牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工
Fusion Expression of the Synthesized Gene of Bovine Growth Hormone-Releasing Factor and the Chemical-Processing of the Product作者机构:中国科学院上海生物化学研究所
出 版 物:《Acta Biochimica et Biophysica Sinica》 (生物化学与生物物理学报(英文版))
年 卷 期:1994年第26卷第6期
页 面:577-583页
核心收录:
学科分类:0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术]
摘 要:通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第27位为Ile的牛生长激素释放因子[Ile27]bGBF(1~44)OH基因的5’端ATG后插入Trp密码子序列(TGG),并分别构建了PLpromoter控制下的、以β-半乳糖苷酶(β-Gal,310a.a.)和proteinA结合IgGdomainB.C(PABC,150a.a.)为载体蛋白的融合型基因表达质pBLE310和pBLPAE2D,在大肠杆菌中得到高效表达。经SDS-PAGE分析,表达产物β-Gal-bGRF和PABC-bGRF分别可达全菌蛋白的20%和30%以上,其中PABC-bGRF通过IgG固相柱亲和层析,被快速分离纯化为均一条带,每升摇瓶菌可得到100mg以上PABC-bGRF融合蛋白。进而使用Trp氧化试剂成功地加工裂解了PABC-bGRF融合蛋白;裂解率达55%:裂解混合物经IgG柱一步亲和层析,获得目的基因产物[Ile27]bGRF(1~44)OH;N端氨基酸序列分析表明产物N端15个氨基酸顺序均与天然产物N端序列完全一致。