检索结果-南通市图书馆

共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2009年第2期25卷 107-112页

作者：郭建强姚立红陈爱珺徐一贾润清薄洪董婕周剑芳舒跃龙张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室国家流感中心北京100052

以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒。PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后... 详细信息

以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒。PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后亚克隆入pStar载体,然后扩增M1-IRES-HA片段并将其插入穿梭载体pShuttle-CMV,再与pAd-Easy载体在BJ5183菌中通过同源重组产生重组腺病毒载体,转化293细胞,包装出重组腺病毒Ad-M1/HA。将Ad-M1/HA感染293细胞,可观察到明显细胞病变效应,用免疫荧光及Western-blot方法均检测到M1和HA基因的表达。共表达M1和HA双基因的重组腺病毒的成功构建为开发新型重组腺病毒流感疫苗奠定了基础。

关键词： M1蛋白血凝素内部核糖体进入位点序列腺病毒载体

Klotho基因真核表达载体的构建及其在TCMK-1细胞中的稳定表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

上海交通大学学报（医学版） 2014年第5期34卷 567-572页

作者：沈玥路丽明钱盈盈关雪晶齐渊元倪兆慧钱家麒严玉澄上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科上海200127 上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海200025

目的构建小鼠Klotho基因真核表达载体,进而获得稳定表达Klotho分子的小鼠肾上皮细胞株TCMK-1。方法应用PCR方法扩增带有FLAG标签的Klotho编码基因,并克隆至载体pCD-CXIN(CMVMCS-IRES-Neomycin)的相应位点;经酶切及测序鉴定重组质粒,脂... 详细信息

目的构建小鼠Klotho基因真核表达载体,进而获得稳定表达Klotho分子的小鼠肾上皮细胞株TCMK-1。方法应用PCR方法扩增带有FLAG标签的Klotho编码基因,并克隆至载体pCD-CXIN(CMVMCS-IRES-Neomycin)的相应位点;经酶切及测序鉴定重组质粒,脂质体转染TCMK-1细胞,通过G418筛选得到稳定表达Klotho分子的TCMK-1细胞株;Real-Time PCR检测Klotho mRNA水平,Western blotting检测Klotho蛋白的表达。结果将带有FLAG标签的Klotho基因重组表达载体转染至TCMK-1细胞后,经G418筛选获得TCMK-1细胞株。与对照组相比,Klotho mRNA和蛋白表达均显著升高。结论成功构建了Klotho基因的重组表达载体,并获得了稳定表达Klotho基因的TCMK-1细胞株,为进一步研究Klotho基因和蛋白在小鼠肾上皮细胞中的作用奠定了基础。

关键词： Klotho 内部核糖体进入位点序列 FLAG标签 TCMK-1细胞

人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体的构建及鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织工程研究与临床康复 2010年第24期14卷 4402-4406页

作者：郭伟韬刘思景王辉肖启贤陈子秋黄云王斌广东医学院附属医院骨科广东省湛江市524001

背景:内部核糖体进入位点序列载体能将上下游基因共同转录,故通过此载体可使连接在一起的人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2同时高表达,可为骨缺损的治疗提供新方法。目的:实验通过引入内部核糖体进入位点序列,采用基于attLXatt... 详细信息

背景:内部核糖体进入位点序列载体能将上下游基因共同转录,故通过此载体可使连接在一起的人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2同时高表达,可为骨缺损的治疗提供新方法。目的:实验通过引入内部核糖体进入位点序列,采用基于attLXattR的λ噬茵体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体并进行鉴定。方法:用聚合酶链反应方法扩增人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2目的基因,将两个基因亚克隆至pIRES2-EGFP载体中,构建phBMP2-IRES-hFGF2载体,通过BP反应将hBMP2-IRES-hFGF2重组到载体pDONR221中,再通过LR反应将其转移到腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST中,线性化后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒Ad-hBMP2-IRES-hFGF2。结果与结论:phBMP2-IRES-hFGF2经酶切及测序鉴定正确,带hBMP2-IRES-hFGF2的载体在293细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,病毒滴度为2.82×1010ifu/mL,证实成功构建了带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体。

关键词：人骨形态发生蛋白2 人成纤维细胞生长因子2 腺病毒载体内部核糖体进入位点序列转染基因治疗

狂犬病毒CVS株G基因和N基因共表达重组腺病毒载体的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江农业学报 2011年第3期23卷 489-494页

作者：李江涛殷相平张金卫丁农柳纪省湖州市农业科学研究院浙江湖州313000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

通过引入内部核糖体进入位点序列,构建狂犬病毒G基因和N基因共表达的腺病毒载体。通过RT-PCR方法扩增得到RVG基因、N基因。N基因先亚克隆入pIRES质粒;G基因经KpnI和M luI,pIRES-N质粒经M luI、NotI双酶切,回收目的基因后与经KpnI和NotI... 详细信息

通过引入内部核糖体进入位点序列,构建狂犬病毒G基因和N基因共表达的腺病毒载体。通过RT-PCR方法扩增得到RVG基因、N基因。N基因先亚克隆入pIRES质粒;G基因经KpnI和M luI,pIRES-N质粒经M luI、NotI双酶切,回收目的基因后与经KpnI和NotI双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在B J5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒,RT-PCR法检测狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法可检测到糖蛋白和核蛋白基因片段。试验成功构建了G和N双基因共表达重组腺病毒载体,为狂犬病活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：狂犬病病毒G基因 N基因内部核糖体进入位点序列重组腺病毒

smad7和uPA双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

胃肠病学和肝病学杂志 2005年第5期14卷 448-451页

作者：汪保灿李定国陈颖伟孙超孙巧玲宗春华上海第二医科大学附属新华医院消化内科上海200092

目的通过引入内部核糖体进入位点序列,构建并鉴定smad7和uPA基因共表达的腺病毒载体。方法PCR扩增uPA和smad7全长cDNA的片段,先后亚克隆入pIRES质粒;更换酶切位点后,将smad7IRESuPA片段克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV,再与pAdEasy1质粒在BJ5... 详细信息

目的通过引入内部核糖体进入位点序列,构建并鉴定smad7和uPA基因共表达的腺病毒载体。方法PCR扩增uPA和smad7全长cDNA的片段,先后亚克隆入pIRES质粒;更换酶切位点后,将smad7IRESuPA片段克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV,再与pAdEasy1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒。酶切鉴定后在293细胞中包装成重组腺病毒Adsmad7/uPA。RTPCR检测Adsmad7/uPA在L02肝细胞中的表达。结果该重组腺病毒质粒经测序、酶切鉴定,均与预期结果一致;转染AD293细胞后,2天可观察到GFP明显表达;RTPCR检测到转染后的L02细胞中smad7和uPA表达增强。结论成功构建了smad7和uPA双基因共表达重组腺病毒载体,为研究mad7和uPA双基因共表达对大鼠肝纤维化的预防、治疗作用奠定基础。

关键词： smad7 尿激酶型纤溶酶原激活剂内部核糖体进入位点序列基因治疗腺病毒

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

pcDNA3与***筛选克隆效率的比较

生物技术通讯 2002年第2期13卷 115-117页

作者：谢庆军王晓彤陆应麟军事医学科学院基础医学研究所北京100850

将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入***与pcDNA3二真核表达载体,构建***和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GFP共表达率分别为0%... 详细信息

将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入***与pcDNA3二真核表达载体,构建***和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GFP共表达率分别为0%和4%,而***-GFP共表达率为75%和100%,差异非常显著;因此在筛选稳定表达目的基因细胞克隆的实验中,***是一个较理想的载体。

关键词：内部核糖体进入位点序列绿色荧光蛋白真核表达载体克隆筛选效率 pcDNA3 pIRES1.neo

狂犬病毒CVS株G基因和IFN-a基因共表达重组腺病毒载体的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

甘肃农业大学学报 2008年第6期43卷 1-5页

作者：李江涛殷相平柳纪省胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 湖州市农业科学研究院浙江湖州313000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

通过RT-PCR方法扩增得到狂犬病毒G基因,PCR方法得到IFN-Αa基因并亚克隆入pIRES获得pIRES-a质粒.双酶切G基因和pIRES-a质粒并回收目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒.... 详细信息

通过RT-PCR方法扩增得到狂犬病毒G基因,PCR方法得到IFN-Αa基因并亚克隆入pIRES获得pIRES-a质粒.双酶切G基因和pIRES-a质粒并回收目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒.线性化后的重组腺病毒质粒转染人胚肾293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒.结果表明:该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达,说明成功构建了G和IFN-a双基因共表达重组腺病毒载体.

关键词：狂犬病病毒G基因 IFN—a基因内部核糖体进入位点序列重组腺病毒