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背角无齿蚌酸性磷酸酶的部分性质及功能基团研究

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四川大学学报（自然科学版） 2002年第1期39卷 111-114页

作者：魏炜张洪渊石安静四川大学生命科学学院成都610064

作者在对背角无齿蚌外套膜中分离提纯到的一种酸性磷酸酶 (ACPase)的部分酶学性质进行研究的基础上 ,测定了该酶的亚基分子量为 6 1,80 0D ,等电点 (pI)为 6 .12 (2 5℃ ) ,并对其氨基酸组成进行了分析 .对ACPase的二级结构的圆二色谱 (... 详细信息

作者在对背角无齿蚌外套膜中分离提纯到的一种酸性磷酸酶 (ACPase)的部分酶学性质进行研究的基础上 ,测定了该酶的亚基分子量为 6 1,80 0D ,等电点 (pI)为 6 .12 (2 5℃ ) ,并对其氨基酸组成进行了分析 .对ACPase的二级结构的圆二色谱 (CD)分析显示 ,酶分子中α 螺旋占 31.8% ,β 折叠占 4 2 .6 % ,β 转角 17.9% .对ACPase进行了化学修饰研究 ,初步认为组氨酸、丝氨酸、色氨酸和半胱氨酸有可能是该酶的功能基团 ,二硫键也对维持酶的活性中心构象极为重要 .

关键词：背角无齿蚌酸性磷酸酶功能基团酶学性质亚基分子量等电点氨基酸

杜艺岭研究员团队合作成果揭示生物体内氧化偶氮功能基团合成代谢的生物化学机制

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浙江大学学报（医学版） 2023年第6期52卷 801-801页

2023年11月29日,浙江大学医学院基础医学院杜艺岭研究员和中国科学院深圳先进技术研究院周佳海研究员合作在《美国化学会志》(Journal of the American Chemical Society)上发表了最新研究成果论文“Conserved enzymatic cascade for ba... 详细信息

2023年11月29日,浙江大学医学院基础医学院杜艺岭研究员和中国科学院深圳先进技术研究院周佳海研究员合作在《美国化学会志》(Journal of the American Chemical Society)上发表了最新研究成果论文“Conserved enzymatic cascade for bacterial azoxy biosynthesis”(DOI:10.1021/jacs.3c12018)。该研究以微生物来源的多种氧化偶氮类(azoxy)药源分子为研究对象,揭示了生物合成代谢产物中氧化偶氮基这种重要的功能基团形成的生物化学机制。研究人员发现,细菌来源的VlmO蛋白是一类新型的膜结合氮-氮键合酶,而VlmB是一类具有双铁中心的氧化偶氮合酶。VlmO和VlmB共同催化了一个由从肼到偶氮、再到氧化偶氮(hydrazine-azo-azoxy)的酶促反应序列从而得到氧化偶氮产物。进一步的基因组大数据挖掘和酶学表征实验表明,该合成代谢途径在细菌基因组上广泛存在。该研究成果不仅揭示了长期以来氧化偶氮类天然分子合成代谢的生化基础之谜,而且也为通过基因组挖掘方法精准发现该家族的新活性化合物提供了基因标记。

关键词：氧化偶氮功能基团生物化学机制基础医学院活性化合物基因组挖掘大数据挖掘团队合作

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家蚕碱性磷酸酶的功能基团研究

西南师范大学学报（自然科学版） 2005年第5期30卷 925-929页

作者：许敏罗英黄毅鲁成唐云明西南大学生命科学学院重庆400715 西南大学蚕桑学农业部重点实验室重庆400716

用PCMB、NBS、PMSF、TNBS、SUAN、DTT、BrAc、IAc等在一定条件下选择性修饰家蚕碱性磷酸酶的部分氨基酸残基,对酶活力的变化进行测定.结果表明:PMSF、SUAN、BrAc、IAc和TNBS的修饰能显著抑制酶的活性,且酶活力降低程度与修饰剂的浓度相... 详细信息

用PCMB、NBS、PMSF、TNBS、SUAN、DTT、BrAc、IAc等在一定条件下选择性修饰家蚕碱性磷酸酶的部分氨基酸残基,对酶活力的变化进行测定.结果表明:PMSF、SUAN、BrAc、IAc和TNBS的修饰能显著抑制酶的活性,且酶活力降低程度与修饰剂的浓度相关;PMSF、DTT和NBT的修饰对酶的影响较小.初步认为,巯基和组氨酸的咪唑基可能是家蚕碱性磷酸酶的必需功能基团,赖氨酸残基和二硫键对保护酶的催化能力是必需的.

关键词：碱性磷酸酶功能基团化学修饰家蚕

槐猪精液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶功能基团的研究

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黑龙江畜牧兽医 2015年第5期 85-88页

作者：林心宇章文沈林松张伟妮黄小红福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室福州350002

为了研究酶活性中心功能基团的性质,从槐猪精液中提取N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.***.1.52,简称NAGase)的电泳单一纯酶制剂,试验采用动力学和化学修饰的方法进行研究。结果表明:在37℃条件下,酶活性中心解离常数p Ke值为5.29,解离热... 详细信息

为了研究酶活性中心功能基团的性质,从槐猪精液中提取N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.***.1.52,简称NAGase)的电泳单一纯酶制剂,试验采用动力学和化学修饰的方法进行研究。结果表明:在37℃条件下,酶活性中心解离常数p Ke值为5.29,解离热焓ΔHo值为30.46 k J/mol,酶活性相关的可解离基团是咪唑基;在特定条件下,通过对酶分子基团的特异性修饰可知,对酶分子链内二硫键、巯基及吲哚基的修饰会使酶的活性显著下降。说明这些氨基酸残基也是该酶的功能基团,而ε-氨基可能与维系酶分子构象有关,胍基则被修饰后对酶活性没有影响,不是此酶的功能基团。

关键词：槐猪精液 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase) 功能基团化学修饰

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聚合物支载的常见功能基团的分析鉴定方法

高分子通报 2002年第3期 58-68页

作者：罗君涛黄文强南开大学吸附分离功能高分子材料国家重点实验室高分子化学研究所天津300071

综述了目前用于固相有机合成中聚合物支载的功能基团的各种分析鉴定方法

关键词：聚合物支载功能基团化学分析法仪器分析法固相有机合成药物开发

猪脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化及性质和功能基团研究

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猪脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化及性质和功能基团研究

作者：王洁西南大学

学位级别：硕士

神经递质乙酰胆碱及胆碱能系统,即乙酰胆碱合成的酶系、两类乙酰胆碱受体和乙酰胆碱酯酶等,广泛存在于动植物体内,并参与一些重要生理过程的调节。乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)是一类水解酶,在动物神经传导中起重要作用... 详细信息

神经递质乙酰胆碱及胆碱能系统,即乙酰胆碱合成的酶系、两类乙酰胆碱受体和乙酰胆碱酯酶等,广泛存在于动植物体内,并参与一些重要生理过程的调节。乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)是一类水解酶,在动物神经传导中起重要作用,能高效地将神经递质乙酰胆碱水解为乙酸和胆碱,从而保证神经冲动在突触间的正常传导。乙酰胆碱酯酶还具有非催化功能,参与细胞的发育和成熟,参与细胞迁移、粘附和凋亡,促进神经元发育和神经再生,促进造血细胞形成以及影响炎症和免疫反应。该酶在环保、医学、农业、食品、军事等领域具有重要用途。我国使用的乙酰胆碱酯酶制剂一直以来依赖于进口,价格昂贵,收货期较长。寻找到一种廉价的酶源就尤为重要,因此,有必要加强对生物中乙酰胆碱酯酶分离纯化的研究。本文以来源广泛、廉价的猪脑为材料,对乙酰胆碱酯酶进行了分离纯化以及部分酶学性质的研究,以期为该酶的来源及进一步研究和猪脑的综合开发利用提供科学参考。其结果如下： 1.猪脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化以新鲜猪脑为原材料,经过匀浆离心、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,分离纯化获得电泳纯乙酰胆碱酯酶。比活力2.05U/mg,纯化倍数为26.97倍,酶活回收率为11.95%。 2.猪脑乙酰胆碱酯酶的性质研究猪脑乙酰胆碱酯酶全酶相对分子量257.30kD,亚基相对分子量66.94kD,推测该酶由四个相同亚基组成。该酶催化碘化硫代乙酰胆碱最适温度为37℃,最适pH为7.4,该酶在40℃以下,酶活力保持稳定,在pH6.0～8.0范围内较稳定;该酶的最佳底物是碘化硫代乙酰胆碱;当底物浓度超过4.0mmol/L时,表现出过量底物抑制现象,该酶的表观Km为0.94mmol/L。 3.有机溶剂、化合物及金属离子对猪脑乙酰胆碱酯酶的影响乙醇、异丙醇、SDS、过氧化氢、抗坏血酸、草酸和脲素对猪脑乙酰胆碱酯酶有明显的抑制作用;低浓度的EDTA-Na2对该酶则表现出一定的激活作用;浓度较低的Mg2+对该酶表现出激活作用,Ba2+和Zn2+对该酶有强烈的抑制作用。 4.猪脑乙酰胆碱酯酶功能集团的研究采用化学修饰剂对该酶的功能基团进行修饰,结果表明：半胱氨酸巯基、甲硫氨酸残基、组氨酸咪唑基和丝氨酸残基可能是猪脑乙酰胆碱酯酶活性中心的必需基团,参与了该酶活性中心的构成。二硫键可能是维持猪脑乙酰胆碱酯酶活性所必需的基团。而精氨酸胍基、酪氨酸酚羟基、赖氨酸残基和色氨酸残基可能不是该酶活性中心的必需基团,并不参与该酶活性中心的构成。

关键词：乙酰胆碱酯酶分离纯化性质功能基团

添加游离丙酮酸对黄单胞杆菌产黄原胶中丙酮酸功能基团含量的影响

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食品研究与开发 2006年第1期27卷 14-17页

作者：赵润宝詹晓北郑志永张丽敏江南大学工业生物技术教育部重点实验室生物工程学院无锡214036

在发酵过程中添加游离丙酮酸可以比较明显地提高所产黄原胶分子中丙酮酸功能基团的含量,实验研究表明,添加3.0g/L的游离丙酮酸可以使黄原胶分子中丙酮酸功能基团的含量由4.74%提高到5.29%,提高11.6%,且不影响黄原胶的产胶率,达到33.9g/... 详细信息

在发酵过程中添加游离丙酮酸可以比较明显地提高所产黄原胶分子中丙酮酸功能基团的含量,实验研究表明,添加3.0g/L的游离丙酮酸可以使黄原胶分子中丙酮酸功能基团的含量由4.74%提高到5.29%,提高11.6%,且不影响黄原胶的产胶率,达到33.9g/L。同时通过实验得到游离丙酮酸的最佳添加时间为发酵开始后24h。

关键词：黄原胶丙酮酸发酵功能基团

平菇漆酶基因生物信息学分析和杂优-2平菇漆酶分离纯化及酶学性质、功能基团研究

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平菇漆酶基因生物信息学分析和杂优-2平菇漆酶分离纯化及酶学性质...

作者：廖海君西南大学

学位级别：硕士

漆酶(laccase)是一种铜多酚氧化酶,是木质素降解酶系之一,在食用菌栽培过程中,漆酶对菌丝体扭结具有促进作用,能够形成较多的子实体原基,进而提高食用菌的产量,且在工业染料废水处理等方面有重要作用。依据平菇基因组数据,真菌木质素降... 详细信息

漆酶(laccase)是一种铜多酚氧化酶,是木质素降解酶系之一,在食用菌栽培过程中,漆酶对菌丝体扭结具有促进作用,能够形成较多的子实体原基,进而提高食用菌的产量,且在工业染料废水处理等方面有重要作用。依据平菇基因组数据,真菌木质素降解酶的编码基因能在基因组水平上得到统计和注释。但是,目前也存在一些亟待解决的问题,如功能基因注释结果的不准确性、漆酶基因转录调控机理不清楚等。本文通过对平菇漆酶的11条基因序列及其推断氨基酸序列进行生物信息学分析,为研究漆酶基因的调控机理、功能基因组及为本文实验提供理论指导。同时,本实验选用尚未报道的杂优-2平菇为实验材料,从中分离纯化出漆酶并对其理化性质进行研究旨在为充分了解杂优-2平菇漆酶的理化性质及对漆酶的进一步研究、食用菌生产和工业应用等方面提供参考。平菇漆酶基因可能受到N源和来自外界压力胁迫调控,但可能不会受到培养基中葡萄糖浓度的影响,除LACC12外,其余漆酶基因可能会共同响应高浓度的铜离子的压力而激活平菇漆酶基因的转录;杂优-2平菇漆酶在中性和碱性条件下稳定性较好,但该酶的热稳定性较低。二硫键在维持杂优-2平菇漆酶的空间结构稳定性有重要作用。研究结果如下:1、启动子区域分析结果显示:LACC1-LACC12(LACC5除外)均含有不同的顺式作用元件,包括热激响应元件(HSE)、压力响应元件(STRE)、金属应答元件(MRE)、异生物质反应元件(XRE)、抗氧化响应元件(ARE)、CreA因子结合位点(CreA-bingding site)、氮因子结合位点(NIT),还包括CAAT框(CAAT Box)、TATA框(TATA Box)等核心转录起始位点。对漆酶基因编码区上游2000 bp和下游2000bp区域的限制性酶切位点分析发现:LACC1-LACC12(LACC5除外)的限制性酶切位点数在216范围不等。2、漆酶基因系统进化分析及LACC1-LACC12(LACC5除外)相似性分析结果显示:LACC1与秀珍菇(Pleurotus sajor-caju)的LACC2相似性为99.59%;LACC3与秀珍菇(Pleurotus sajor-caju)的LACC5和凤尾菇(Pleurotus pulmonarius)的LACC7相似性分别为87.90%、87.04%;LACC7与杏鲍菇(Pleurotus eryngii)LACC1相似性为95.96%;LACC10与秀珍菇(Pleurotus sajor-caju)的LACC4相似性为97.93%,11条漆酶基因聚为三支。3、氨基酸序列相似性分析发现:11条推断氨基酸序列聚为4支,在进化关系中,LACC6与LACC8、LACC9与LACC10为一支,亲缘关系最近。氨基酸多序列比对和BLAST及RPS-BLAST结果显示:11条推断氨基酸序列中均有漆酶特征序列L1-L4和3个高度保守的铜氧化酶(Cu-oxidase)结构域;SiganlP4.1及Protcomp9.0结果显示:11推断氨基酸序列中都含信号肽,且都为外分泌蛋白。4、Protparam对11条漆酶推断氨基酸理化性质预测结果显示:AI在83.642.81;ExtCof1和ExtCof2几乎没有差异;除LACC1和LACC10外,其余氨基酸的GRAVY均为负值;II在32.812.04范围内;MW介于55.688.87之间;pI在4.53.78范围;除LACC8外,其余氨基酸的TNNCR均高于TNPCR。5、推断氨基酸理化性质和组成分析结果显示:理化性质分为三簇,ClusterⅠ与ClusterⅢ、ClusterⅡ与ClusterⅢ之间存在显著性差异(P0.05);每个簇内的氨基酸理化性质差异性在三个簇之间无显著性差异(P>0.05)。氨基酸组成也分为三簇,ClusterⅠ与ClusterⅡ及ClusterⅢ均有显著性差异(P0.05);ClusterⅠ、ClusterⅡ、ClusterⅢ内的漆酶氨基酸序列组成差异性在三个簇之间无显著差异(P>0.05)。6、通过对杂优-2平菇菌丝进行液体培养,发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE(diethylaminoethyl)-Sepharose fast flow层析和Superdex-200 prep grade层析等方法纯化,获得了电泳纯的杂优-2平菇漆酶。结果显示,培养第6天时漆酶活性最高;杂优-2平菇漆酶比活力为115 U/mg,纯化倍数为111.65,回收率为6.96%。分子质量约为244.0 kD,亚基分子质量约为85.6 kD。最适反应pH值和最适反应温度分别为5.0和55℃,在pH 6.0.0及405℃范围内稳定性较好;最适条件下,以2,2’-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(

关键词：漆酶生物信息学杂优-2平菇分离纯化酶学性质功能基团

巨大芽孢杆菌产胞外核糖核酸酶的分离纯化及性质和功能基团研究

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巨大芽孢杆菌产胞外核糖核酸酶的分离纯化及性质和功能基团研究

作者：赵芯西南大学

学位级别：硕士

核糖核酸酶（Ribonuclease, RNase）是一类广泛存在于动植物和微生物体内的核酸水解酶,通过裂解磷酸二酯键分解核糖核酸。该酶参与RNA代谢、细胞成熟、细胞凋亡、血管生成以及宿主防御RNA病毒等过程。其作为模型蛋白常被用于分子生物学... 详细信息

核糖核酸酶（Ribonuclease, RNase）是一类广泛存在于动植物和微生物体内的核酸水解酶,通过裂解磷酸二酯键分解核糖核酸。该酶参与RNA代谢、细胞成熟、细胞凋亡、血管生成以及宿主防御RNA病毒等过程。其作为模型蛋白常被用于分子生物学研究,作为重要的分析酶应用于食品和药物工业,此外在商业上还被用于生产核苷酸和调味剂。其中来自微生物的RNase有特殊的生物学功能,如具有抗病毒,抗真菌,抗恶性肿瘤细胞增生的活性。巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）属于芽孢杆菌（Bacillus spp.）,在自然界中分布广泛,具有遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺简单等优点,多用于工业生产各种酶类如淀粉酶、青霉素酰胺酶和葡萄糖异构酶等。通过实验证明巨大芽孢杆菌能高效表达RNase,且发酵成分简单,杂蛋白相比动植物材料更少,分离纯化简单,有效降低目的蛋白获取的成本,便于工业化生产。目前为止对于巨大芽孢杆菌RNase的分离纯化未见报道,本文分离纯化了巨大芽孢杆菌的RNase,并对其进行了性质研究,以期为该酶的开发及应用奠定基础。巨大芽孢杆菌发酵液经硫酸铵沉淀、CM-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,纯化得到核糖核酸酶电泳纯品,纯化倍数为606.67倍,酶活力回收率为11.37%,该酶比活力为54272.27U/mg。该酶分子量约为33.3kD,最适温度为52.5℃,最适pH为8.5,在20-40℃以及pH6.0-7.0范围内稳定性较好。以不同浓度酵母RNA为底物在最适条件下测得该酶Km值为2630.02μg/mL。性质研究表明：Fe2+、Cu2+、SDS、抗坏血酸和草酸对该酶活性有抑制作用。EDTA和Mg2+对RNase活性几乎不影响,KSCN与金属离子Li+,K+,Mn2+,Ba2+,C02+,Na+,Zn2+在低浓度下对RNase有抑制作用,异丙醇、甲醇、乙醇和和乙腈这四种有机物对RNase有轻微激活作用,其中异丙醇的激活作用最强。功能基团修饰表明：氯胺-T、NAI以及PMSF对该酶均无明显影响,说明该酶的活性中心不存在甲硫氨酸硫醚基、酪氨酸酚羟基和丝氨酸残基。DTT、顺丁烯二酸酐、BD、BrAc及PCMB均在低浓度对该酶有抑制作用,但是随着抑制剂浓度的增大,抑制作用不再增加,说明二硫键、赖氨酸ε-氨基、精氨酸胍基、组氨酸咪唑基和巯基可能与该酶的活性有影响,但并不处于该酶的活性中心。

关键词：巨大芽孢杆菌核糖核酸酶分离纯化性质功能基团