Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01在大鼠重要脏器组织中的分布

作     者：张超 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙新华

授予年度：2014年

学科分类：08[工学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 080502[工学-材料学] 

主      题：寡脱氧核苷酸 MT01 Cy5标记 组织分布 

摘      要：MT01是本课题组成员依据人线粒体DNA序列设计的单链寡脱氧核苷酸，可以靶向阻断TLR9的激活，减轻组织的炎症性损伤，抑制由TLR9激活引起的机体固有免疫应答，其功能和结构已获得国家专利保护[一种具有免疫抑制功能的寡核苷酸，国家发明专利，专利号CN101643496]。本课题组在前期工作中发现，MT01能够促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，增强成骨细胞成骨功能;同时，体内实验证实，在大鼠牙周炎模型中局部应用MT01，可以有效抑制牙周炎大鼠牙槽骨吸收。以上研究成果提示，MT01有可能开发为一种减缓牙槽骨吸收的新型制剂。因此，有必要对局部应用时，MT01在体内重要脏器内的分布、代谢、清除率以及毒理反应等进行系统的研究，从而为进一步深入研究开发MT01奠定实验基础。 目的：通过局部注射Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01，采用激光共聚焦显微镜观察MT01在大鼠体内重要脏器组织中不同时间点的分布情况，初步探讨其代谢分布的规律性。 方法：选取60只SPF级健康雄性Wistar大鼠，体重200g±10g，随机数字表法分为实验组和对照组，每组30只。实验组于右侧上颌第一恒磨牙颊侧牙龈粘膜注射Cy5标记的MT012μg，对照组注射未经标记的MT012μg，于注射后15min、1h、4h、8h、16h、1d、2d、3d、4d和5d全麻下取大鼠肺、肝、脾、肾、心和脑组织，制备快速冰冻切片并染色。激光共聚焦显微镜下观测MT01荧光分布，以荧光阳性细胞率表示各脏器组织内MT01进入的量。 结果：在对照组中未观察到荧光阳性细胞。在实验组中除心、脑组织外，肺、肝、脾和肾组织细胞中均可观察到荧光阳性细胞;肾组织中荧光阳性细胞呈片状分布，荧光主要集中于肾小管上皮细胞的胞质中;肺、肝、脾组织中荧光阳性细胞呈点状散在分布;肝、脾和肾组织的荧光阳性细胞率随时间呈规律性变化，峰值分别出现在注射后4、3和4d时，而肺组织的荧光阳性细胞率随时间未见明显规律性。肾组织的荧光阳性细胞率明显高于其他组织。 结论：MT01经大鼠牙龈局部注射后可进入肺、肝、脾和肾组织，分布具有一定规律性，MT01主要集中在肾脏组织中，提示肾脏可能为MT01主要代谢器官。