猴D型逆转录病毒p27基因的克隆表达及诊断价值评价

作     者：周洁 杨燕飞 胡建华 陶凌云 高诚 ZHOU Jie YANG Yan-fei HU Jian-hua TAO Ling-yun GAO Cheng

作者机构：上海实验动物研究中心上海201203 扬州大学兽医学院扬州225009 

出 版 物：《实验动物与比较医学》 (Laboratory Animal and Comparative Medicine)

年 卷 期：2016年第36卷第4期

页      面：270-275页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：上海市科委科技创新行动计划(13140900600) 上海市科委研发平台专项(15DZ2292400) 

主　　题：猴D型逆转录病毒 p27基因 原核表达 血清学检测 

摘      要：目的 克隆表达猴D型逆转录病毒（SRV） p27基因,评价其诊断价值.方法 PCR扩增p27基因片段,定向克隆至原核表达载体pET-28b（＋）,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta （DE3）中诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后用ELISA方法评价其诊断价值.结果 重组质粒转化宿主菌后在37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓-度为0.5 mmol/L的条件下诱导4h,可溶性p27蛋白表达量最大,且具有免疫学活性.纯化后测定融合蛋白浓度为2.043 g/L,纯度93.3％,以融合蛋白为诊断抗原包被ELISA板检测3份标准阳性血清和22份阴性血清,检出率为100％.结论 p27基因成功表达并具有良好的反应原性,可作为猴D型逆转录病毒血清学检测的候选抗原.