 详细信息

猴B病毒(Monkey B virus, MBV)是普通级实验猴的必须检测项目,要求阴性,可感染多种动物和人,人感染后的死亡率高达80%,幸存者有神经后遗症,而猴感染后仅表现轻微的疱疹症状或无症状,但长期带毒、间歇排毒,其潜伏感染的特性常造成假阴性检测结果。MBV只有一个血清型,抗原性稳定,其核苷酸序列和氨基酸序列己确定,囊膜糖蛋白gd被证实有较高的诊断潜能。猴d型逆转录病毒(Simian type d Retrovirus, SRV)、猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus, SIV)是SPF级实验猴的必需检测项目,要求阴性。SRV和SIV是猴艾滋病的病原,感染后都会引起免疫缺陷症状,但是SIV在其天然宿主不致病,只有跨种群感染才会导致猴艾滋病的发生。SRV有7个血清型,其中1～3己测序完成,核衣壳蛋白p27的氨基酸序列高度保守。SIV衣壳蛋白p27含有主要抗原决定簇,且具有群抗原性,被认为是SIV抗原检测的标志物。本实验主要从以下三方面开展：1.上海地区实验用猴MBV、SRV、SIV三种病毒的血清抗体调查共检测475份血清样本,MBV血清抗体阳性34份,阳性率7.158%;SRV血清抗体阳性20份,阳性率4.211%;SIV血清抗体阳性1份,阳性率0.2105%,阳性率与年份和样本总数没有相关性。2.目的蛋白的表达、纯化及鉴定将pET28a-gd (MBV)质粒转化到BL21(dE3)菌株,表达MBV gd蛋白,分子量约为48.24kd,经镍琼脂糖亲和层析纯化后,用Western blot证明该蛋白具有抗原性,测得蛋白浓度为3.726mg/mL。将pET28b-p27 (SRV)质粒转化到tosetta (dE3)菌株,表达SRV p27蛋白,分子量约为26.2kd,经镍琼脂糖亲和层析纯化后,用Western blot证明该蛋白具有抗原性,测定蛋白浓度为2.043mg/mL。将pET28a-p27 (SIV)质粒转化到Rosetta (dE3)菌株,表达SIV p27蛋白,分子量约为24.6kd,经镍琼脂糖亲和层析纯化后,用Western blot证明该蛋白具有抗原性,测定蛋白浓度为1.604mg/mL3.间接ELISA方法的建立及评价用4BV gd蛋白作为抗原,建立检测MBV血清抗体的间接ELISA方法,确定的最佳反应条件为：抗原1：1280稀释(浓度为2.913μg/孔);血清1：100稀释,作用60min;酶标抗体1：20000稀释,作用60min,底物显色15min。Od值≥0.326判为阳性,Od值≤0.255判为阴性。实验证明gd蛋白不与***发生交叉反应,所建立的方法与全病毒试剂盒检测结果的符合率为96.74%,批内重复试验中阴、阳对照的Od值变异系数小于14%。应用该方法检测2016年上海地区送检的37份猴血清,检出阳性1份,阳性率为2.703%。用SRVp27蛋白作为抗原,建立检测SRV血清抗体的间接ELISA方法,确定的最佳反应条件为：抗原1：640稀释(浓度为3.193μg/孔);血清1：100稀释,作用6Omin;酶标抗体1：20000稀释,作用60min,底物显色15min。Od值≥0.297判为阳性,Od值lt;0.244判为阴性。实验证明p27蛋白不与***发生交叉反应,所建立的方法与全病毒试剂盒检测结果的符合率为97.87%,批内重复试验中阴、阳对照的Od值变异系数小于9%。应用该方法检测2016年上海地区送检的37份猴血清,检出阳性2份,阳性率为5.405%。用SIV p27蛋白作为抗原,建立检测SIV血清抗体的间接ELISA方法,确定的最佳反应条件为：抗原1：640稀释(浓度为2.508μg/孔);血清1：100稀释,作用60min;酶标抗体1：10000稀释,作用60min,底物显色15min。Od值≥0.269判为阳性,Od值≤0.256判为阴性。实验证明p27蛋白不与MBV、SRV发生交叉反应,所建立的方法与全病毒试剂盒检测结果的符合率为98.91%,批内重复试验中阴、阳对照的Od值变异系数小于3%。应用该方法检测2016年上海地区送检的37份猴血清,检出阳性0份,阳性率为0。

关键词：猴B病毒猴d型逆转录病毒猴免疫缺陷病毒间接ELISA

巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV

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中国比较医学杂志 2010年第7期20卷 40-43页

作者：夏机良王涛季芳孙云霄彭白露刘晓明饶军华广东省昆虫研究所华南灵长类研究中心广东蓝岛生物技术有限公司广州510555

目的利用巢式PCR方法检测圈养的食蟹猴(Macaca fascicularis)和猕猴(Macaca mulatta)中猴d型逆转录病毒(Simian Type d Retrovirus SRV)和猴泡沫病毒(Simian foamy virus SFV)。方法针对SRV-env和SFV-pol基因的保守区序列设计特异性外引物,然后再设计特异性内引物。将外引物扩增出的片段克隆到PJET1.2blunt载体中作为阳性对照,运用NCBI中BLAST软件比对测序结果。用巢式PCR方法分别检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV。结果发现食蟹猴中SFV感染率为65.2%,SRV感染率为9.5%,猕猴中SFV感染率为60.5%,SRV感染率为12.8%。结论圈养的食蟹猴和猕猴SFV的感染率均较高,SRV感染率很低。

关键词：巢式PCR 食蟹猴猕猴猴d型逆转录病毒猴泡沫病毒