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Cathepsin B在感染才女虫虾夷扇贝中表达规律的研究

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大连海洋大学学报 2025年

作者：杭雲娜孙红妍唐安琪毛俊霞田莹王许波郝振林丁君常亚青大连海洋大学水产与生命学院农业农村部北方海水增养殖重点实验室

组织蛋白酶B（Cathepsin B，CatB）是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶，具有重要的免疫功能。为探究CatB在虾夷扇贝应答才女虫侵染中的分子功能，本研究进行了虾夷扇贝CatB基因（PyCatB）的基因组鉴定、序列特征和基因表达分析，解析了感染才... 详细信息

组织蛋白酶B（Cathepsin B，CatB）是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶，具有重要的免疫功能。为探究CatB在虾夷扇贝应答才女虫侵染中的分子功能，本研究进行了虾夷扇贝CatB基因（PyCatB）的基因组鉴定、序列特征和基因表达分析，解析了感染才女虫虾夷扇贝中PyCatB的酶活性变化特征和基因表达变化规律。结果表明：PyCatB基因全长9 267 bp，包含9个外显子，8个内含子；其cDNA长度为1 219 bp，5’UTR长度为103 bp，3’UTR长度为99 bp；开放阅读框（ORF）长度为1 017 bp，编码338个氨基酸。PyCatB预测含有N端信号肽、前肽Propeptide C1和肽酶peptidase C1A cathepsin B 3个保守功能域；此外还具有催化三联体结构（Cys116、His284、Asn304），Gln110氧阴离子孔，GCNGG基序及C194-C205固定残基片段形成的特征性闭塞环，这些结构对PyCatB的催化活性起着重要的作用。系统进化分析表明各物种CatB 的进化地位与生物进化地位一致。酶活性分析显示感染才女虫虾夷扇贝外套膜组织的CatB酶活性显著高于健康扇贝。基因表达分析表明，除闭壳肌外，PyCatB在健康虾夷扇贝成体各组织中均有不同水平的表达，表明PyCatB基因参与广泛的生理过程；PyCatB在患病虾夷扇贝的外套膜不同区域的表达量均要显著高于健康扇贝，但在健康和患病扇贝血淋巴细胞中的表达差异不显著，推测PyCatB主要通过外套膜组织参与虾夷扇贝的免疫应答过程进而抵御才女虫的侵染。本研究为虾夷扇贝应答才女虫侵染机制的解析提供了参考，为贝类才女虫病的防治奠定了重要的理论基础。

关键词：虾夷扇贝才女虫病组织蛋白酶B 酶活性表达规律

基于微卫星标记的钱塘江上游黄尾鲴增殖放流效果及其潜在遗传风险评估

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水产学报 2022年第12期46卷 2349-2356页

作者：郭爱环原居林练青平倪蒙刘梅顾志敏浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室

为评估钱塘江上游黄尾鲴的增殖放流效果和潜在遗传风险，本实验利用已开发的11对微卫星引物，基于亲子鉴定技术对钱塘江上游增殖放流黄尾鲴的资源贡献率进行估算，同时开展黄尾鲴养殖群体和野外群体的遗传多样性比较，评估其增殖放流的... 详细信息

为评估钱塘江上游黄尾鲴的增殖放流效果和潜在遗传风险，本实验利用已开发的11对微卫星引物，基于亲子鉴定技术对钱塘江上游增殖放流黄尾鲴的资源贡献率进行估算，同时开展黄尾鲴养殖群体和野外群体的遗传多样性比较，评估其增殖放流的遗传风险。结果显示，33尾繁殖亲本群体和105尾回捕群体的平均等位基因数(Na)为8.64，平均观测杂合度(Ho)为0.708，平均期望杂合度(He)为0.739，平均多态信息含量(PIC)为0.703,11对微卫星引物多样性较高。亲缘关系分析表明，11个座位累计非亲排除率(CEP)达到99.999 980%，在回捕的105尾黄尾鲴个体中，5尾回捕个体被确认为放流的子代，对野外群体的资源贡献率为4.76%。黄尾鲴养殖群体和野外群体均具有较高的遗传多样性，且群体内各个遗传参数相差较小，遗传多样性水平相近；分子方差分析(AMOVA)表明，遗传变异主要来自于群体内(95.92%)，遗传分化系数FST为0.053 59，群体间的基因流(Nm)为4.42，属于低等程度的分化，基因交流无障碍。综合分析表明，钱塘江增殖放流的黄尾鲴具有良好的资源恢复效果，且无放流带来的潜在遗传风险。

关键词：黄尾鲴增殖放流效果评估分子标记遗传多样性

罗氏沼虾育苗期浮游细菌群落演替模式、驱动因素及其生物标志物

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水生生物学报 2023年第8期47卷 1323-1334页

作者：邹松保原居林程海华倪蒙刘梅高强浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康育苗重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001

为了探究罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)育苗期浮游细菌群落的时间动态和组装机制,对3个苗种厂的全育苗周期进行持续追踪,利用16S rRNA扩增子测序评估了罗氏沼虾幼苗发育过程中浮游细菌群落的动态演替、环境驱动因素、微生物标志... 详细信息

为了探究罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)育苗期浮游细菌群落的时间动态和组装机制,对3个苗种厂的全育苗周期进行持续追踪,利用16S rRNA扩增子测序评估了罗氏沼虾幼苗发育过程中浮游细菌群落的动态演替、环境驱动因素、微生物标志物和共现网络。细菌群落的α-多样性在育苗期呈U型分布规律,群落相似性遵循时间衰减模式,群落周转率为0.011。随着虾苗的发育,微杆菌科(Microbacteriaceae)(放线菌门:Actinobacteria)和冷形菌科(Cryomorphaceae)(拟杆菌门:Bacteroidetes)的相对丰度显著增加(P育苗早期(1—2d)和中期(8—10d)的指示性类群,而腐螺旋菌科(Saprospiraceae)和分枝杆菌科(Mycobacteriaceae)作为标志物类群出现在中后期(16—21d)。育苗系统中菌群以正相关关系为主的共现模式随幼苗发育而减弱,而负相互作用增加。研究结果揭示了罗氏沼虾育苗期浮游细菌群落的演替动态和群落聚集模式,将为微生态调节和病害防控提供新见解。

关键词：育苗演替模式环境驱动网络分析微生物标志物罗氏沼虾

一例异育银鲫(Carassius auratus gibelio)暴发性出血病病原分析

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海洋与湖沼 2019年第4期50卷 913-920页

作者：袁雪梅潘晓艺郝贵杰刘莉吕孙建蔺凌云沈锦玉农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江省淡水水产研究所

2016年6月,江苏某异育银鲫(Carassius auratus gibelio)养殖场暴发一种传染性急性出血病,造成养殖银鲫大量死亡。为分析此次疾病病因及流行规律,本研究从发病养殖场采集患出血病的异育银鲫,从细菌、病毒及寄生虫三个方面对病原进行了分... 详细信息

2016年6月,江苏某异育银鲫(Carassius auratus gibelio)养殖场暴发一种传染性急性出血病,造成养殖银鲫大量死亡。为分析此次疾病病因及流行规律,本研究从发病养殖场采集患出血病的异育银鲫,从细菌、病毒及寄生虫三个方面对病原进行了分析。采用病原菌分离、组织病理学观察、超薄切片电镜观察、病毒核酸分析、回感实验等对病原进行鉴定。结果显示从发病鲫鱼体内分离到病毒一株,未发现寄生虫及细菌感染。经测序及序列分析,该病毒为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinidherpesvirus 2,CyHV-2)病毒,组织病理学观察结果显示患病鱼的鳃和肾脏有明显病变,电镜下可观察到病鱼脾脏组织有带囊膜的球形病毒,囊膜直径约为170-200nm,病毒衣壳直径约为110-120nm,核心直径约为60nm,用组织匀浆感染鲫鱼囊胚细胞系(CGB)可稳定地观察到典型的细胞病变,用患病鱼组织匀浆液人工感染异育银鲫的死亡率高达100%,荧光定量PCR检测到该病毒可感染多器官,其中以脾脏中病毒含量最高,其次是脑,肝脏中最少。本研究可为CyHV-2的诊断防控及疫苗研制提供资料。

关键词：异育银鲫暴发性出血病病毒分离鉴定人工感染

池塘内循环流水养殖模式对大口黑鲈生长性能、抗氧化酶、消化酶及消化道组织结构和菌群的影响

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水产学报 2021年第12期45卷 2011-2028页

作者：刘梅练青平倪蒙郭爱环原居林浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室

为探究养殖过程中池塘内循环流水养殖模式(inner-pond raceway aquaculture, IPRA)对大口黑鲈生长性能、抗氧化酶、消化酶、消化道组织结构及菌落结构的影响。实验将池塘内循环流水养殖的4条水槽设置为流水组2条和对照组2条,进行为期15... 详细信息

为探究养殖过程中池塘内循环流水养殖模式(inner-pond raceway aquaculture, IPRA)对大口黑鲈生长性能、抗氧化酶、消化酶、消化道组织结构及菌落结构的影响。实验将池塘内循环流水养殖的4条水槽设置为流水组2条和对照组2条,进行为期153 d的养殖实验,分别在养殖中期和末期测量大口黑鲈相关生长、生化指标及观察组织形态结构,并采用Illumina Miseq测序平台对消化道中的微生物进行分析。结果显示,(1)养殖中期,流水组的增重率、特定生长率和肥满度低于对照静水组;至养殖末期,流水组的增重率、特定生长率和肥满度持续下降,但成活率一直高于静水组。(2)养殖中期,流水组肝脏SOD和CAT显著高于静水组,流水组MDA显著低于静水组,流水组消化酶活性显著高于静水组;至养殖末期,抗氧化酶和消化酶均不同程度下降,但流水组SOD仍显著高于静水组,MDA显著低于静水组。(3)流水组大口黑鲈肠绒毛高度及密度均明显高于静水组,且养殖中期分泌消化酶较多,运动加强了肠道消化吸收功能。(4)养殖中期,流水养殖使大口黑鲈肠胃菌群的物种多样性和均匀度明显增高,至养殖末期,流水组的肠胃多样性和均匀度指数不断下降;养殖中期流水组和静水组胃分别为柔膜菌门和蓝细菌,静水组肠主要优势菌依次为变形菌门和厚壁菌门,流水组肠主要优势菌依次为厚壁菌门和变形菌门;至养殖后期时,流水组和静水组胃肠优势菌群均为柔膜菌门;而养殖水体的优势菌为变形菌门和放线菌门。研究表明,IPRA模式下的持续运动会降低其生长指标,但能够提高其成活率,增强其免疫和消化能力,改善肠胃菌群结构,尤其是处于生长期效果更明显,而至养殖末期运动状态可能会打破肠道菌群平衡,引发疾病,应加强养殖管理。

关键词：大口黑鲈池塘内循环流水养殖模式生长性能抗氧化酶消化酶组织形态菌群结构

不同流速对流水槽大口黑鲈生长性能、抗氧化能力、能量代谢及组织结构的影响

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水生生物学报 2023年第1期47卷 25-36页

作者：刘梅原居林练青平倪蒙顾志敏浙江省淡水水产研究所浙江省淡水水产遗传育种重点实验室农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室湖州313001

研究旨在探明池塘内循环流水养殖(Inner-Pond Raceway Aquaculture,IPRA)系统中不同水流速度对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长性能、抗氧化能力、能量代谢及组织结构的影响。选取已驯食好、体质健康、大小均一的大口黑鲈[放养规格... 详细信息

研究旨在探明池塘内循环流水养殖(Inner-Pond Raceway Aquaculture,IPRA)系统中不同水流速度对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长性能、抗氧化能力、能量代谢及组织结构的影响。选取已驯食好、体质健康、大小均一的大口黑鲈[放养规格为(8.13±0.82)g]192尾,随机分配到4个模拟水槽中,每组3个重复,每个重复16尾。养殖试验设置空白静水组和3个水流速度组,分别为低流速0.2 m/s、中流速0.4 m/s和高流速0.6 m/s,养殖周期为154d。结果显示:(1)中流速组大口黑鲈的增重率和特定生长率显著高于其他3个处理组(P0.05);大口黑鲈内脏脂肪指数随着流速的增加而显著降低(P<0.05);(2)中流速组肌肉粗蛋白显著高于其他3个处理组(P<0.05),静水组和低流速组肌肉粗脂肪含量显著高于中、高流速组(P<0.05);中、高流速组肝脏粗蛋白显著高于静水组和低流速组(P<0.05);(3)中、高流速组血清中甘油三酯和总胆固醇显著低于静水组和低流速组(P<0.05);中流速组总蛋白和谷草转氨酶活性显著高于静水组和低流速组(P<0.05);(4)血清中SOD和CAT活性随着水流速度的增加而升高,中流速肝脏组SOD活性最高,高流速组血清中CAT显著高于其他3个处理组(P<0.05);中流速组血清和肝脏组织MDA含量显著低于其他3个处理组(P<0.05);中流速组血清和肝脏组织T-AOC显著高于其他3个处理组(P<0.05);(5)肠道脂肪酶活性随着流速增加而显著升高(P<0.05);中流速组胃淀粉酶和蛋白酶活性则最高;中流速组肝脏脂肪酶活性最高,显著高于静水组和低流速组(P<0.05);中、高流速组蛋白酶活性显著高于低流速组(P<0.05)。肌肉和肝脏中谷氨酸脱氢酶均随着流速的增加而显著升高(P<0.05),激素敏感脂肪酶和丙酮酸激酶则是先升后降,至中流速组最高;(6)肌肉和肝脏组织切片观察发现,低流速组肌纤维直径显著高于其他3个处理组(P<0.05),肌纤维密度随着水流速度增加而显著增加(P<0.05);中流速组会改善肝细胞组织结构,而高流速组会造成肝细胞损伤,引起细胞核空泡化严重和细胞核偏移聚集等。综上,试验中流速组即0.4 m/s能够促进大口黑鲈生长,提高机体抗氧化能力,改善机能代谢,增加粗蛋白含量,抑制脂肪沉积,可以作为大口黑鲈IPRA养殖系统中最适养殖水流速度。

关键词：不同流速生长性能抗氧化能力能量代谢组织形态大口黑鲈

大口黑鲈(Micropterus salmoides)不同养殖模式氮磷收支及养殖效果研究

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海洋与湖沼 2021年第3期52卷 718-728页

作者：刘梅原居林倪蒙练青平郭爱环农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江省淡水水产研究所湖州313001

为了揭示池塘内循环流水养殖模式(Inner-Pond Raceway Aquaculture,IPRA)氮磷收支变化及养殖效果情况,阐明其生态特征及营养物质的来源与归宿,合理评价IPRA的经济与生态效益,通过定期采样计算氮磷的输入和输出项目,同时设置传统常规养... 详细信息

为了揭示池塘内循环流水养殖模式(Inner-Pond Raceway Aquaculture,IPRA)氮磷收支变化及养殖效果情况,阐明其生态特征及营养物质的来源与归宿,合理评价IPRA的经济与生态效益,通过定期采样计算氮磷的输入和输出项目,同时设置传统常规养殖池塘(usual pond aquaculture,UPA)为对照组。结果表明:(1)两种养殖模式中,饲料是池塘氮、磷输入的主要来源,分别占IPRA和UPA池塘氮输入的95.02%±2.31%和94.57%±1.82%,占两种模式磷输入的93.19%±2.75%和91.81%±4.44%;(2)底泥沉积是氮、磷输出的主要方式,占IPRA和UPA氮输出的45.16%±1.31%和53.98%±1.48%,占磷输出的40.28%±3.19%和59.59%±4.45%,差异显著(P0.05),磷输出比例25.50%±1.77%显著高于UPA的20.78%±1.33%(P0.05),而对磷的利用率显著高于UPA(P所述,IPRA是一种清洁高效的新型养殖模式,可以进行推广应用。本研究旨在为今后更好地开展IPRA水质管理和科学养殖提供数据支撑,同时为IPRA模式在节水生态、经济效益等评价方面提供理论依据。

关键词：池塘内循环流水养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides) 氮磷收支养殖效果

基于RNA-seq技术的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)不同组织转录组比较分析

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海洋与湖沼 2021年第1期52卷 231-241页

作者：李喜莲顾志敏慎佩晶徐洋张宇飞高强程海华陈雪峰农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江省淡水水产研究所湖州313001

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)是我国重要的淡水虾养殖品种,为探讨罗氏沼虾不同组织基因表达差异,本研究使用Illumina Hiseq平台分析了罗氏沼虾的7个组织(眼柄、肝脏、卵巢、鳃、心脏、肌肉、精巢)转录组,质控后获得高质量的clea... 详细信息

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)是我国重要的淡水虾养殖品种,为探讨罗氏沼虾不同组织基因表达差异,本研究使用Illumina Hiseq平台分析了罗氏沼虾的7个组织(眼柄、肝脏、卵巢、鳃、心脏、肌肉、精巢)转录组,质控后获得高质量的clean reads 36325476、56796932、36328098、51370140、45010606、43240160、42404294条,共计46.2 Gb的clean reads数据。测序结果经denovo组装共获得95220个Unigenes,每个Unigenes的平均长度为1064.9bp。经过生物信息学方法与五个数据库(NR,GO,COG,KEGG,SWSS-PRO)比对,共注释到20368个Unigenes。其中GO功能注释将Unigenes分为生物过程、细胞组分和分子功能3个大类50个分支;在与COG数据库比对中,共有15798条比对到了同源序列,且一共被分为25类;KEGG代谢通路包括6大类33个小类,可将Unigenes映射到330条代谢通路中。分子标记筛选后获得37751个潜在SSR位点,共发现3228575个SNP位点。本研究通过对罗氏沼虾7个不同组织进行转录组测序,数据组装及功能注释,为进一步深入挖掘和开发利用罗氏沼虾功能基因提供参考。

关键词：罗氏沼虾转录组 RNA-seq技术不同组织功能基因比较分析

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澳洲淡水龙虾受精卵到仔虾营养物质变化分析

上海海洋大学学报 2023年第2期32卷 348-356页

作者：孙丽慧李倩张海琪姜建湖陈建明高令梅郭建林浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖实验室浙江湖州313001 浙江省淡水水产研究所浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江湖州313001

为探究澳洲淡水龙虾受精卵发育到仔虾过程中营养物质的变化情况,分别对澳洲淡水龙虾前无节幼体期、复眼色素形成期、孵化准备期受精卵及初孵仔虾的营养成分组成进行了系统性分析,研究表明:水分含量随着受精卵逐渐发育成仔虾而显著升高,... 详细信息

为探究澳洲淡水龙虾受精卵发育到仔虾过程中营养物质的变化情况,分别对澳洲淡水龙虾前无节幼体期、复眼色素形成期、孵化准备期受精卵及初孵仔虾的营养成分组成进行了系统性分析,研究表明:水分含量随着受精卵逐渐发育成仔虾而显著升高,粗蛋白和粗脂肪含量则随发育过程而显著降低,灰分含量以初孵仔虾最高;总氨基酸(TAA)、必需氨基酸(EAA)和呈味氨基酸(DAA)均随发育过程而显著降低;在AAS模式下,受精卵和初孵仔虾第一限制性氨基酸均为Met+Cys,受精卵第二限制性氨基酸为Leu,初孵仔虾第二限制性氨基酸为Ile。在CS模式下,受精卵和初孵仔虾第一限制性氨基酸也是Met+Cys,前无节幼体期受精卵第二限制性氨基酸为Val,复眼色素形成期之后的受精卵和初孵仔虾第二限制性氨基酸均为Ile。受精卵和初孵仔虾的EAAI随着受精卵发育到初孵仔虾而显著降低。澳洲淡水龙虾受精卵和初孵仔虾共测出主要脂肪酸10种,初孵仔虾的PUFA及DHA含量显著低于受精卵,EPA+DHA含量却显著高于受精卵。综上,澳洲淡水龙虾初孵仔虾灰分及EPA+DHA含量显著高于受精卵,故在澳洲淡水龙虾仔虾开口饵料配制中可考虑适当提高磷酸二氢钙及EPA+DHA的添加量。

关键词：澳洲淡水龙虾受精卵仔虾营养成分