寡脱氧核苷酸MT01对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

作     者：陈宇 周平辉 管晶晶 梁梦想 张莉 毛颖基 Chen Yu;Zhou Pinghui;Guan Jingjing;Liang Mengxiang;Zhang Li;Mao Yingji

作者机构：蚌埠医学院第一附属医院整形外科233004 蚌埠医学院生命科学学院233030 蚌埠医学院第一附属医院骨科233004 蚌埠医学院安徽省组织移植重点实验室233030 蚌埠医学院第一附属医院医学检验中心233004 

出 版 物：《中华整形外科杂志》 (Chinese Journal of Plastic Surgery)

年 卷 期：2020年第36卷第5期

页      面：560-567页

核心收录：

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(31700854) 安徽省教育厅自然科学重点项目(KJ2018A1011) 蚌埠医学院校科技发展基金项目(BYKF17118,BYKY1848ZD,BYKY18108) 蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(Byycx1827) 安徽省大学生创新创业训练计划(201810367013,201810367028)。 

主　　题：寡脱氧核苷酸 骨髓间充质干细胞 形态学 细胞增殖 成骨分化 

摘      要：目的探讨寡脱氧核苷酸(ODN)MT01对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)形态、增殖及成骨分化的影响。方法4周龄清洁级SD雄性大鼠5只,以全骨髓贴壁法培养SD大鼠BMSCs,通过观察不同代次的细胞形态、流式细胞仪检测表面相关标志物和成骨分化潜能,对所提取的干细胞进行鉴定。设立PBS组(对照组)和不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml)ODN MT01组进行对照研究,每组实验重复3次。通过DAPI和鬼笔环肽荧光染色观察各组BMSCs细胞核及骨架的形态变化;通过CCK-8法检测不同时间各组BMSCs的增殖活性;成骨诱导培养基培养7 d和21 d,分别行碱性磷酸酶染色及其活性检测和茜素红染色鉴定各组BMSCs的成骨分化程度。组间两两比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果随着代次增加,BMSCs纯度越来越高,第3代细胞整体呈鱼群样分布。流式细胞仪分析结果显示,细胞高表达CD29(99.8%)、CD44(96.1%),低表达CD11b(1.03%)、CD45(1.74%)。成骨诱导7 d后碱性磷酸酶染色及21 d后茜素红染色均为阳性。细胞核及骨架染色显示,ODN MT01浓度为4.0μg/ml时会导致BMSCs皱缩并降低伸展性。CCK-8结果显示,培养4 d时对照组吸光度值为0.446±0.018,1.0、2.0μg/ml ODN MT01组分别为0.505±0.019、0.528±0.014,与对照组比较差异有统计学意义(t=2.954、4.083,P=0.033、0.008),培养7 d时对照组吸光度值为0.514±0.027,1.0、2.0μg/ml ODN MT01组分别为0.607±0.007、0.636±0.023,与对照组比较差异有统计学意义(t=4.664、6.091,P=0.009、0.008),BMSCs增殖能力较对照组明显升高,而4.0μg/ml ODN MT01(0.427±0.013)对BMSCs增殖能力具有抑制作用(t=4.332,P=0.015);诱导BMSCs成骨分化过程中随着ODN MT01浓度的升高,蓝色团块和矿化结节均显著增加,培养7 d后的碱性磷酸酶活性升高趋势与ALP染色结果相类似,对照组碱性磷酸酶活性为1.207±0.023,0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml ODN MT01组分别为1.747±0.095、2.200±0.136、3.560±0.088、3.490±0.144,与对照组比较差异均有统计学意义(t=4.313、7.934、18.800、18.240,P=0.005、0.001、0.001、0.001),而2.0、4.0μg/ml组的诱导效果相比基本无差异(t=0.562,P=0.590)。结论在不影响BMSCs形态的情况下,浓度为2.0μg/ml的ODN MT01可显著促进BMSCs的增殖和成骨分化。