牦牛ATG5多克隆抗体的制备及应用

作     者：高翔 潘阳阳 王萌 焦正兴 王靖雷 马文斌 王军乾 余四九 崔燕 王立斌 GAO Xiang;PAN Yangyang;WANG Meng;JIAO Zhengxing;WANG Jinglei;MA Wenbin;WANG Junqian;YU Sijiu;CUI Yan;WANG Libin

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第43卷第10期

页      面：2093-2100页

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：甘肃省自然科学基金资助项目(22JR5RA864) 国家自然科学基金资助项目(32160850) 甘肃省重点人才资助项目(2022-0623-RCC-0307) 

主　　题：牦牛 ATG5 原核表达 多克隆抗体 自噬 

摘      要：为了进一步研究自噬在牦牛生殖活动中发挥的作用,本研究通过合成牦牛自噬相关5(autophagy related 5,ATG5)基因,并将合成的基因插入pET-32a质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导表达ATG5重组蛋白并纯化,免疫日本大耳白兔,制备牦牛ATG5多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体的效价,蛋白质印迹(Western blot,WB)技术检测多克隆抗体的特异性。通过Western blot、免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)和免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)应用所制备的抗体检测ATG5蛋白在牦牛生殖器官中的表达。结果成功构建了pET-32a-ATG5原核表达质粒,转化大肠杆菌IPTG诱导获得了大小约为53 kDa(含His和Trx标签)的重组蛋白;制备的牦牛ATG5多克隆抗体效价为1∶1280000,特异性良好。应用显示,ATG5蛋白在牦牛睾丸和输卵管中均有表达。本研究成功制备了牦牛ATG5多克隆抗体,特异性良好,可用于检测牦牛ATG5蛋白的表达,为进一步研究自噬在牦牛生殖生理活动中发挥的作用积累了材料。