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一种简单有效的克隆未知旁侧DNA片段的方法(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第3期34卷 365-368页

作者：宋保亮戚炜李伯良中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室

操作含长插入片段的DNA克隆时 ,经常需要进行亚克隆和测序实验。通常的方法首先是得到插入片段的限制性内切酶谱 ,然后选择合适的内切酶消化DNA ,分离靶片段 ,将其连接入质粒载体中进行下一步操作。但这种方法工作量大 ,步骤繁琐。在此 ... 详细信息

操作含长插入片段的DNA克隆时 ,经常需要进行亚克隆和测序实验。通常的方法首先是得到插入片段的限制性内切酶谱 ,然后选择合适的内切酶消化DNA ,分离靶片段 ,将其连接入质粒载体中进行下一步操作。但这种方法工作量大 ,步骤繁琐。在此 ,介绍一种不需要做限制性内切酶谱分析 ,而根据靶片段的旁侧序列直接进行亚克隆实验的方法。首先 ,选择合适的限制性内切酶消化含长插入片段的DNA克隆 ,其中一种酶切在已知的旁侧序列上 ,另一为随机选择 ;然后酶切混合物与线性化的质粒载体连接 ,转化细菌得到一“亚克隆库” ;将其中的克隆挑选入 96孔板培养后 ,按行或列混合菌液得到相应的“pool” ;最后 ,用PCR方法筛选获得含靶DNA片段的阳性克隆 ,其中所用的引物一个与已知的旁侧DNA序列配对 ,另一个与质粒载体上序列配对 ,PCR扩增已知的旁侧DNA片段以鉴定阳性克隆。多次独立实验表明该方法简单有效 ,可广泛用于亚克隆和DNA步移实验

关键词：亚克隆筛选步移 ACAT

人骨形成蛋白2A活性片段在大肠杆菌中的高效表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第1期28卷 8-14页

作者：林松徐印坎李伯良中国科学院上海生物化学研究所第二军医大学长征医院

将编码人骨形成蛋白２Ａ（ＢＭＰ２Ａ）Ｃ端１７３个氨基酸（ＢＭＰ２３）和１３４个氨基酸（ＢＭＰ２４）的ＤＮＡ基因片段分别重组克隆进入ＰＬ启动子控制下的表达载体，构建了表达质粒ｐＢＬＢＭＰ２３和ｐＢＬＢＭＰ２４，分别转化... 详细信息

将编码人骨形成蛋白２Ａ（ＢＭＰ２Ａ）Ｃ端１７３个氨基酸（ＢＭＰ２３）和１３４个氨基酸（ＢＭＰ２４）的ＤＮＡ基因片段分别重组克隆进入ＰＬ启动子控制下的表达载体，构建了表达质粒ｐＢＬＢＭＰ２３和ｐＢＬＢＭＰ２４，分别转化大肠杆菌进行表达研究．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析温敏诱导的表达菌，可以分别观察到分子量为２０ｋＤ和１５．５ｋＤ的高表达条带，与理论计算的分子量一致，表达量分别占细菌蛋白质总量的１０％和２０％左右。表达产物经包含体制备达到８０％以上纯度。Ｎ端序列测定的１５个氨基酸，与重组ｃＤＮＡ基因编码的序列相同．ＢＭＰ２３和ＢＭＰ２４包含体经复性处理后，得到二聚体分子蛋白质条带，与骨基质胶原重组后在大鼠体内测活，观察到ＢＭＰ２３诱导软骨细胞生成，ＢＭＰ２４刺激丰富的骨样胶原组织合成．

关键词：骨形成蛋白诱导成骨软骨细胞胶原组织

酵母豆蔻酰辅酶A：蛋白质N端转酰基酶基因的克隆与表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第2期28卷 115-123页

作者：段治军陈长征李伯良中国科学院上海生物化学研究所

利用ＰＣＲ技术，从酵母染色体中扩增得到酵母豆蔻酰－ＣｏＡ：蛋白质Ｎ端转酰基酶（ＹＳＣＮＭＴ）基因，并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ＋载体中。由ＤＮＡ全序测定表明，获得了ＹＳＣＮＭＴ编码基因。进一步构建了Ｔ７Ｐｒｏｍ... 详细信息

利用ＰＣＲ技术，从酵母染色体中扩增得到酵母豆蔻酰－ＣｏＡ：蛋白质Ｎ端转酰基酶（ＹＳＣＮＭＴ）基因，并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ＋载体中。由ＤＮＡ全序测定表明，获得了ＹＳＣＮＭＴ编码基因。进一步构建了Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下的含上述完整ＹＳＣＮＭＴ编码基因的表达质粒ｐＭＦＴ７－５－ＮＭＴ，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３），进行ＩＰＴＧ诱导表达研究。通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，观察到一与理论分子量一致的诱导条带（约５３ｋＤ），占全菌蛋白的３９％左右，且可溶性部分约占上清液中全部蛋白的３４％。经一步Ｐ１１磷酸纤维素阳离子交换柱层析，将其纯化到纯度达９７％以上．纯化的表达产物经Ｎ端氨基酸序列分析，所测定的Ｎ端５个氨基酸的序列，与从克隆的ＹＳＣＮＭＴ基因推出的氨基酸序列完全一致（不含Ｎ端Ｍｅｔ）。对所得的ＹＳＣＮＭＴ进行酶活力鉴定，观察到了明显的活力。

关键词：酵母豆蔻酰-CoA 蛋白质N端转酰基酶 PCR 基因表达

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县委书记论农业

县委书记论农业

1988年

作者：李伯良

本书选收县委书记论农业方面的文章40余篇,内容涉及家庭承包经营责任制、土地制度建设、强化社会化服务、发展农林牧生产、农业开发、农业投资等问题。

ISBN: (纸本)7209005463

关键词：农业经济学科:研究地点:中国学科:文集

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岗九醒酒现代戏曲

岗九醒酒现代戏曲

重组人骨形态形成蛋白2在家蚕幼虫中表达及产物纯化

1984年

作者：李伯良编

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第4期28卷 374-379页

作者：林松宓怡德戴聂红吴祥甫李伯良中国科学院上海生物化学研究所

将编码人ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因插入昆虫杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ１，与修饰的家蚕核形多角体病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞，通过同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因的重组病毒... 详细信息

将编码人ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因插入昆虫杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ１，与修饰的家蚕核形多角体病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞，通过同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因的重组病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫ－ＢＭＰ２。用重组病毒感染家蚕幼虫，第五天ＢＭＰ２表达率最高，每毫升蚕血淋巴中约１０μｇ表达产物；表达产物在在体内被加工成Ｃ－端１６ｋＤ片段，以二硫键连结成分子量为３０ｋＤ的同源二聚体；经纯化获得９０％以上纯度的成熟ＢＭＰ２，与骨基质胶原结合后植入大鼠皮下，７天后在局部诱导生成软骨组织。

关键词：骨形态形成蛋白家蚕核形多角体病毒表达诱导成骨

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蛋白质的豆蔻酰化

生物化学与生物物理进展 1998年第1期25卷 5-6页

作者：许正平李伯良浙江大学生物科学与技术系中国科学院上海生物化学研究所

蛋白质的豆蔻酰化许正平李伯良（浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）蛋白质豆蔻酰化是指真核细胞中豆蔻酰基在豆蔻酰ＣｏＡ：蛋白质Ｎ端豆蔻酰转移酶（Ｍｙｒｉｓｔｏｙ... 详细信息

蛋白质的豆蔻酰化许正平李伯良（浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）蛋白质豆蔻酰化是指真核细胞中豆蔻酰基在豆蔻酰ＣｏＡ：蛋白质Ｎ端豆蔻酰转移酶（ＭｙｒｉｓｔｏｙｌＣｏＡ：ｐｒｏｔｅｉｎＮｍｙｒ...

关键词：蛋白质豆蔻酰化生物功能

细胞因子受体介导的JAK-STAT信号传导途径

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细胞生物学杂志 1997年第4期19卷 145-152页

作者：江智红李伯良中国科学院上海生物化学研究所 200031

细胞因子通过与其相应受体的相互作用来介导其生物效应。细胞因子受体大多数虽不含蛋白激酶催化结构域,但配体的结合却能诱导受体上的酪氨酸被磷酸化。最近的研究发现,有一个胞内酪氨酸激酶家族——Janus kinases(Jaks)与此有关。Jaks... 详细信息

细胞因子通过与其相应受体的相互作用来介导其生物效应。细胞因子受体大多数虽不含蛋白激酶催化结构域,但配体的结合却能诱导受体上的酪氨酸被磷酸化。最近的研究发现,有一个胞内酪氨酸激酶家族——Janus kinases(Jaks)与此有关。Jaks与受体胞内近膜区相联,导致Jaks的磷酸化和活化;激活的Jaks则磷酸化受体及胞内一类转录因子——signal trans-ducers and activators of transcription(STAT)。从而揭示了细胞因子信号传导的一个新途径,JAK-STAT途径。

关键词：细胞因子受体信号传导途径 JAK-STAT途径

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淋巴管系统相关研究现状与展望

科学通报 2017年第10期62卷 1030-1040页

作者：何玉龙朱元贵李伯良董尔丹苏州大学唐仲英血液学研究中心江苏省血液学协同创新中心苏州215123 国家自然科学基金委员会医学科学部北京100085 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

近20年来,淋巴管研究取得了长足的进展.淋巴管系统在维持组织体液平衡、免疫监控,以及脂质吸收转运等生理过程中起重要作用.淋巴管发育缺陷或由于感染、创伤等引起淋巴液回流障碍可导致淋巴水肿;淋巴管异常生长也参与许多重大疾病的发... 详细信息

近20年来,淋巴管研究取得了长足的进展.淋巴管系统在维持组织体液平衡、免疫监控,以及脂质吸收转运等生理过程中起重要作用.淋巴管发育缺陷或由于感染、创伤等引起淋巴液回流障碍可导致淋巴水肿;淋巴管异常生长也参与许多重大疾病的发生与发展,包括肿瘤转移、炎症、心血管疾病等.深入了解淋巴管在生理与病理过程中的功能调控机制,对于人类健康及相关疾病的防治具有重要的意义.

关键词：淋巴管生成体液平衡免疫监控脂质代谢淋巴水肿肿瘤转移