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寡脱氧核苷酸致敏树突状细胞对SKOV-3卵巢癌移植瘤抑瘤作用的研究

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中国妇幼保健 2011年第32期26卷 5049-5052页

作者：叶明珠李娜黄秀敏厦门大学附属中山医院妇产科福建厦门361004

目的:探讨含未甲基化胞嘧啶-磷酸二酯键-鸟嘌呤(CpG)基序的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)致敏树突状细胞(DCs)对裸鼠人卵巢癌移植瘤生长的免疫抑制作用。方法:应用CpG ODN2006联合肿瘤表面抗原体外冲击致敏人外周血来源DCs,四唑盐(MTT)比色试... 详细信息

目的:探讨含未甲基化胞嘧啶-磷酸二酯键-鸟嘌呤(CpG)基序的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)致敏树突状细胞(DCs)对裸鼠人卵巢癌移植瘤生长的免疫抑制作用。方法:应用CpG ODN2006联合肿瘤表面抗原体外冲击致敏人外周血来源DCs,四唑盐(MTT)比色试验法测定致敏DCs激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)增殖活性及活化的CTLs对SKOV-3卵巢癌细胞株的杀伤能力。CTLs经皮下注射免疫荷瘤裸鼠,测定其对裸鼠人SKOV-3卵巢癌移植瘤生长的抑制作用。结果:CpG ODN2006联合肿瘤表面抗原体外可明显促进淋巴细胞的增殖,增殖活性显著高于未致敏组和单纯肿瘤抗原致敏组(P<0.01),且相同效靶比下所诱导的CTLs对SKOV-3卵巢癌细胞的杀伤活性显著强于未致敏组、单纯CA125致敏组和单纯CpGODN致敏组(P<0.01)。在体实验显示联合致敏组CTLs对裸鼠人SKOV-3卵巢癌移植瘤的生长有显著的抑制作用,抑瘤效果明显优于单纯CpG ODN致敏组和单纯CA125致敏组(PCpGODN<0.05,PCA125<0.01)。结论:CpG ODN联合CA125致敏DCs可促进CTLs增殖,抑制裸鼠人SKOV-3卵巢癌移植瘤的生长,从而为卵巢癌免疫治疗研究开辟了新思路。

关键词：寡脱氧核苷酸树突状细胞裸鼠肿瘤移植

Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01经大鼠牙龈黏膜局部注射后在重要脏器组织中的分布

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吉林大学学报（医学版） 2014年第3期40卷 574-577,I0003页

作者：张超申玉芹侯旭裴瑾孙晗孙新华吉林大学口腔医院正畸科吉林长春130021 吉林大学口腔医院牙周病科吉林长春130021 吉林大学药学院生物化学与分子生物学吉林长春130021

目的:观察不同时间点Cy5标记寡脱氧核苷酸(ODN)MT01在大鼠体内重要脏器组织中的分布,初步探讨其分布的规律性。方法:选取60只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组30只;实验组大鼠牙龈黏膜局部注射Cy5标记的MT01,对照组大鼠牙龈黏膜... 详细信息

目的:观察不同时间点Cy5标记寡脱氧核苷酸(ODN)MT01在大鼠体内重要脏器组织中的分布,初步探讨其分布的规律性。方法:选取60只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组30只;实验组大鼠牙龈黏膜局部注射Cy5标记的MT01,对照组大鼠牙龈黏膜局部注射未经标记的MT01;于注射后15min、1h、4h、8h、16h、1d、2d、3d、4d和5d分别取大鼠肺、肝、脾、肾、心和脑组织;激光共聚焦显微镜下观测大鼠重要脏器组织中MT01的荧光分布,以荧光阳性细胞率表示各脏器组织内MT01进入各组织细胞量。结果:对照组大鼠重要脏器组织中未观察到荧光阳性细胞;实验组大鼠除心、脑组织外,肺、肝、脾和肾组织细胞中均可观察到荧光阳性细胞;肾组织中荧光阳性细胞呈片状分布,荧光主要集中于肾小管上皮细胞的胞质中;肝、脾和肾组织的荧光阳性细胞率呈规律性变化,峰值分别出现在注射后4、3和4d时,肺组织的荧光阳性细胞率未见明显规律性。结论:MT01经大鼠牙龈局部注射后可进入肺、肝、脾和肾组织,主要集中在肾脏组织中,且分布具有一定规律性。

关键词：寡脱氧核苷酸 MT01 Cy5标记大鼠 Wistar

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寡脱氧核苷酸对支气管哮喘的免疫调节作用

寡脱氧核苷酸对支气管哮喘的免疫调节作用

作者：张萍萍吉林大学

学位级别：硕士

支气管哮喘是儿童最常见的慢性疾病之一,以气道淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等多种细胞浸润、气道高反应性为特征。大量研究表明哮喘免疫学发病机制与Th1/Th2细胞功能失衡密切相关,表现为哮喘急性期Th2功能亢进。寡脱氧核苷酸（oligode... 详细信息

支气管哮喘是儿童最常见的慢性疾病之一,以气道淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等多种细胞浸润、气道高反应性为特征。大量研究表明哮喘免疫学发病机制与Th1/Th2细胞功能失衡密切相关,表现为哮喘急性期Th2功能亢进。寡脱氧核苷酸（oligodeoxynucleotide,ODN）依其不同类型可能发挥免疫刺激活性和/或免疫负调节作用,从而使机体处于Th1型免疫环境或抑制免疫过强反应,展示了其治疗哮喘的潜在价值。为了观察ODN是否能用于哮喘的治疗,我们选择了具有免疫刺激作用的CpG ODN（B型CpG01,C型CpG02）和具有免疫抑制作用的ODN（N型ODN03）,利用哮喘小鼠模型观察了其对哮喘临床症状、肺部炎症以及细胞因子分泌种类和水平的影响,然后检测了其对哮喘患儿血液单个核细胞（PBMC）增生和细胞因子分泌的刺激作用。我们发现:C型CpG ODN能明显减少小鼠挠鼻和抽搐的发作次数,减轻肺部炎症,降低哮喘小鼠肺泡灌洗液中IL-4的水平;N型ODN具有相似但稍弱的作用;B型CpG ODN能升高哮喘小鼠血清中IFN-γ的水平。三种ODN治疗组小鼠血清和脾细胞培养上清中IL-4和IFN-γ的含量没有明显差异。C型CpG ODN能够升高哮喘患儿PBMC培养上清中IFN-γ的含量。三种ODN对哮喘患儿PBMC的增生均有明显刺激作用,尤以C型CpG ODN的刺激作用最强。研究结果表明,C型CpG ODN显示出一定的治疗哮喘的潜在价值,进一步研究有望将其开发成生物I类新药。

关键词：寡脱氧核苷酸支气管哮喘免疫调节作用

Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01在大鼠重要脏器组织中的分布

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Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01在大鼠重要脏器组织中的分布

作者：张超吉林大学

学位级别：硕士

MT01是本课题组成员依据人线粒体DNA序列设计的单链寡脱氧核苷酸，可以靶向阻断TLR9的激活，减轻组织的炎症性损伤，抑制由TLR9激活引起的机体固有免疫应答，其功能和结构已获得国家专利保护[一种具有免疫抑制功能的寡核苷酸，国家发明... 详细信息

MT01是本课题组成员依据人线粒体DNA序列设计的单链寡脱氧核苷酸，可以靶向阻断TLR9的激活，减轻组织的炎症性损伤，抑制由TLR9激活引起的机体固有免疫应答，其功能和结构已获得国家专利保护[一种具有免疫抑制功能的寡核苷酸，国家发明专利，专利号CN101643496]。本课题组在前期工作中发现，MT01能够促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，增强成骨细胞成骨功能;同时，体内实验证实，在大鼠牙周炎模型中局部应用MT01，可以有效抑制牙周炎大鼠牙槽骨吸收。以上研究成果提示，MT01有可能开发为一种减缓牙槽骨吸收的新型制剂。因此，有必要对局部应用时，MT01在体内重要脏器内的分布、代谢、清除率以及毒理反应等进行系统的研究，从而为进一步深入研究开发MT01奠定实验基础。目的：通过局部注射Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01，采用激光共聚焦显微镜观察MT01在大鼠体内重要脏器组织中不同时间点的分布情况，初步探讨其代谢分布的规律性。方法：选取60只SPF级健康雄性Wistar大鼠，体重200g±10g，随机数字表法分为实验组和对照组，每组30只。实验组于右侧上颌第一恒磨牙颊侧牙龈粘膜注射Cy5标记的MT012μg，对照组注射未经标记的MT012μg，于注射后15min、1h、4h、8h、16h、1d、2d、3d、4d和5d全麻下取大鼠肺、肝、脾、肾、心和脑组织，制备快速冰冻切片并染色。激光共聚焦显微镜下观测MT01荧光分布，以荧光阳性细胞率表示各脏器组织内MT01进入的量。结果：在对照组中未观察到荧光阳性细胞。在实验组中除心、脑组织外，肺、肝、脾和肾组织细胞中均可观察到荧光阳性细胞;肾组织中荧光阳性细胞呈片状分布，荧光主要集中于肾小管上皮细胞的胞质中;肺、肝、脾组织中荧光阳性细胞呈点状散在分布;肝、脾和肾组织的荧光阳性细胞率随时间呈规律性变化，峰值分别出现在注射后4、3和4d时，而肺组织的荧光阳性细胞率随时间未见明显规律性。肾组织的荧光阳性细胞率明显高于其他组织。结论：MT01经大鼠牙龈局部注射后可进入肺、肝、脾和肾组织，分布具有一定规律性，MT01主要集中在肾脏组织中，提示肾脏可能为MT01主要代谢器官。

关键词：寡脱氧核苷酸 MT01 Cy5标记组织分布

含CpG基序的寡脱氧核苷酸联合乙型肝炎表面抗原免疫转基因小鼠的实验研究

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中华肝脏病杂志 2005年第1期13卷 61-62页

作者：孙玉红朱朝敏谢尧重庆医科大学附属儿科医院 400016

有研究表明,含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对天然和获得性免疫系统具有广泛的刺激作用,在动物体内可作为多种外源抗原,包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的Th1型免疫佐剂,达到增强体液免疫及细胞免疫的作用,而... 详细信息

有研究表明,含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对天然和获得性免疫系统具有广泛的刺激作用,在动物体内可作为多种外源抗原,包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的Th1型免疫佐剂,达到增强体液免疫及细胞免疫的作用,而Th1型免疫反应对乙型肝炎病毒(HBV)的清除是必要的,因此CpG ODN联合HBsAg可望成为慢性乙型肝炎的有效治疗性疫苗.

关键词： CpG基序乙型肝炎表面抗原寡脱氧核苷酸联合 Th1型 ODN HB 转基因小鼠刺激作用获得性免疫

体外筛选对犬具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸

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中国兽医学报 2010年第3期30卷 304-307页

作者：任继玲何春燕周蕾张培因万敏王丽颖于永利吉林大学白求恩医学院免疫学教研室吉林长春130021 吉林大学白求恩医学院分子生物学教研室吉林长春130021

建立并优化犬特异性寡脱氧核苷酸(CpGODN)的体外筛选条件,筛选自行设计的对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。用CpGODN2006对犬的免疫细胞进行刺激,测定细胞增殖能力。对免疫细胞的来源、细胞铺板浓度、CpGODN的刺激时间和浓度及增值能力的... 详细信息

建立并优化犬特异性寡脱氧核苷酸(CpGODN)的体外筛选条件,筛选自行设计的对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。用CpGODN2006对犬的免疫细胞进行刺激,测定细胞增殖能力。对免疫细胞的来源、细胞铺板浓度、CpGODN的刺激时间和浓度及增值能力的测定方法等条件进行优化。并对自行设计的CpGODN进行了初步筛选。结果显示,犬脾细胞对CpGODN的反应性比外周血单个核细胞好。在犬脾细胞为6×105个/孔,37℃5%CO2条件下,经10mg/LCpGODN2006刺激48h,使脾细胞明显增生。3H-TdR掺入法测得的结果比MTT法更敏感。自行设计的CpGODNR008能显著地刺激犬脾细胞增生,且优于CpGODN2006(P<0.05)。结果表明,优化了犬特异性CpGODN的体外筛选条件,并筛选出了对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。

关键词：寡脱氧核苷酸犬脾细胞免疫刺激活性

免疫活性寡脱氧核苷酸CpG ODN的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 571-576页

作者：凌世淦军事医学科学院基础医学研究所北京100850

早在1890年就观察到给癌症患者注射菌体粗提制剂有时可使肿瘤明显退缩，但不明其原因。直到20世纪80年代，在提取菌体中对肿瘤起作用的活性成分时，发现卡介苗中这种活性来自于菌体的核酸组分。用核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶降解分析，... 详细信息

早在1890年就观察到给癌症患者注射菌体粗提制剂有时可使肿瘤明显退缩，但不明其原因。直到20世纪80年代，在提取菌体中对肿瘤起作用的活性成分时，发现卡介苗中这种活性来自于菌体的核酸组分。用核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶降解分析，证明真正起作用的是菌体中脱氧核糖核酸（DNA）。而对DNA进行部分降解分析，发现40bp左右或更小的片段就可具备这种活性。

关键词：免疫活性寡脱氧核苷酸 CpG ODN 脱氧核糖核酸核糖核酸酶癌症患者活性成分

慢性病毒性肝炎小鼠动物模型的建立及胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸联合恩替卡韦干预作用机制研究

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山西医药杂志 2018年第19期47卷 2282-2283页

作者：洪艳江苏省苏州市第五人民医院药剂科 215000

慢性病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染性疾病,严重影响患者健康及生活。对于慢性病毒性干预以抗病毒为主,但是患者需要长期用药,导致患者药物依从性较差,难以达到预期的治疗效果。目前,临床上对于慢性病毒性... 详细信息

慢性病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染性疾病,严重影响患者健康及生活。对于慢性病毒性干预以抗病毒为主,但是患者需要长期用药,导致患者药物依从性较差,难以达到预期的治疗效果。目前,临床上对于慢性病毒性肝炎尚缺乏理想的动物模型阐述其发病机制,导致临床对其防治研究受到很大的局限性[1]。

关键词：慢性病毒性肝炎小鼠动物模型干预作用寡脱氧核苷酸恩替卡韦鸟嘌呤胞嘧啶磷酸

含亚甲基缩醛键的寡脱氧核苷酸的合成及杂交性质的初步研究

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药学学报 2003年第1期38卷 27-31页

作者：余建鑫张万年张蕾周有骏吕加国第二军医大学药学院上海200433

目的　本文设计合成了一类新型混合骨架的寡脱氧核苷酸 (MBO)。方法　 3′ O (二苯膦酰氧 )甲基缩醛核苷 (1)在三甲基硅三氟甲磺酸酯 (TMSOTf)条件下 ,与 3′ 位保护的脱氧核苷 (2或 6 )缩合。得到的二聚 (3)或三聚体 (7)的 5′ 位经 4... 详细信息

目的　本文设计合成了一类新型混合骨架的寡脱氧核苷酸 (MBO)。方法　 3′ O (二苯膦酰氧 )甲基缩醛核苷 (1)在三甲基硅三氟甲磺酸酯 (TMSOTf)条件下 ,与 3′ 位保护的脱氧核苷 (2或 6 )缩合。得到的二聚 (3)或三聚体 (7)的 5′ 位经 4 ,4′ 二甲氧三苯甲基 (DMTr)保护 ,3′ 位与 (2 氰乙基N ,N 二异丙基 )氯化亚磷酰胺缩合 ,然后应用标准固相DNA合成法掺入到寡核苷酸中。结果　本文合成了 6条带亚甲基缩醛键的寡核苷酸 (ODN II～ODN VII) ,考察了它们的杂交性质 ,测定了与互补DNA的解链温度Tm 值。结论　此类寡核苷酸平均每个亚甲基缩醛键的修饰 ,解链温度Tm 值下降约 0 8～ 1 2℃ ,杂交亲和力与对照的天然磷酸二酯键的寡核苷酸相当。

关键词：反义药物寡脱氧核苷酸解链温度杂交 MBO 亚甲基缩醛键