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白藜芦醇调节SIRT1/AMPK通路抑制大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞内自噬的机制研究

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重庆医科大学学报 2022年第6期47卷 700-704页

作者：邓煜马智胡俊文一迪曲慧颖桂文武重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心重庆400016

目的:探讨植物提取物白藜芦醇对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型颗粒细胞内自噬的影响,并探讨其对SIRT1/AMPK通路的调控作用。方法:体外培养PCOS的SD大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度白藜芦醇(5、10、20、40μmol/L... 详细信息

目的:探讨植物提取物白藜芦醇对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型颗粒细胞内自噬的影响,并探讨其对SIRT1/AMPK通路的调控作用。方法:体外培养PCOS的SD大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度白藜芦醇(5、10、20、40μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),MTT法观察卵巢颗粒细胞增殖率的变化;电镜观察细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator T1,SIRT1)、单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK(pAMPK)、Beclin1和p62的表达变化,并检测SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示,白藜芦醇能明显促进颗粒细胞增殖(P<0.05),呈浓度-时间依赖性(P<0.05);电镜结果表明白藜芦醇能降低细胞内的自噬体数量(P<0.05)。Western blot结果显示白藜芦醇可以增强卵巢颗粒细胞内SIRT1和pAMPK的蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞内Beclin1的表达(P<0.05),增加p62的表达;联合SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,颗粒细胞内的SIRT1和pAMPK蛋白表达水平明显降低,Beclin1表达明显增加(P<0.05),p62却明显降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇能抑制PCOS卵巢颗粒细胞内自噬水平并促进其增殖,这与白藜芦醇激活SITR1/AMPK通路密切相关。

关键词：多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬沉默信息调节因子2相关酶1/单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶通路

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卵巢低反应的评估和治疗策略新进展

重庆医科大学学报 2022年第10期47卷 1149-1153页

作者：蒋慧敏罗晓芳王凤笛陈月璐王炼炼重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心重庆400016

近年来,我国不孕不育率持续攀升,现代辅助生殖技术的发展解决了很多不孕不育患者的生育问题,但是卵巢低反应(poor ovarian response,POR)仍然是生殖领域需要解决的难题之一。我国三胎政策的放开,学业、生活、工作等压力使越来越多的女... 详细信息

近年来,我国不孕不育率持续攀升,现代辅助生殖技术的发展解决了很多不孕不育患者的生育问题,但是卵巢低反应(poor ovarian response,POR)仍然是生殖领域需要解决的难题之一。我国三胎政策的放开,学业、生活、工作等压力使越来越多的女性生育年龄推迟,这将造成有生育需求的卵巢低反应患者数量增加。因此,准确预测卵巢低反应的发生、制定个体化的治疗方案在临床诊治中具有重要意义。本文就卵巢低反应发生的预估及其治疗策略新进展进行综述,为临床上卵巢低反应患者的诊治提供参考。

关键词：卵巢低反应博洛尼亚标准波塞冬分类卵巢功能评估治疗策略

不同剂量克罗米芬在微刺激方案助孕治疗中对卵巢功能减退患者子宫内膜及妊娠结局等因素的影响分析

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中华生殖与避孕杂志 2023年第4期43卷 357-363页

作者：袁纯王菁蒋春艳马翔刁飞扬胡艳秋刘嘉茵高彦南京医科大学第一附属医院生殖医学中心南京210029

目的探讨不同剂量的克罗米芬(clomiphene citrate,CC)对卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者微刺激方案助孕治疗中子宫内膜因素、获卵数、助孕结局以及其他因素的影响。方法回顾性队列研究分析2018年1月至2020年1月期间... 详细信息

目的探讨不同剂量的克罗米芬(clomiphene citrate,CC)对卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者微刺激方案助孕治疗中子宫内膜因素、获卵数、助孕结局以及其他因素的影响。方法回顾性队列研究分析2018年1月至2020年1月期间于南京医科大学第一附属医院生殖医学中心行微刺激方案体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection and embryo transfer,IVF/ICSI-ET)助孕周期的临床资料,根据不同CC剂量方案分为4组:A组从月经第3天起CC 50 mg/d至扳机日,共1457个周期;B组从月经第3天起CC 50 mg/d仅使用3 d,共1533个周期;C组从月经第3天起CC 25 mg/d至扳机日,共345个周期;D组从月经第3天起CC 25 mg/d仅使用3 d,共319个周期,两两比较并分析4组患者的临床数据。结果A组患者所用的促性腺激素(gonadotropin,Gn)使用总量、Gn使用时间、优势卵泡数、扳机日激素水平、获卵数、获卵率、受精数、可移植胚胎数以及全胚冷冻率均显著高于B组(均P0.05)。与D组比较,C组患者所用的Gn使用总量、Gn使用时间、优势卵泡数、扳机日雌二醇、获卵数、每周期受精数/可移植胚胎数均显著增加(均P0.05),C组鲜胚移植率[26.04%(75/288)]显著低于D组[38.80%(97/250),P0.05)。结论小剂量、短时间CC用于微刺激助孕方案并不改变最终妊娠结局,同时节约患者的经济和时间成本,可作为DOR患者优选的微刺激助孕方案。

关键词：克罗米芬生殖技术,辅助卵巢功能减退微刺激妊娠结局

特殊类型畸精子症行卵细胞胞质内单精子注射的治疗结局分析

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中华男科学杂志 2023年第1期29卷 43-48页

作者：孙军培房建正孙雪萍杨晓玉蚌埠医学院第一附属医院生殖医学中心安徽蚌埠233000 江苏省人民医院/南京医科大学第一附属医院生殖医学中心江苏南京210029

目的:特殊类型畸精子症是男性不育中罕见病和单基因遗传疾病,本文探讨其卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)的治疗结局。方法:回顾性分析2011年1月至2021年1月于江苏省人民医院生殖医学中心实施ICSI治疗的特殊类型畸精子症患者,根据精子形态... 详细信息

目的:特殊类型畸精子症是男性不育中罕见病和单基因遗传疾病,本文探讨其卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)的治疗结局。方法:回顾性分析2011年1月至2021年1月于江苏省人民医院生殖医学中心实施ICSI治疗的特殊类型畸精子症患者,根据精子形态分为三组(圆头精子症、无头精子症和精子鞭毛多发形态异常),三组患者基因检测均发现致病或可能致病的基因突变。比较三组患者间的临床和实验室数据(年龄、BMI、精子参数、成熟卵子数、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率、活产率和自然流产率)差异。结果:三组共34对患者夫妇,三组患者间年龄,BMI,MII卵子数差别无统计学意义(P>0.05),圆头精子症的精子浓度和精子活力显著高于其他两组(P第一个胚胎移植周期中获得22例临床妊娠,最终活产20例,自然流产2例。无头精子症和精子鞭毛多发形态异常两组的临床妊娠率和活产率显著高于圆头精子症组(P0.05)。结论:圆头精子症患者实施人工卵母细胞激活依然有部分患者完全不受精或受精率低下。精子鞭毛多发形态异常和无头精子症患者可以通过ICSI取得相对较好的妊娠结局。

关键词：畸精子症圆头精子症无头精子症精子鞭毛多发形态异常卵细胞胞质内单精子注射

白藜芦醇调节Akt/mTOR通路对大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的影响机制研究

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重庆医科大学学报 2021年第4期46卷 388-393页

作者：马智胡俊邓煜幸贵邦王炼炼重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心重庆400016

目的:探讨白藜芦醇对多囊卵巢综合征大鼠模型颗粒细胞自噬的影响,并探讨其机制。方法:40只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,即多囊卵巢综合征模型组(n=30)和模型对照组(n=10)。将经免疫细胞化学法鉴定证实的多囊卵巢综合征(polycystic ovaria... 详细信息

目的:探讨白藜芦醇对多囊卵巢综合征大鼠模型颗粒细胞自噬的影响,并探讨其机制。方法:40只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,即多囊卵巢综合征模型组(n=30)和模型对照组(n=10)。将经免疫细胞化学法鉴定证实的多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)颗粒细胞进行体外培养。用不同浓度的白藜芦醇处理,CCK-8观察细胞的增殖率变化情况;电镜观察颗粒细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内自噬相关蛋白轻链3Ⅰ(light chain 3Ⅰ,LC3Ⅰ)、自噬相关蛋白轻链3Ⅱ(light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)、Beclin1的表达,以及总(磷酸化)蛋白激酶B[total(phosphorated)protein kinase B,T(p)-Akt]、总(磷酸化)雷帕霉素靶蛋白[total(phosphorated)mammalian target of rapamyoin,T(p)-mTOR]的变化,并检测Akt抑制剂LY294002作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:免疫细胞化学结果显示,与模型对照组比较,模型组卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)表达明显增强。这提示模型构建成功且分离成功。CCK-8结果表明,白藜芦醇能够提高颗粒细胞的增殖率,有浓度-时间依赖性;并降低细胞内的自噬水平;而Western blot结果显示,白藜芦醇可以减低细胞内LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1的表达,提高p-Akt和p-mTOR的蛋白表达;LY249002作用后,细胞内的LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1表达明显增加,同时p-Akt和p-mTOR的表达则明显降低。结论:白藜芦醇能够明显降低多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞内自噬水平并影响细胞的增殖率,其机制可能与白藜芦醇上调Akt/mTOR通路密切相关。

关键词：多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬 Akt/mTOR通路

NLRP7基因变异导致的3个复发性葡萄胎家系的分析

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中华医学遗传学杂志 2022年第10期39卷 1070-1075页

作者：沈鉴东高彦吴畏刘金勇孙雪萍彭雅文谢佳孜汪道武崔毓桂刘嘉茵刁飞扬南京医科大学第一附属医院生殖医学中心生殖医学国家重点实验室南京210029

目的探讨复发性葡萄胎家系的分子遗传学病因,为再生育提供精准指导。方法采集5个独立家系中有复发性葡萄胎病史的女性患者及其家族成员的外周血样,提取基因组DNA,用全外显子组测序分析筛查NLRP7、KHDC3L等相关基因的变异情况,对候选变... 详细信息

目的探讨复发性葡萄胎家系的分子遗传学病因,为再生育提供精准指导。方法采集5个独立家系中有复发性葡萄胎病史的女性患者及其家族成员的外周血样,提取基因组DNA,用全外显子组测序分析筛查NLRP7、KHDC3L等相关基因的变异情况,对候选变异通过Sanger测序和实时荧光定量PCR进行验证及家系溯源。结果全外显子组测序在3个家系中检测到了NLRP7基因变异,其中先证者P1及其姐姐均携带NLRP7基因第1~4外显子的纯合缺失,先证者P2携带NLRP7 c.939delG(p.Q314Sfs*6)pat和c.1533delG(p.N512Tfs*4)mat复合杂合变异,先证者P4携带NLRP7 c.2389_2390delTC(p.A798Qfs*6)pat和c.2165A>G(p.D722G)mat复合杂合变异,上述变异根据美国医学遗传学与基因组学学会致病性标准均判断为致病或可能致病。其中NLRP7基因第1~4外显子缺失、c.939delG(p.Q314Sfs*6)、c.1533delG(p.N512Tfs*4)和c.2389_2390delTC(p.A798Qfs*6)变异既往均未见报道。结论明确了3个复发性葡萄胎家系中的NLRP7基因变异,有助于准确的遗传咨询。本研究的结果丰富了复发性葡萄胎致病基因NLRP7的变异谱。

关键词：复发性葡萄胎 NLRP7基因全外显子组测序遗传咨询基因变异

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无创PGT技术的临床应用及研究进展

中华生殖与避孕杂志 2022年第11期42卷 1152-1156页

作者：张清周平郝燕匡丹尹奕琪曹云霞安徽医科大学第一附属医院妇产科生殖医学中心合肥230032

胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)技术广泛应用于辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)。PGT可以检测胚胎的单基因遗传病、染色体结构和数目变异,同时能改善胚胎植入效果、临床妊娠结局和活... 详细信息

胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)技术广泛应用于辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)。PGT可以检测胚胎的单基因遗传病、染色体结构和数目变异,同时能改善胚胎植入效果、临床妊娠结局和活产率。但该技术涉及到的活检过程对胚胎具有一定的侵袭性,同时对设备和人员的要求颇高。而随着从囊胚液和胚胎培养液中发现了可以用于基因分析的游离DNA,无创PGT(noninvasive PGT,NiPGT)成为一种有潜力的检测方式,在辅助生殖领域有广阔的应用前景。现就目前NiPGT技术的应用及研究的有效性和局限性进行阐述,为临床应用提供依据。

关键词：无创胚胎植入前遗传学检测囊胚培养液胚胎培养液游离DNA

血浆皮质醇水平与IVF/ICSI患者生育压力及妊娠结局相关性分析

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中华生殖与避孕杂志 2022年第1期42卷 30-35页

作者：田瑜张觇宇重庆医科大学附属第二医院妇产科生殖医学中心重庆400000

目的探讨生育压力与血浆皮质醇水平的相关性、生育压力及血浆皮质醇水平与妊娠结局的相关性。方法本研究为病例对照研究,采用便利抽样法选取2019年3月至2019年10月期间于重庆医科大学附属第二医院妇产科生殖医学中心,拟行体外受精/卵胞... 详细信息

目的探讨生育压力与血浆皮质醇水平的相关性、生育压力及血浆皮质醇水平与妊娠结局的相关性。方法本研究为病例对照研究,采用便利抽样法选取2019年3月至2019年10月期间于重庆医科大学附属第二医院妇产科生殖医学中心,拟行体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection and embryo transfer,IVF/ICSI-ET)助孕的不孕女性行横断面调查,将患者分为妊娠组和非妊娠组,对研究对象行一般资料调查,采用生育压力量表(fertility problem inventory,FPI)进行生育压力评估,同时测定移植前、移植日清晨空腹血浆皮质醇水平,随访IVF/ICSI-ET的妊娠结局,对妊娠结局的影响因素采用logistic回归分析。结果调查期间共有169例研究对象行胚胎移植,妊娠组患者80例,非妊娠组患者89例,两组患者的人口学特征和临床特征的基线差异均无统计学意义(均P>0.05)。研究期间共发放问卷320份,回收有效问卷291份,Spearman相关性分析结果显示血浆皮质醇与生育压力呈正相关(r=0.234,P<0.001)。回归分析结果显示移植日血浆皮质醇是妊娠结局的独立影响因素(OR=1.002,95%CI=1.001~1.004,P=0.003)。结论血浆皮质醇水平可反映不孕患者生育压力水平;移植日血浆皮质醇含量是妊娠结局的独立影响因素,随着血浆皮质醇含量的增加,妊娠的可能性减小。

关键词：不孕症生育压力血浆皮质醇

白藜芦醇下调ILK/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖的机制研究

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重庆医科大学学报 2021年第2期46卷 212-216页

作者：马智胡俊邓煜幸贵邦王炼炼重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心重庆400016

目的:探讨白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞生长、增殖的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢腺癌A2780细胞,用不同浓度(50、100、200、400μmol/L)白藜芦醇作用A2780细胞不同时间(24、48和72 h)。采用MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖活... 详细信息

目的:探讨白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞生长、增殖的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢腺癌A2780细胞,用不同浓度(50、100、200、400μmol/L)白藜芦醇作用A2780细胞不同时间(24、48和72 h)。采用MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖活力的影响,采用流式细胞术检测白藜芦醇对细胞周期的改变情况,采用Western blot检测细胞内整合素蛋白激酶(integrin-linked kinase,ILK)、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平的表达。结果:200μmol/L的白藜芦醇作用24 h可有效抑制A2780细胞增殖,使其阻滞于G0/G1期,并且存在显著的剂量-时间依赖性(P<0.05);结果还显示白藜芦醇能够显著抑制卵巢癌A2780细胞内ILK、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平(P<0.05),且存在浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过抑制卵巢癌A2780细胞中ILK/β-catenin信号通路,并降低下游靶蛋白Cyclin D1的表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖。

关键词：卵巢癌白藜芦醇整合素蛋白激酶 β-连环蛋白