对虾白斑综合症病毒极早期基因启动子筛选文库的构建

作     者：林梵宇 徐丽美 杨丰 LIN Fan-yu;XU Li-mei;YANG Feng

作者机构：国家海洋局第三海洋研究所生物遗传资源国家海洋局重点实验室福建厦门361005 

出 版 物：《台湾海峡》 (Journal of Oceanography In Taiwan Strait)

年 卷 期：2010年第29卷第2期

页      面：184-188页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(40776096) 

主　　题：海洋生物学 对虾白斑综合症病毒 极早期基因 启动子 筛选文库 增强型绿色荧光蛋白 

摘      要：对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是危害对虾养殖业的主要病原,而WSSV极早期基因对病毒功能基因的转录翻译和调控起着至关重要的作用.本研究将WSSV基因组以超声法随机断裂至400～900bp DNA片段,并插入启动子缺失且多克隆位点下游具有报告基因的载体来构建文库,转染昆虫细胞Hi5.倒置荧光显微镜观察发现部分转染后的细胞有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,表明这部分细胞中的DNA片段可能具有极早期启动子活性.流式细胞仪分析显示,这部分荧光细胞占总细胞的比例为0.35%.由于转染效率为50%,可认为占比0.7%的WSSV基因组随机片段能在Hi5细胞中激发下游报告基因的转录翻译,可能具有极早期基因启动子活性.这对于进一步筛选和鉴定WSSV极早期基因及开展极早期启动子研究具有重要的意义.