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齐齐哈尔地区淡水螺体内4种吸虫幼虫的分子鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第3期42卷 360-366页

作者：李健科张静刘柳刘谦豪张浩齐齐哈尔医学院黑龙江齐齐哈尔161000

目的对分离自齐齐哈尔市嫩江流域淡水螺体内的4种吸虫幼虫进行分子生物学鉴定。方法2023年3-7月在齐齐哈尔市嫩江浏园段水域内采集淡水螺,分类鉴定后压碎螺壳,显微镜下观察内脏团,分离螺体内的吸虫幼虫。分别提取不同吸虫幼虫总DNA,PC... 详细信息

目的对分离自齐齐哈尔市嫩江流域淡水螺体内的4种吸虫幼虫进行分子生物学鉴定。方法2023年3-7月在齐齐哈尔市嫩江浏园段水域内采集淡水螺,分类鉴定后压碎螺壳,显微镜下观察内脏团,分离螺体内的吸虫幼虫。分别提取不同吸虫幼虫总DNA,PCR扩增吸虫幼虫内转录间隔区2 (ITS2),对扩增产物进行测序,利用Contig Express软件拼接后在NCBI网站进行序列比对。用MEGA 11.0软件以邻接法构建系统进化树并计算遗传距离。结果共采集到7种淡水螺(2 771只),其中阳性螺3种,分别为黑龙江短沟蜷(282只)、中国圆田螺(709只)和绘环棱螺(142只)。共检出4种吸虫幼虫,每只淡水螺只寄生1种吸虫幼虫,分别为寄生于黑龙江短沟蜷和绘环棱螺体内的幼虫a (阳性率25.23%,107/424),寄生于中国圆田螺体内的幼虫b (阳性率2.82%,20/709),寄生于黑龙江短沟蜷体内的幼虫c (阳性率0.70%,2/282)和寄生于中国圆田螺体内的幼虫d(阳性率0.56%,4/709)。幼虫a~d的ITS2目的序列扩增长度分别约为523、701、960和554 bp。基因测序及序列比对结果显示,幼虫a ITS2序列与Notocotylus ephemera (GenBank:OP720890.1)序列一致性最高,为98.49%;与N. ephemera和Notocotylidae sp.的遗传距离最近,均为0.014,推测幼虫a为背孔科吸虫。幼虫b ITS2序列与卷棘口吸虫(GenBank:GQ463130.1)序列一致性最高,为94.56%;与卷棘口吸虫的遗传距离最近,为0.085,推测幼虫b为棘口科棘口属吸虫。幼虫c ITS2序列与Echinochasmus suifunensis (GenBank:MT447049.1)序列一致性最高,为99.82%;与E. milvi的遗传距离最近,低于0.001,推测幼虫c为棘口科棘隙属吸虫。幼虫d ITS2序列与马尔科维奇侧殖吸虫(GenBank:OP106430.1)序列一致性最高,为92.36%;与Asymphylodora parasquamosa的遗传距离最近,为0.090,推测幼虫d为单睾科侧殖属吸虫。结论齐齐哈尔嫩江流域内淡水螺体内可能寄生有背孔科吸虫、棘口科棘口属和棘隙属吸虫、单睾科侧殖属吸虫,提示可能危害鱼类、家禽及哺乳动物健康。

关键词：淡水螺吸虫幼虫 ITS2序列种类鉴定

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小麦赤霉病拮抗菌JB7的拮抗活性及鉴定

微生物学报 2024年第5期64卷 1580-1592页

作者：毕钰张琳余红凤王志刚徐伟慧李阳齐齐哈尔大学生命科学与农林学院黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省农业微生物制剂产业化技术创新中心黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省农用生物制剂产业化协同创新中心黑龙江齐齐哈尔161006

由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum,Fg)引起的赤霉病是限制小麦生产的主要病害之一。生物防治是一种高效且可持续的防治方法。【目的】从小麦种子内筛选具有抑制禾谷镰刀菌的菌株并对其生防潜力进行评估,为小麦赤霉病生防制剂的开发与... 详细信息

由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum,Fg)引起的赤霉病是限制小麦生产的主要病害之一。生物防治是一种高效且可持续的防治方法。【目的】从小麦种子内筛选具有抑制禾谷镰刀菌的菌株并对其生防潜力进行评估,为小麦赤霉病生防制剂的开发与利用提供菌种资源及理论支撑。【方法】采用平板对峙、孢子萌发法和无菌上清液抑菌试验筛选小麦种子内对禾谷镰刀菌具有拮抗活性的内生菌株;利用扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)和共聚焦扫描电镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察并分析无菌上清液对Fg的分生孢子形态、膜完整性以及胞内活性氧的影响;通过盆栽试验验证内生菌对小麦赤霉病的生防效果;应用二代Illumina HiSeq测序平台进行全基因组测序。【结果】从小麦种子中分离出一株高效抑制Fg生长的内生菌株JB7,其衰亡期无菌上清液对Fg孢子萌发抑制率高达85.23%。菌株JB7的无菌上清液使Fg孢子表面凹陷,破坏其细胞膜,造成核酸和蛋白质的渗漏,诱导Fg菌丝活性氧的累积,引起Fg菌丝可溶性蛋白和丙二醛含量的显著升高。该菌株具有分泌蛋白酶、纤维素酶、葡聚糖酶和产铁载体的能力。盆栽试验表明菌株JB7能显著降低小麦赤霉病的病情指数(P<0.05)。经全基因组学鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)JB7,该菌株基因组中含有12个抑菌功能的次级代谢产物合成基因簇。【结论】菌株JB7能抑制禾谷镰刀菌的生长,对小麦赤霉病有较强的防效,可作为生物防治小麦赤霉病的候选菌株。

关键词：小麦赤霉病禾谷镰刀菌甲基营养型芽孢杆菌生物防治活性氧积累

基于复合多尺度等概率符号化样本熵的两相流动态特性分析

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大连理工大学学报 2024年第2期64卷 127-137页

作者：孙庆明巴頔钟林王成龙陈淑鑫齐齐哈尔大学机电工程学院黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省精密制造装备及工业感知工程技术研究中心黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省智能制造装备产业化协同创新中心黑龙江齐齐哈尔161006

多尺度样本熵(MSE)在两相流动态特性分析中存在两点不足:一是熵值无法单纯反映时间序列信息增长速率,在高尺度下稳定性较差;二是传统粗粒化过程中有部分数据信息丢失.针对上述问题,提出复合多尺度等概率符号化样本熵(CMESSE),并通过对... 详细信息

多尺度样本熵(MSE)在两相流动态特性分析中存在两点不足:一是熵值无法单纯反映时间序列信息增长速率,在高尺度下稳定性较差;二是传统粗粒化过程中有部分数据信息丢失.针对上述问题,提出复合多尺度等概率符号化样本熵(CMESSE),并通过对几种典型非线性时间序列进行分析验证了其有效性.与MSE相比,CMESSE不仅能够有效表征不同动力系统非线性时间序列复杂性,而且在时间序列较短时稳定性更好.在此基础上分析了123组流动条件下垂直上升管内空气-水两相流压差波动时间序列.研究结果表明,泡状流、塞状流及混状流的CMESSE变化趋势能够在不同尺度下定性表征不同流型的动态特性,CMESSE复杂性指数可跨多尺度定量描述不同流型的动力学复杂性.

关键词：复合多尺度符号化样本熵两相流动态特性

基于网络药理学与代谢组学和分子对接的整合药理学策略研究温胆汤治疗慢性阻塞性肺疾病的作用机制

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中国药学杂志 2024年第11期59卷 998-1010页

作者：牛旭东何溢琨何梓龙陈爱灵高文浩任腾飞朱珍珍汪芳任睿楠林松王天阳齐齐哈尔医学院基础医学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院基础医学院基础医学科研中心黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省药食同源资源与代谢性疾病防治重点实验室黑龙江齐齐哈尔161006

目的探讨温胆汤治疗慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的作用机制。方法首先,基于网络药理学方法,利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Swiss Target Prediction和Metascape等数据库,揭示温胆汤治... 详细信息

目的探讨温胆汤治疗慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的作用机制。方法首先,基于网络药理学方法,利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Swiss Target Prediction和Metascape等数据库,揭示温胆汤治疗COPD的潜在机制;其次,采用代谢组学方法,研究温胆汤对COPD诱发内源性代谢物紊乱的干预作用;最后,借助MetScape算法,整合网络药理学与代谢组学研究结果,并采用分子模拟对接和分子生物学方法,深入研究温胆汤治疗COPD的作用机制。结果网络药理学结果揭示温胆汤的102个潜在活性成分及其治疗COPD的98个潜在靶点。进一步分析显示温胆汤的11个潜在药效物质,包括3-叔丁基己二酸、6-甲基姜辣二醇双乙酸酯和甘草异黄烷酮等可能通过调节脂质与动脉粥样硬化、环磷腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)信号通路和白介素17(interleukin-17,IL-17)信号通路等发挥疗效。另一方面代谢组学研究显示,丙二醇、N-乙酰神经氨酸、苏氨酸、原胆酸、2-氧异戊酸酯、乙酰磷酸、柠檬酸盐和异丁酸等9种内源性物质,可能是温胆汤治疗COPD的关键代谢物。最后整合分析显示,脂质代谢与氨基酸代谢可能是温胆汤治疗COPD的关键过程,黄嘌呤脱氢酶(xanthine dehydrogenase,XDH)、激酶插入区受体(kinase insert domain receptor,KDR)、磷酸二酯酶5A(phosphodiesterase 5A,PDE5A)、细胞色素P450家族2亚家族C成员9(cytochrome P450 family 2 subfamily C member 9,CYP2C9)和成员19(cytochrome P450 family 2 subfamily C member 19,CYP2C19)等同氧化和炎症相关的基因可能是温胆汤发挥治疗作用的关键靶点;并且结果显示温胆汤可有效改善COPD大鼠肺部充血、水肿和炎性细胞浸润等多种病理状态,显著降低COPD大鼠肺组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量和丙二醛(malonaldehyde,MDA)活性,提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;而且分子对接结果也揭示了潜在药效物质与核心靶点基因之间的关联性。结论基于代谢组学、网络药理学和分子对接的整合药理学研究表明温胆汤可能通过调控炎症反应、氧化应激、脂质代谢和氨基酸代谢等途径实现治疗COPD的作用。

关键词：温胆汤慢性阻塞性肺疾病网络药理学代谢组学分子对接炎症因子

黄连解毒汤调节HIF-1α/VEGF信号通路改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第7期30卷 59-65页

作者：张英华吕翰林周建文樊丽李洋齐齐哈尔医学院精神卫生学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院附属第一医院黑龙江齐齐哈尔161041 齐齐哈尔医学院医药科学研究院黑龙江齐齐哈尔161006

目的:基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨黄连解毒汤(HLJDT)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠学习记忆的影响。方法:40只5月龄APP/PS1小鼠,分为模型组、多奈哌齐组(0.001 g·kg^(-1)·d^... 详细信息

目的:基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨黄连解毒汤(HLJDT)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠学习记忆的影响。方法:40只5月龄APP/PS1小鼠,分为模型组、多奈哌齐组(0.001 g·kg^(-1)·d^(-1))、黄连解毒汤低、中、高剂量(1.5、3、6 g·kg^(-1)·d^(-1)),C57BL/6小鼠8只为正常组。连续给药45 d,进行Morris水迷宫实验,测定脏器指数,透射电镜观察小鼠脑血管内皮细胞形态结构,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测APP、HIF-1α、VEGF mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠潜伏期明显延长(P<0.05),目标平台周围路程及时间明显缩短(P<0.05),脑和脾脏的脏器指数明显降低(P<0.05),血管内皮细胞核固缩,胞质不丰富,海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA蛋白表达增加(P<0.05),BDNF蛋白表达降低(P<0.05),APP、HIF-1α、VEGF mRNA表达增加(P<0.05)。与模型组比较,HLJDT高剂量组潜伏期明显缩短(P<0.05),目标平台周围路程及时间延长(P<0.05),脑和脾脏的脏器指数明显升高(P<0.05),血管内皮细胞细胞器结构较清晰,海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA蛋白表达降低(P<0.05),BDNF蛋白表达增加(P<0.05),APP、HIF-1α、VEGF mRNA表达降低(P<0.05)。结论:HLJDT可通过降低HIF-1α和VEGF表达来提高小鼠学习记忆能力,从而发挥对神经的保护作用。

关键词：黄连解毒汤淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α) 血管内皮生长因子(VEGF)

中国弯颈霉多糖抗氧化和抑制氧化应激活性研究

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食品工业科技 2024年第2期45卷 333-341页

作者：白明健周颖程昊边聪李名正李林张春晶齐齐哈尔医学院医学技术学院黑龙江齐齐哈尔161006

目的:探究中国弯颈霉菌丝体多糖(Tolypocladium sinense polysaccharide,TSP)的体外抗氧化活性和抑制过氧化氢诱导小鼠胰岛MIN6细胞氧化应激导致的细胞凋亡。方法:采用热水浸提法提取中国弯颈霉菌丝体多糖,随后测定其超氧阴离子自由基(s... 详细信息

目的:探究中国弯颈霉菌丝体多糖(Tolypocladium sinense polysaccharide,TSP)的体外抗氧化活性和抑制过氧化氢诱导小鼠胰岛MIN6细胞氧化应激导致的细胞凋亡。方法:采用热水浸提法提取中国弯颈霉菌丝体多糖,随后测定其超氧阴离子自由基(superoxide anion,O^(-)_(2)·)、羟自由基(hydroxy radical,·OH)、对1,1-二苯基苦基苯肼自由基(P-1,1-diphenylpicryl phenylhydrazine radical,DPPH·)清除能力;采用200μmol/L过氧化氢(hydrogenperoxide,H_(2)O_(2))诱导小鼠胰岛MIN6细胞氧化应激,给予高剂量和低剂量TSP(0.625、0.156 mg/mL)进行保护,MTT法测定MIN6细胞生存率;倒置显微镜观察细胞形态;采用试剂盒测定培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平,细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf-2)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,pJNK)相对表达量。结果:TSP对于三种自由基具有显著的清除效果;细胞实验结果显示,与过氧化氢模型组相比TSP高低剂量给药组细胞生存率显著上升(P<0.01,P<0.05);悬浮细胞数量极显著下降(P<0.01);培养基中LDH极显著含量下降(P<0.01);细胞凋亡率显著降低(P<0.01,P<0.05);细胞内SOD水平显著增高(P<0.01,P<0.05),丙二醛含量极显著下降(P<0.01);Western Blot结果显示相较于模型组,高剂量给药组Nrf-2表达量显著增高(P<0.05),高剂量和低剂量给药组pJNK表达量显著下降(P<0.01,P<0.05)。结论:TSP具有显著的抗氧化活性,能够通过调节Nrf-2和pJNK的表达来减少氧化应激导致的细胞凋亡。

关键词：中国弯颈霉多糖抗氧化活性氧化应激细胞凋亡

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过氧麦角甾醇通过调控线粒体凋亡途径诱导人肝癌细胞凋亡

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中国中药杂志 2024年第12期49卷 3365-3372页

作者：王璐罗然赵音旭邹宇卜明林宇齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006

探讨过氧麦角甾醇(ergosterol peroxide, EP)对人肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制。利用cell counting kit-8(CCK-8)法检测0(空白对照)、2.5、5、10、20、40、80μmol·L^(-1)的EP作用于HepG2、SK-Hep-1细胞24、48、72 h后的细胞活力,并计算24、48、72 h的半数抑制浓度(IC_(50))。正式实验以0(空白对照)、10、20、40μmol·L^(-1)的EP与HepG2细胞共培养48 h后,使用活性氧(reactive oxygen species, ROS)荧光探针法检测EP对细胞内ROS的影响,使用线粒体膜电位荧光探针染色检测EP对细胞内线粒体膜电位的影响,使用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡数,使用AO/EB染色法检测不同浓度的EP对细胞凋亡形态的影响。使用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测不同浓度的EP对线粒体凋亡途径相关蛋白B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、胱天蛋白酶9(caspase-9)、活化的胱天蛋白酶9(cleaved caspase-9)蛋白表达的影响。结果表明,不同浓度的EP均可抑制肝癌细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性。与空白对照组相比,EP药物处理组ROS水平显著升高(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05),细胞总凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下调,Cyt-C、Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3表达均显著上调(P<0.05)。综上所述,EP可能通过调控线粒体介导的凋亡途径抑制肝癌细胞增殖,并诱导其凋亡。

关键词：过氧麦角甾醇肝癌线粒体膜电位线粒体凋亡活性氧

碱性蛋白酶水解时间对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响

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中国粮油学报 2024年第1期39卷 125-130页

作者：董原刘晓兰郑喜群孟杰姜彩霞李冠龙齐齐哈尔大学食品与生物工程学院齐齐哈尔161006 黑龙江省玉米深加工理论与技术重点实验室齐齐哈尔161006 黑龙江八一农垦大学国家杂粮工程技术中心大庆163319 齐齐哈尔市检验检测中心齐齐哈尔161005

为探究碱性蛋白酶(alcalase)水解对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响,对不同水解时间获得的玉米谷蛋白水解物的表面疏水性、二硫键含量、热性能、分子质量分布、抗氧化活性等进行了评价。结果表明:碱性蛋白酶水解对玉米谷蛋白的性... 详细信息

为探究碱性蛋白酶(alcalase)水解对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响,对不同水解时间获得的玉米谷蛋白水解物的表面疏水性、二硫键含量、热性能、分子质量分布、抗氧化活性等进行了评价。结果表明:碱性蛋白酶水解对玉米谷蛋白的性质有显著影响,分子质量和二硫键含量显著降低(P<0.05),与玉米谷蛋白相比其水解物具有较高的溶解性、起泡性、乳化性和热稳定性。此外,玉米谷蛋白水解产物具有良好的抗氧化性能,当水解时间为150 min时玉米谷蛋白水解物的DPPH自由基清除为(54.46±1.43)%,羟自由基(·OH)清除率为(74.06±1.49)%,Fe^(2+)螯合力为(86.69±1.35)%。

关键词：玉米谷蛋白水解理化性质抗氧化活性

基于网络药理学及体外实验探讨过氧麦角甾醇对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制

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中国中药杂志 2024年第13期49卷 3627-3635页

作者：罗然邓思琦赵音旭王璐任文康邹宇林宇卜明齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006

基于网络药理学方法探究过氧麦角甾醇(EP)抗乳腺癌的靶点及作用机制,并通过体外实验验证。采用网络药理学对EP作用靶点进行筛选,构建靶点网络及蛋白-蛋白互作(PPI)网络,对EP抗乳腺癌潜在的作用靶点及相关通路进行预测。采用MTT法检测EP... 详细信息

基于网络药理学方法探究过氧麦角甾醇(EP)抗乳腺癌的靶点及作用机制,并通过体外实验验证。采用网络药理学对EP作用靶点进行筛选,构建靶点网络及蛋白-蛋白互作(PPI)网络,对EP抗乳腺癌潜在的作用靶点及相关通路进行预测。采用MTT法检测EP对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制活性,克隆形成实验检测EP对MCF-7细胞增殖影响;采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测细胞的凋亡情况、线粒体膜电位及活性氧水平的变化情况;通过Western blot法检测EP对B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶蛋白(caspase)-7、活化的caspase-7(cleaved caspase-7)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸激酶B(AKT)蛋白表达水平的影响情况。结果显示,经网络药理学预测,得出EP与乳腺癌有173个共同靶点;KEGG富集分析结果显示EP治疗乳腺癌结果主要在癌症通路、PI3K-AKT信号通路、细胞衰老信号通路、病毒致癌作用等信号通路;MTT结果显示,与对照组相比,EP组MCF-7细胞的活性明显降低,呈时间-浓度依赖趋势;EP能够抑制乳腺癌细胞MCF-7集落形成;采用10、20、40μmol·L^(-1)的EP作用MCF-7细胞24 h后,MCF-7细胞总凋亡率均显著升高,线粒体膜电位均显著降低,活性氧水平均显著升高;此外,MCF-7细胞经过EP处理后,细胞内Cyt C、Bax、cleaved caspase-7蛋白的表达水平上升,p-PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达水平下降。研究表明,EP可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,减少集落形成,其机制可能与PI3K-AKT通路介导线粒体凋亡途径有关。

关键词：过氧麦角甾醇乳腺癌 MCF-7细胞网络药理学细胞凋亡线粒体膜电位活性氧