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鳜弹状病毒N蛋白与鳜c-Myc互作调控谷氨酰胺代谢机制

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水产学报 2024年第5期48卷 56-64页

作者：张秋爽叶彩媚牛银杰林强梁红茹罗霞李宁求付小哲中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为了研究鳜弹状病毒(SCRV)如何调控鳜c-Myc (Sc-c-Myc)进而调控谷氨酰胺代谢的分子机制，本研究通过免疫共沉淀联合蛋白质谱寻找可能与Sc-c-Myc互作的病毒蛋白，初步分析确定为核衣壳蛋白(N蛋白)；Co-IP结果显示，SCRV的N蛋白与Sc-c-My... 详细信息

为了研究鳜弹状病毒(SCRV)如何调控鳜c-Myc (Sc-c-Myc)进而调控谷氨酰胺代谢的分子机制，本研究通过免疫共沉淀联合蛋白质谱寻找可能与Sc-c-Myc互作的病毒蛋白，初步分析确定为核衣壳蛋白(N蛋白)；Co-IP结果显示，SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc存在相互作用。通过PCR扩增获得了带有Flag标签序列的SCRV-N基因的ORF片段，并构建了SCRV-N蛋白过表达载体pcDNA-N-Flag；将pcDNA-N-Flag质粒转染鳜脑组织细胞系(CPB细胞系)，荧光共定位结果显示，Sc-c-Myc与SCRV-N在细胞质内存在共定位现象；通过逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)和免疫印记(Western blot)检测转染pcDNA-N-Flag的CPB细胞系中Sc-c-Myc及谷氨酰胺代谢通路关键酶(GLS1、GDH和IDH2)的表达变化，发现Sc-c-Myc、GLS1的转录水平和蛋白水平均显著上调。综上表明，SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc互作促进Sc-c-Myc的表达，进而调控宿主细胞谷氨酰胺代谢途径，为SCRV防控提供了新的靶点。

关键词：鳜鳜弹状病毒(SCRV) 鳜c-Myc 蛋白互作谷氨酰胺代谢

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花鲈前脂肪细系的建立及油酸诱导分化

水生生物学报 2024年

作者：柯轶雄毛孝江任惠娟张春晓王玲宋凯李学山鲁康乐集美大学水产学院海水养殖生物育种全国重点实验室

花鲈(Lateolabrax maculatus)前脂肪细胞系为探索鱼类脂肪细胞分化和脂肪沉积的调控作用以及相关分子机制提供了一种新的体外模型。本研究将花鲈腹腔脂肪组织用胶原酶消化后原代培养,再以胰酶消化后传代,总共经过150次传代培养后,得到... 详细信息

花鲈(Lateolabrax maculatus)前脂肪细胞系为探索鱼类脂肪细胞分化和脂肪沉积的调控作用以及相关分子机制提供了一种新的体外模型。本研究将花鲈腹腔脂肪组织用胶原酶消化后原代培养,再以胰酶消化后传代,总共经过150次传代培养后,得到花鲈前脂肪细胞系。进而,染色体核型分析表明该细胞系长期培养仍能保持正常表型,进一步使用线粒体cox1和cytb基因鉴定该细胞系来源于花鲈。用pEGFP-C1质粒转染细胞系,观察到明显的绿色荧光,表明可用于研究外源基因的表达。用不同浓度的油酸培养细胞系, 3d后细胞有明显脂滴聚集, 7d后脂滴达到最大;油红O染色表明, 400μmol/L油酸诱导7d后细胞即可正常分化成熟。综上所述,实验建立了花鲈前脂肪细胞系,该细胞系形态典型、可正常分化,为后续研究鱼类脂肪细胞分化及脂肪沉积提供了良好的实验材料。

关键词：前脂肪细胞细胞系细胞培养诱导分化花鲈

凡纳滨对虾不同品系生长和急性肝胰腺坏死病抗性遗传参数估计

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渔业科学进展 2024年

作者：黄桂仙李旭鹏田吉腾栾生孔杰曹宝祥刘宁罗坤谭建曹家旺代平陈宝龙强光峰刘绵宇刘杨王宏杰刘学会隋娟孟宪红上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室邦普种业科技有限公司海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所会达水产养殖有限公司(唐山)

为开展凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长和急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND)抗性复合选育，本研究以自主选育的凡纳滨对虾高抗和快大品系为研究对象进行生长和AHPND抗性测试。实验家系共计70个... 详细信息

为开展凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长和急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND)抗性复合选育，本研究以自主选育的凡纳滨对虾高抗和快大品系为研究对象进行生长和AHPND抗性测试。实验家系共计70个(高抗家系40个，快大家系30个)，实验个体共计1 760尾(高抗个体800尾，快大个体960尾)。2个品系分2批次进行VpAHPND定量口饲感染。批次内实验个体达半数死亡后停止投喂毒饵。利用个体动物模型和父母本阈值模型评估2个品系3 个性状(体重、感染VpAHPND后个体存活时间、家系半致死存活率)的遗传力；利用两性状动物模型评估3个性状两两之间的遗传相关。结果显示，高抗系体重遗传力估计值为0.599±0.120，为高遗传力水平；个体存活时间遗传力估计值为0.240±0.072，为中等遗传力水平；家系半致死存活率遗传力估计值为0.173±0.051，为低等遗传力水平。快大系体重、个体存活时间和家系半致死存活率的遗传力估计值分别为0.266±0.082、0.374±0.096、0.257±0.048，均为中等遗传力水平。经Z-score检验，2个品系各性状遗传力估计值与0差异均达到极显著水平(P系内的体重与AHPND抗性性状(个体存活时间、家系半致死存活率)遗传相关均表现为低度正相关(0.061～0.235)，且与0差异不显著(P>0.05)；2个品系内的个体存活时间与家系半致死存活率遗传相关分别为0.997±0.129、0.967±0.044，为高度正相关。结果表明，在实际选育过程中，可将生长和AHPND抗性作为选育指标纳入综合选择指数进行选种制种；为简化抗性测试过程，可将家系半致死存活率作为选育群体的AHPND抗性指标。本研究为开展凡纳滨对虾生长和AHPND抗性优良品种的选育提供了参考。

关键词：凡纳滨对虾生长 AHPND抗性遗传力遗传相关

草鱼miR-1260对鱼淋巴囊肿病毒中国株复制的调控作用

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广东海洋大学学报 2024年第3期44卷 25-33页

作者：马嘉霖战盈瑾周杰黄鉴涛闫秀英简纪常广东海洋大学水产学院/广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088

【目的】鉴定草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-1260(cid-miR-1260),分析cid-miR-1260在鱼淋巴囊肿病毒中国株(Lymphocystis disease virus China,LCDV-cn)感染草鱼卵巢细胞系(Grass carp ovary cells,GCO)过程中的时序表达特性,揭示cid-miR-1260对其靶基因znf574和LCDV-cn复制的调控作用。【方法】制备LCDV-cn感染的GCO细胞,通过茎环RT-PCR和测序鉴定cid-miR-1260;采用定量PCR检测cid-miR-1260在LCDV-cn感染GCO过程中的时序表达;应用生物信息学方法预测cid-miR-1260的靶基因,并用双荧光素酶报告基因系统验证靶基因;通过转染cid-miR-1260 mimic和cid-miR-1260 inhibitor使cid-miR-1260过表达和抑制表达,并用定量PCR检测cid-miR-1260、靶基因znf574、LCDV-cn mcp基因的表达;应用Reed-Muench法测定LCDV-cn在GCO细胞中的滴度。【结果】cid-miR-1260与其他已知miR-1260仅有一个碱基差异,且cid-miR-1260在LCDV-cn感染GCO过程中呈先上升后下降的表达变化,72 h时表达量最高(P<0.05);生物信息学分析表明,znf574为cid-miR-1260的靶基因;重组质粒pmirGLO-znf574-WT与cid-miR-1260 mimic共转染后,荧光素酶活性显著降低(P<0.05),证实znf574为cid-miR-1260的靶基因;cid-miR-1260过表达后,靶基因znf574的表达显著下降(P<0.05),LCDV-cn mcp的表达和LCDV-cn在GCO细胞中的滴度显著上升(P<0.05);抑制cid-miR-1260表达后,靶基因znf574的表达量显著上升(P<0.05),LCDV-cn mcp的表达量和LCDV-cn在GCO细胞中的滴度显著下降(P<0.05)。【结论】LCDV-cn感染GCO细胞后,cid-miR-1260的表达显著上调;在LCDV-cn感染中,cid-miR-1260对其靶基因znf574的表达起负调控作用,且cid-miR-1260表达与LCDV-cn的复制呈正相关,起促LCDV-cn感染作用,而锌指蛋白ZNF574具有抗LCDV-cn作用。本研究为淋巴囊肿病的防治提供新的依据和思路。

关键词：鱼淋巴囊肿病毒中国株草鱼卵巢细胞系 cid-miR-1260 锌指蛋白基因znf574 病毒复制

马氏珠母贝Perlucin基因序列特征及其SNP与耐低温性状的关系

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广东海洋大学学报 2024年第1期44卷 55-63页

作者：王成赖卓欣宋欣霖钟如卓郑哲王庆恒广东海洋大学水产学院广东省珍珠养殖与加工工程技术研究中心广东省珍珠科技创新中心广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东湛江524088

【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)新的凝集素分子基因,命名为Perlucin,研究在低温胁迫下马氏珠母贝Perlucin的表达以及与抗低温性状相关的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】根据马氏珠母贝基因组中Perlucin基因序列... 详细信息

【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)新的凝集素分子基因,命名为Perlucin,研究在低温胁迫下马氏珠母贝Perlucin的表达以及与抗低温性状相关的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】根据马氏珠母贝基因组中Perlucin基因序列设计引物,克隆Perlucin基因全长;用生物信息学方法分析Perlucin的结构和理化特征;设计17和22℃(对照)2个温度组,对马氏珠母贝进行低温胁迫实验,用实时荧光定量PCR检测低温胁迫下Perlucin表达量的变化;筛选和比较分析马氏珠母贝耐低温选育系(R)F3和北部湾野生群体(W)的Perlucin外显子区的SNP位点和单倍型。【结果】马氏珠母贝Perlucin全长631 bp,编码152个氨基酸;包含1个信号肽和1个C型凝集素结构域。同源分析表明,马氏珠母贝Perlucin与紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)Perlucin的亲缘性最近。Perlucin在鳃中表达量最高,其次为足和肝胰腺。低温胁迫时,鳃组织中Perlucin基因在17℃低温组的表达量呈先升高后降低的趋势,在12 h时达到最高并显著高于22℃对照组(P<0.05),表明Perlucin可能参与马氏珠母贝的低温响应过程。对Perlucin外显子区的SNP进行分析,共得到30个SNP,其中13个SNP位点的基因型频率在R和W群体间差异显著(P<0.05)。【结论】Perlucin是参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因,筛选出两个SNP位点g.40078856、g.40078945。

关键词：马氏珠母贝 Perlucin 基因克隆低温胁迫 SNP

斑石鲷irf3基因鉴定及其在虹彩病毒感染下的表达模式

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水产学报 2024年第4期48卷 202-213页

作者：李开敏王磊巩志宏王清滨李华杨桂文黄友华陈松林 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所,海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,农业农村部海洋渔业与可持续发展重点实验室 2.崂山实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 3.莱州明波水产有限公司 4.山东师范大学 5.华南农业大学海洋学院,海洋生物资源保护与利用粤港澳高校联合实验室,广东省水产免疫与健康养殖工程技术研究中心中国水产科学研究院黄海水产研究所海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室农业农村部海洋渔业与可持续发展重点实验室崂山实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室莱州明波水产有限公司山东师范大学华南农业大学海洋学院海洋生物资源保护与利用粤港澳高校联合实验室广东省水产免疫与健康养殖工程技术研究中心

干扰素调节因子(irf3)是干扰素调节因子(IRF)家族的一员，是I型干扰素依赖性免疫反应的主要转录调节因子，在针对DNA和RNA病毒的先天免疫反应中发挥重要作用。本研究中，斑石鲷irf3基因(Oplegnathus punctatus interferon regulatory fa... 详细信息

干扰素调节因子(irf3)是干扰素调节因子(IRF)家族的一员，是I型干扰素依赖性免疫反应的主要转录调节因子，在针对DNA和RNA病毒的先天免疫反应中发挥重要作用。本研究中，斑石鲷irf3基因(Oplegnathus punctatus interferon regulatory factors 3,Opirf3)来自实验室斑石鲷基因组数据库，经分析鉴定Opirf3的CDS序列全长1 362 bp，可编码453个氨基酸，预测其蛋白分子量为50.0 ku，理论等电点为4.97，有一个IRF结构域和一个IRF-3结构域。荧光定量分析结果显示，Opirf3在斑石鲷肝脏、鳃、心脏、皮肤、脾脏、肠、脑、肾脏、胃和头肾组织均有表达；虹彩病毒感染7 d时，免疫组织肝脏、脾脏和肾脏中Opirf3的表达水平显著上调。斑石鲷肾细胞系体外刺激实验显示，不同浓度poly I:C刺激后，Opirf3的表达量较对照组均显著升高，poly I:C浓度为100μg/mL时，肾脏细胞中Opirf3的相对表达水平升高，为对照组的86.8倍。siRNA干扰后，斑石鲷肾细胞系中Opirf3表达水平显著下调30%，下游基因IFN-α、CD40、CD80和IL-1β显著下调，IL-6显著上调。以上结果可能表明Opirf3基因参与了I型IFN在斑石鲷抗虹彩病毒过程中的先天免疫反应。本研究可为斑石鲷抗病分子育种提供理论依据。

关键词：斑石鲷 irf3 基因表达 siRNA

罗氏沼虾神经细胞的原代培养及其在病毒研究中的应用

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渔业科学进展 2024年

作者：黄笑王国浩董宣唐琼英段虎杨国梁黄倢江苏数丰水产种业有限公司天津科技大学海洋与环境学院湖州师范学院浙江省水生生物资源养护与开发技术研究重点实验室中国水产科学研究院水生动物繁育与营养重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所崂山实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室农业农村部海水养殖病害防治重点实验室青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室

细胞平台是研究病原–宿主互作的重要工具，目前缺少虾类细胞系，严重制约了虾类病毒学研究。传染性早熟病毒(IPV)是近年来发现的能够导致罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)性早熟和生长缓慢的一种新病毒，主要侵染罗氏沼虾神经组织... 详细信息

细胞平台是研究病原–宿主互作的重要工具，目前缺少虾类细胞系，严重制约了虾类病毒学研究。传染性早熟病毒(IPV)是近年来发现的能够导致罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)性早熟和生长缓慢的一种新病毒，主要侵染罗氏沼虾神经组织。为建立罗氏沼虾病毒–宿主互作的体外研究平台，本研究采用木瓜蛋白酶消化健康罗氏沼虾的脑、眼柄、胸神经节和腹神经节，获取罗氏沼虾神经细胞，并利用L-15培养基进行离体培养。选择培养效果最佳的脑神经细胞进行IPV体外感染。结果显示，培养的原代细胞在含有谷氨酰胺的L-15培养基中生长良好，其中，从脑组织和眼柄X器官–窦腺复合体中分离出的细胞在体外存活时间可达15 d，从胸腹神经节中分离出来的细胞在体外存活时间达9 d。在本研究所采用的感染方式和剂量条件下，脑细胞在感染96 h后检测到高载量的IPV。本研究建立了一种操作简便的罗氏沼虾神经细胞原代培养技术，为罗氏沼虾神经内分泌研究和病毒–宿主互作提供了基础数据和平台。

关键词：罗氏沼虾神经细胞原代培养传染性早熟病毒

利用“黄海芯1号”55K SNP芯片评估凡纳滨对虾选育群体的遗传多样性与基因组近交水平

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海洋与湖沼 2024年第2期55卷 479-488页

作者：刘丹阳孔杰王平陈荣坚傅强罗坤陈宝龙隋娟孟宪红代平谭建曹家旺李旭鹏康子仪刘绵宇强光峰迟长凤栾生浙江海洋大学国家海洋设施养殖工程技术研究中心浙江舟山316022 中国水产科学研究院黄海水产研究所、青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室、农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室山东青岛266071 海南中正水产科技有限公司海南东方572633 广东海兴农集团有限公司广东广州511400

凡纳滨对虾的主要选育目标分为两个方面:一是培育具有较强抗病、抗逆性的“高抗系”(GK),二是培育具有快速生长特性的“快大系”(KD)。然而,国内缺少针对这两个选育群体的遗传多样性特别是基因组近交水平的调查分析研究。基于液相芯片... 详细信息

凡纳滨对虾的主要选育目标分为两个方面:一是培育具有较强抗病、抗逆性的“高抗系”(GK),二是培育具有快速生长特性的“快大系”(KD)。然而,国内缺少针对这两个选育群体的遗传多样性特别是基因组近交水平的调查分析研究。基于液相芯片“黄海芯1号”(55 K SNP)的基因分型数据,首次分析了GK(1064尾个体)和KD(564尾个体)选育群体的遗传结构和遗传多样性,调查了连续性纯合片段(ROH)的基因组分布特征,并重点评估了两个群体的基因组近交水平。PCA及进化树分析表明GK及KD群体可明确分层,亲缘关系热图表明KD群体内个体间的亲缘关系比GK群体更近。GK群体包括的家系数量更多,导致其遗传多样性高于KD群体;两群体间的F_(st)为0.09,存在中等遗传分化。GK和KD群体每个ROH的平均长度分别为(1.70±0.34)Mb和(1.65±0.38)Mb,每个样本ROH的平均数量分别为1.98±1.30和2.07±1.37。GK和KD群体0.8~1.25 Mb长度的ROH占比分别为11.41%和19.17%,表明KD群体的选育历史比GK群体更长。两个群体>2.25 Mb长度的ROH片段占比分别为10.26和9.74%,表明两个群体短期内未发生近亲交配。七种基因组近交系数评估结果表明,KD群体的近交水平高于GK群体。不依赖基础群体等位基因频率的F_(ROH)和F_(HOM)方法可准确地评价育种群体的真实近交水平,而F_(VR1)、F_(YA1)和F_(LH1)等依赖基础群体等位基因频率的方法可以用来比较群体及个体间的相对近交水平。上述结果为准确地评估育种群体的近交水平和优化育种方案提供了重要参考依据。

关键词：凡纳滨对虾 “黄海芯1号” 遗传多样性连续性纯合片段基因组近交系数

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池塘养殖密度对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼生长的影响

水产科技情报 2024年第2期51卷 83-88页

作者：刘炜裴雪莹茆健强陈树桥张雷鸣代雅凡周国勤华中农业大学水产学院湖北武汉430070 南京市水产科学研究所江苏南京210019

为研究养殖密度对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼生长性能的影响,探索兴凯湖翘嘴鲌池塘养殖密度阈值,设置养殖密度分别为15万尾/hm^(2)(D1)、30万尾/hm^(2)(D2)、60万尾/hm^(2)(D3)、90万尾/hm^(2)(D4)、150万尾/hm^(2)(D5)共5个试验组,进行了为期18... 详细信息

为研究养殖密度对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼生长性能的影响,探索兴凯湖翘嘴鲌池塘养殖密度阈值,设置养殖密度分别为15万尾/hm^(2)(D1)、30万尾/hm^(2)(D2)、60万尾/hm^(2)(D3)、90万尾/hm^(2)(D4)、150万尾/hm^(2)(D5)共5个试验组,进行了为期180 d的兴凯湖翘嘴鲌幼鱼池塘培育试验。试验结果显示:幼鱼的增重率随着放养密度的增加呈现明显的下降趋势,其中放养密度最低的D1组幼鱼的增重率最高,达63.74%,但与D2组(60.57%)没有显著差异,D1、D2组幼鱼的增重率显著高于其他密度组(P养殖密度的增加呈现显著下降的趋势,D1组体长增长率最高,为3.16%,D5组最低,为0.56%;养殖试验结束时,5个试验组鱼的肥满度无明显差异。结果表明,池塘养殖条件下兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的适宜培育密度为30万~60万尾/hm^(2)。

关键词：兴凯湖翘嘴鲌池塘养殖养殖密度生长养殖效益