新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞体外构建组织工程化髓核的实验研究

作     者：曾超 朱美峰 徐宝山 杨强 王连永 李秀兰 张杨 马信龙 夏群 杜立龙 丁晓明 刘英 

作者机构：天津市天津医院脊柱外科天津市300211 天津医科大学研究生院天津市300070 南开大学生命科学院天津市300071 天津市天津医院骨研所细胞工程室天津市300211 天津市南开医院急诊科300100 

出 版 物：《中国矫形外科杂志》 (Orthopedic Journal of China)

年 卷 期：2014年第22卷第11期

页      面：1018-1024页

核心收录：

学科分类：08[工学] 080501[工学-材料物理与化学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 080502[工学-材料学] 

基　　金：国家自然科学基金课题资助(编号:81272046 31000432) 中国博士后科学基金资助项目(编号:2011M500530 2012T50235) 天津市卫生局科技基金重点资助项目(编号:2013KR16) 天津市卫生局攻关课题(编号:10KG113) 

主　　题：丝素蛋白 髓核细胞 组织工程 增殖 

摘      要：[目的]观察以新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞体外构建组织工程化髓核的可行性。[方法]分离培养兔髓核细胞,与丝素蛋白多孔支架在体外复合培养,建立组织工程化髓核模型,通过扫描电镜、HE染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化以及酶联免疫吸附测定观察细胞在支架上1周和3周的生长及增殖情况。[结果]培养1周后,扫描电镜显示细胞呈球状均匀地贴附在支架内部。细胞-支架复合体HE染色可见支架内部有大量髓核细胞,甲苯胺兰染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。培养3周后,扫描电镜显示细胞成层黏附于支架表面,细胞重叠生长,分泌大量细胞外基质,HE染色可见支架内部有大量髓核细胞填满支架孔隙并分泌大量细胞外基质,甲苯胺兰染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。酶联免疫吸附测定:3周组蛋白多糖含量(52.4±4.5)ng/ml明显高于1周组(29.3±3.6)ng/ml,P0.05,3周组的II型胶原含量(24.3±1.8)ng/ml明显高于1周组(15.16±1.5)ng/ml,P0.05。[结论]新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞体外培养生长良好,分泌大量类似髓核样细胞外基质,可以用于体外构建组织工程化髓核。