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利用多重PCR同时检测WSSV和MBV两种对虾病毒的研究

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高技术通讯 2005年第5期15卷 101-104页

作者：徐丽美杨丰国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室，厦门361005

研究了检测斑节对虾(Penaeus monodon)的主要致病病原--对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)及斑节对虾杆状病毒(monodon baculovirus,MBV)的技术.用多重PCR检测方法,设计了两对特异性引物,从不同虾池中收集斑节对虾,提... 详细信息

研究了检测斑节对虾(Penaeus monodon)的主要致病病原--对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)及斑节对虾杆状病毒(monodon baculovirus,MBV)的技术.用多重PCR检测方法,设计了两对特异性引物,从不同虾池中收集斑节对虾,提取DNA模板,同时检测两种对虾病毒.研究结果表明:该方法检测灵敏度高、特异性好,可检测至每毫克组织100个病毒粒子;从对虾组织中提取的DNA模板对病毒DNA的扩增无抑制,适合于对虾中两种病毒的同时检测.

关键词：同时检测对虾病毒多重PCR WSSV 对虾白斑综合征病毒 syndrome 斑节对虾杆状病毒 PCR检测方法 DNA模板 virus 特异性引物检测灵敏度病毒DNA 致病病原 spot 研究结果病毒粒子提取组织虾池

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深水相变材料夹层管道传热性能分析

深水相变材料夹层管道传热性能分析

作者：徐丽美中国石油大学(北京)

学位级别：硕士

随着油气的开采逐渐进入深海,在低温高压的深海环境下,油气管道内油液温度的降低极易引起管道内蜡结晶及水合物的生成,造成管道堵塞,故流动保障是确保深海油气管道安全运行的重要前提。传统的管道保温方式主要为电加热、热流体加热、添... 详细信息

随着油气的开采逐渐进入深海,在低温高压的深海环境下,油气管道内油液温度的降低极易引起管道内蜡结晶及水合物的生成,造成管道堵塞,故流动保障是确保深海油气管道安全运行的重要前提。传统的管道保温方式主要为电加热、热流体加热、添加降凝剂等。近年来,保温材料由于其良好的储放热特性在众多领域得到广泛应用,借鉴了此思想,将相变材料应用于深海管道中。本文以相变材料夹层管道为研究对象,通过理论分析、数值仿真相结合的方法,研究了深水相变材料夹层管道的传热特性,主要内容包括:首先通过建立二维及三维管道模型,研究了在稳定输油状态下管道的沿程温度分布及径向温度分布;其次利用瞬态传热,分析了停井状态下相变材料自身参数、保温层中相变材料占比大小、相变材料占比相同布局不同等对保温性能的影响,以此得出最佳保温材料及最佳保温层布局;最后研究了再启动状态下,相变材料夹层管道的瞬态蓄热过程及相变情况。研究结果表明相变材料保温层的有效保温时间接近非相变材料保温层的1.4倍,此外熔点大小对保温性能的影响不大,相变材料的位置越靠近内管保温效果越好,为相变材料夹层管道的设计及利用提出了指导。

关键词：深海管道流动保障相变材料瞬态传热

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嵌段共聚物纳米杂化材料的形态调控

嵌段共聚物纳米杂化材料的形态调控

作者：徐丽美济南大学

学位级别：硕士

嵌段共聚物的自组装在纳米材料和技术中扮演着极其重要的角色。如何设计简单高效的、低成本的方法,制备出具有不同形状的纳米结构以适应不同的需要仍是一项艰巨的任务。本课题选择两亲性嵌段共聚物在选择性溶剂中的自组装进行研究,通过... 详细信息

嵌段共聚物的自组装在纳米材料和技术中扮演着极其重要的角色。如何设计简单高效的、低成本的方法,制备出具有不同形状的纳米结构以适应不同的需要仍是一项艰巨的任务。本课题选择两亲性嵌段共聚物在选择性溶剂中的自组装进行研究,通过嵌段共聚物在溶液中的自组装结构为模板与无机组分(溶胶-凝胶或其它无机前驱体)在溶液中共组装,制备不同形状的纳米结构;还初步探讨了,在超临界二氧化碳流体存在的条件下,嵌段共聚物胶束对温度和压力的响应情况及嵌段共聚物/SG在超临界二氧化碳流体处理过程中形态的改变。主要内容包括三部分: (1)对聚苯乙烯-b-聚2-乙烯基吡啶(PS-b-P2VP)与氯金酸(HAuCl)在稀溶液中共组装进行了探究。通过控制溶剂的选择性,即调节四氢呋喃(THF)/乙醇(Ethanol)体积比,可以实现PS-b-P2VP/HAuCl共聚物形态从球形?球状聚集体?囊泡状胶束的转变,其中前驱体HAuCl位于胶束的冠层或囊泡壁中。当体积比为0.1时,没有胶束形成;体积比增加为0.25时,则形成球形胶束;体积比在0.3～0.7之间时,形成球状聚集体;当体积比继续增加到1.0时,形态转变为囊泡。本章还对其形态转变的机理进行了讨论,这对制备含金聚集体提供了一条简单,便捷的方法。 (2)以超临界二氧化碳流体(scCO2)为媒介,研究了超临界CO2流体存在的条件下,温度、压力对聚苯乙烯-b-聚氧化乙烯(PS-b-PEO)嵌段共聚物自组装形态的影响。70℃时,把嵌段共聚物PS-b-PEO的四氢呋喃(THF)溶液在超临界CO2流体中处理不同的时间,PS-b-PEO共聚物首先自组装形成球状胶束;继而球状胶束转变成大的复合胶束,最后转变成囊泡。而且嵌段共聚物/SG在超临界二氧化碳流体处理过程中也形成了囊泡。同时对囊泡形成的可能机理进行了探讨。这种方法可用来制备作为憎水性药物载体的聚合物纳米粒子。 (3)研究了聚2-乙烯基吡啶-b-聚氧化乙烯(P2VP-b-PEO)与氯金酸(HAuCl)在甲苯溶液中共组装,通过控制溶液温度及样品处理温度可以得到两面胶束。嵌段共聚物P2VP-b-PEO与HAuCl在甲苯中溶解,共组装形成球形胶束。将得到的样品分别滴到铜网上,干燥后进行热处理,在实验温度范围内(35-80℃),由于PEO链段对温度改变的响应比较明显,胶束改变形态形成两面胶束,尤其是溶液温度为35℃的样品,形成的两面胶束更为明显。

关键词：嵌段共聚物自组装超临界二氧化碳流体(scCO2) 胶束囊泡

经会阴实时三维超声在女性出口梗阻型便秘病因诊断中的应用研究

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经会阴实时三维超声在女性出口梗阻型便秘病因诊断中的应用研究

作者：徐丽美福建医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨经会阴实时三维超声在女性出口梗阻型便秘病因诊断中的应用价值及其可能的发病机制。方法:回顾性分析2019年1月至2021年7月于福建中医药大学附属人民医院肛肠科确诊为出口梗阻型便秘的56例女性患者及25例无便秘症状的健康女性... 详细信息

目的:探讨经会阴实时三维超声在女性出口梗阻型便秘病因诊断中的应用价值及其可能的发病机制。方法:回顾性分析2019年1月至2021年7月于福建中医药大学附属人民医院肛肠科确诊为出口梗阻型便秘的56例女性患者及25例无便秘症状的健康女性的资料。(1)评估经会阴实时三维盆底超声检查与X线排粪造影在直肠内黏膜脱垂、直肠前突、盆底失弛缓综合征中的诊断结果一致性;(2)比较分析二者在观察出口梗阻型便秘患者静息状态和力排时直肠前壁是否膨出及膨出程度、肛直角的变化;(3)经会阴实时三维超声观察所有研究者静息状态和力排状态时前中后盆腔脏器是否脱垂、肛提肌及肛门括约肌是否完整,根据超声检查结果分为松弛组(直肠前突、直肠内黏膜脱垂、膀胱脱垂、子宫脱垂)、失弛缓组和正常组(无便秘健康女性),对比三组间静息状态与力排状态下耻骨直肠肌厚度的变化,研究并探讨导致女性出口梗阻型便秘诱发可能的机制。结果:(1)56例女性出口梗阻型便秘患者中有42例经会阴实时三维超声诊断直肠内黏膜脱垂阳性,14例阴性;47例经X线排粪造影诊断直肠内黏膜脱垂阳性,阴性9例;二者均阳性有42例,均阴性有9例,诊断结果具有中高度一致性(Kappa=0.73)。35例经会阴实时三维超声诊断直肠前突阳性,21例阴性;38例经X线排粪造影诊断直肠前突阳性,18例阴性;二者均阳性有35例,均阴性有18例,二者诊断结果具有高度一致性(Kappa=0.88)。二者均诊断盆底失弛缓综合征阳性有16例,均阴性有40例,诊断结果完全一致(Kappa=1),二者均观察到16例患者的肛直角力排状态较静息状态变小,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)56例女性出口梗阻型便秘患者中经会阴实时三维超声和X线排粪造影共同诊断为直肠前突35例,两种检查对前突分度诊断具有一定的一致性(κ=0.490,P=0.0010.05)。(3)经会阴实时三维超声诊断正常组25例的肛提肌及肛门括约肌均完整、且前中后盆腔均无脱垂;56例出口梗阻型便秘患者的肛提肌及肛门括约肌均完整,19例伴有前中盆腔脱垂,归入松弛组40例、失弛缓组16例;失弛缓组患者的耻骨直肠肌厚度在静息与力排状态下均比松弛组、正常组厚,且具有统计学意义(P<0.05);失弛缓组超声表现为力排较静息时耻骨直肠肌增厚,与松弛组及正常组的变化相反,差异有统计学意义(P<0.05);力排状态下松弛组厚度较正常组小,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)经会阴实时三维超声与X线排粪造影诊断直肠内黏膜脱垂、直肠前突及盆底失弛缓综合征的一致性好。(2)经会阴实时三维超声能对出口梗阻型便秘类型进行准确分类和量化,对便秘的病因进行诊断和鉴别诊断,为临床诊疗方案的选择提供重要的信息。(3)盆底是一个整体,经会阴实时三维超声在观察盆底肌肉及前中后盆腔脏器中有特殊优势,可为出口梗阻型便秘寻找更多可能的病因提供帮助。

关键词：出口梗阻型便秘实时三维超声 X线排粪造影

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吲哚美辛有关物质检查薄层色谱条件探讨

药物分析杂志 1993年第6期13卷 407-408页

作者：叶飞云徐丽美

基于N蛋白的PEDV抗体ELISA检测方法的建立及初步应用

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基于N蛋白的PEDV抗体ELISA检测方法的建立及初步应用

作者：徐丽美西北农林科技大学

学位级别：硕士

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起感染猪表现为呕吐、发热、脱水、严重腹泻的一种高度接触性肠道传染病,发病主要集中在冬季,可感染各阶段猪,但以哺乳仔猪... 详细信息

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起感染猪表现为呕吐、发热、脱水、严重腹泻的一种高度接触性肠道传染病,发病主要集中在冬季,可感染各阶段猪,但以哺乳仔猪发病和病死率最高,可达100%,给全世界养猪业造成巨大经济损失。目前没有有效的防控措施,有研究表明,接种过疫苗的猪群照样有暴发PED的情况,到2010年这一现象更为严重。因此,建立检测PEDV抗体水平的诊断方法很有必要。本试验对PEDV N基因进行了克隆和原核表达,用纯化重组N蛋白为包被抗原,建立了PEDV血清抗体水平间接ELISA检测方法并初步应用于临床,获得如下研究结果:1.采集陕西省部分地区猪场疑似感染PEDV死亡的猪小肠样品5份,用RT-PCR扩增5份样品的N、S和M基因,分别命名为1-SL、2-BJ、3-YL、4-WN和5-HZ。同源性比较分析,本省流行的5个毒株与中国现用疫苗株CV777的S、M和N基因中S基因同源相似性最低,核苷酸相似性为94.9%9.2%,氨基酸序列相似性为94.9%9.7%,其次是N基因,核苷酸同源相似性为95.1%9.9%,氨基酸序列相似性为96.2%00%,M基因同源相似性最高,氨基酸序列相似性为96.2%00%;遗传进化树分析,5个毒株的S、M和N基因均与疫苗株CV777遗传亲缘关系相对较远;同一省份不同地区5株流行株的不同基因遗传亲缘远近不一样。2.设计N基因的一对特异性引物,提取病毒RNA,以HiScript?Q RT SuperMix for qPCR说明书反转录的cDNA为模版,PCR扩增和核酸胶回收目的基因,克隆N基因并原核表达,重组质粒pET-28a-N转化至大肠埃希菌BL21。重组蛋白分子质量约58 kD,SDS-PAGE分析为可溶性蛋白。用优质镍柱纯化裂解上清液,获得量大、纯度较高的蛋白,Western blot分析与PEDV阳性血清有良好的特异反应性。用纯化N蛋白为包被抗原,ELISA检测最优条件为:抗原包被量每孔0.5μg/mL,血清以1:200倍稀释作用1.0h,酶标二抗以1:5000稀释作用1.0 h,TMB显色时间25 min。敏感性、特异性、重复性检测均良好,初步检测临床164份血清,效果较好。

关键词：猪流行性腹泻遗传变异基因克隆原核表达间接ELISA

对虾白斑杆状病毒(WSBV)定量PCR检测技术研究

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高技术通讯 2001年第1期11卷 14-16页

作者：徐丽美王玮杨丰国家海洋局第三海洋研究所厦门361005

报道了利用DNA重组技术在一段对虾白斑杆状病毒 (WhiteSpotBacilliformVirus ,,WSBV)的基因组DNA片段中缺失 74bp ,重组得到的内标质粒作为竞争性内标模板 ,并与阳标模板或病虾DNA模板共同扩增 ,建立了定量PCR检测方法。研究表明 ,定量... 详细信息

报道了利用DNA重组技术在一段对虾白斑杆状病毒 (WhiteSpotBacilliformVirus ,,WSBV)的基因组DNA片段中缺失 74bp ,重组得到的内标质粒作为竞争性内标模板 ,并与阳标模板或病虾DNA模板共同扩增 ,建立了定量PCR检测方法。研究表明 ,定量PCR方法检测灵敏度达 10病毒分子DNA/ μl,样品DNA模板制备回收率约 50 % 。

关键词：定量PCR 对虾白斑杆状病毒 WSBV 内标模板检测

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对六种塑料薄膜抗冲击性能的探讨

塑料工业 2017年第9期45卷 92-95页

作者：郭风徐丽美李丽山东省产品质量检验研究院山东省体育用品质量监督检验中心山东济南250102 山东省质量技术监督教育培训中心山东济南250013

在标准试验条件下,对食品包装常用的六种塑料薄膜测试了抗冲击破损质量,比较了不同材质的薄膜在抗冲击性能中的差异。结果表明,聚乙烯薄膜比聚丙烯薄膜的冲击强度要高。

关键词：薄膜冲击性能破损

分子信标探针用于PCR检测对虾白斑杆状病毒

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生物化学与生物物理进展 2000年第3期27卷 277-280页

作者：章晓波徐洵李庆阁徐丽美 *** 中国科学技术大学生命科学学院合肥230026 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物工程重点实验室厦门361005 厦门大学生物系厦门361005

将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针 ,用于该病毒的PCR检测 .温度与荧光强度之间的关系表明 ,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开 ,符合PCR对分子信标探针的要求 .结果表明 ,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩... 详细信息

将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针 ,用于该病毒的PCR检测 .温度与荧光强度之间的关系表明 ,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开 ,符合PCR对分子信标探针的要求 .结果表明 ,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩增 ,分子信标探针只能与目的DNA杂交 ,具有较高的特异性 .随着PCR循环数的增加以及含目的DNA的质粒拷贝数的增加。

关键词：对虾白斑杆状病毒 PCR 分子信标探针