smad7和uPA双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定

作     者：汪保灿 李定国 陈颖伟 孙超 孙巧玲 宗春华 WANG baocan;LI dingguo;CHEN yingwei;SUN chao;SUN qiaoling;ZONG Chunhua

作者机构：上海第二医科大学附属新华医院消化内科上海200092 

出 版 物：《胃肠病学和肝病学杂志》 (Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology)

年 卷 期：2005年第14卷第5期

页      面：448-451页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：smad7 尿激酶型纤溶酶原激活剂 内部核糖体进入位点序列 基因治疗 腺病毒 

摘      要：目的通过引入内部核糖体进入位点序列,构建并鉴定smad7和uPA基因共表达的腺病毒载体。方法PCR扩增uPA和smad7全长cDNA的片段,先后亚克隆入pIRES质粒;更换酶切位点后,将smad7IRESuPA片段克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV,再与pAdEasy1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒。酶切鉴定后在293细胞中包装成重组腺病毒Adsmad7/uPA。RTPCR检测Adsmad7/uPA在L02肝细胞中的表达。结果该重组腺病毒质粒经测序、酶切鉴定,均与预期结果一致;转染AD293细胞后,2天可观察到GFP明显表达;RTPCR检测到转染后的L02细胞中smad7和uPA表达增强。结论成功构建了smad7和uPA双基因共表达重组腺病毒载体,为研究mad7和uPA双基因共表达对大鼠肝纤维化的预防、治疗作用奠定基础。