新型二合一PiggyBac转座系统的构建及功能验证

作     者：张尧仓 彭玉 丁可昕 台福敏 郑晓飞 秦宜德 付汉江 ZHANG Yao-cang;PENG Yu;DING Ke-xin;TAI Fu-min;ZHENG Xiao-fei;QIN Yi-de;FU Han-jiang

作者机构：安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所放射生物学北京市重点实验室北京100850 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2022年第42卷第6期

页      面：39-46页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金(81773038、32071290)资助项目。 

主　　题：PiggyBac转座子 稳定转染 EGFP 

摘      要：目的:PiggyBac(PB)转座子是一种可移动的遗传元件,采用“剪切和粘贴机制在载体和染色体之间进行转座;通过将转座子元件和转座酶表达框整合到一个表达载体中,构建简便易用的二合一PB转座系统。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获取PiggyBac转座系统所需转座子元件和转座酶表达框,利用T4 DNA连接酶将转座酶表达框插入到pUC18载体上,再利用Gibson同源重组技术将转座子元件与重组载体结合构建二合一PB转座系统;使用该系统携带的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)以及功能性损伤抑制蛋白(damage-suppressing protein,DSUP)检测其有效性及可靠性。结果:在所有筛选获得的嘌呤霉素抗性细胞中,EGFP都是明亮可见;利用此二合一PB转座系统成功获得了可高效表达功能性损伤抑制蛋白的稳定细胞系,证明外源基因可被有效整合到基因组DNA中并表达。结论:成功构建了新型二合一PB转座系统,使稳定表达细胞系的建立更加经济简便。