牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工

作     者：李伯良 胡明 杨新颖 梁镇和 李其梁 王德宝 

作者机构：中国科学院上海生物化学研究所 

出 版 物：《Acta Biochimica et Biophysica Sinica》 (生物化学与生物物理学报(英文版))

年 卷 期：1994年第26卷第6期

页      面：577-583页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

主　　题：bGRF基因 融合表达 蛋白加工 

摘      要：通过寡核苷酸引导的定位突变，在人工全合成的第２７位为Ｉｌｅ的牛生长激素释放因子［Ｉｌｅ２７］ｂＧＢＦ（１～４４）ＯＨ基因的５’端ＡＴＧ后插入Ｔｒｐ密码子序列（ＴＧＧ），并分别构建了ＰＬｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下的、以β－半乳糖苷酶（β－Ｇａｌ，３１０ａ．ａ．）和ｐｒｏｔｅｉｎＡ结合ＩｇＧｄｏｍａｉｎＢ．Ｃ（ＰＡＢＣ，１５０ａ．ａ．）为载体蛋白的融合型基因表达质ｐＢＬＥ３１０和ｐＢＬＰＡＥ２Ｄ，在大肠杆菌中得到高效表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，表达产物β－Ｇａｌ－ｂＧＲＦ和ＰＡＢＣ－ｂＧＲＦ分别可达全菌蛋白的２０％和３０％以上，其中ＰＡＢＣ－ｂＧＲＦ通过ＩｇＧ固相柱亲和层析，被快速分离纯化为均一条带，每升摇瓶菌可得到１００ｍｇ以上ＰＡＢＣ－ｂＧＲＦ融合蛋白。进而使用Ｔｒｐ氧化试剂成功地加工裂解了ＰＡＢＣ－ｂＧＲＦ融合蛋白；裂解率达５５％：裂解混合物经ＩｇＧ柱一步亲和层析，获得目的基因产物［Ｉｌｅ２７］ｂＧＲＦ（１～４４）ＯＨ；Ｎ端氨基酸序列分析表明产物Ｎ端１５个氨基酸顺序均与天然产物Ｎ端序列完全一致。