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血吸虫新抗原基因SjMF4的克隆、表达及功能分析

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第12期35卷 1099-1104页

作者：张亮程国锋付志强金亚美冯新港苑纯秀蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、农业部动物寄生虫学重点实验室中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232 上海200232 林矫矫

根据东方田鼠天然抗日本血吸虫病的现象 ,首次利用东方田鼠健康血清结合羊抗小鼠IgG3抗体免疫筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫cDNA表达型文库 ,获得两个阳性克隆 ,采用RACE技术对其中一cDNA片段进行扩增 ,获一含ORF的基因片段。序列... 详细信息

根据东方田鼠天然抗日本血吸虫病的现象 ,首次利用东方田鼠健康血清结合羊抗小鼠IgG3抗体免疫筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫cDNA表达型文库 ,获得两个阳性克隆 ,采用RACE技术对其中一cDNA片段进行扩增 ,获一含ORF的基因片段。序列分析表明该基因为一日本血吸虫新基因 ,命名为SjMF4 (SchistosomajaponicumMicrotusfortis 4 ,SjMF4 )。利用ExPASy的ScanProsite软件对此基因编码的蛋白质结构和功能域进行了分析。把该基因克隆到原核表达载体pET 2 8a(+) ,Western印迹显示表达产物具有良好的抗原性。又构建了真核表达质粒pcD NA3 SjMF4重组DNA疫苗 ,小鼠实验表明可诱导一定的保护作用。

关键词：东方田鼠日本血吸虫 SjMF4 保护作用

用日本血吸虫部分cDNA表达质粒文库免疫小鼠产生的保护性效果

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生物工程学报 2002年第2期18卷 231-234页

作者：冯新港林矫矫朱建国张亮苑纯秀蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所

The cDNA fragments of interest were amplified using \%Sj\%λ ZipLox library as the templates by PCR and then cloned into a eukaryotic expression vector p\|CMV\|GH; A small number of DNA fragments inserted in the recombinants was identified by restriction cleavage, EST sequencing and bioinformatical analysis; mice were injected intramuscularly with the expression library(L\|CMV\|SjR) or sublibraries(L\|CMV\|SjR 1,L\|CMV\|SjR 2 and L\|CMV\|SjR 3), immunized mice were challenged with \%Schistosoma japonicum\% cercariae on day 35, the levels of IgG antibodies in sera from the immunized mice were detected by ELISA. The results demonstrated that a partial cDNA expression library of \%S.j,\% with～10\+5 transformants, was constructed, most of the recombinants contained the insert DNA fragments of interest, and these fragments had the features of protein\|coding sequences for \%Schistosome.\% There were no significant differences for the levels of IgG antibodies in sera from all of the immunized groups. Mice immunized with L\|CMV\|SjR, L\|CMV\|SjR 1 and L\|CMV\|SjR 2 developed significant protective effect against \%Sj\% infection compared to control mice injected with the empty plasmid, the rate of worm reduction was about 30%.

关键词：日本血吸虫部分cDNA 表达文库免疫效果质粒小鼠模型

日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白编码基因的克隆和表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第3期34卷 311-317页

作者：金亚美林矫矫冯新港张亮吴祥甫周元聪蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室

根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白基因SmGcp序列和日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区的基因片段SjGcp1分别设计三对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出大小为 1949bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段含编码日本... 详细信息

根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白基因SmGcp序列和日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区的基因片段SjGcp1分别设计三对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出大小为 1949bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段含编码日本血吸虫抱雌沟蛋白基因的完整阅读框 ,与SmGcp碱基一致性为 85 % ,其理论推测氨基酸组成与曼氏血吸虫抱雌沟蛋白的一致性为 83.7%。将上述扩增的基因片段克隆到表达载体pET2 8c(+)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得表达 ,融合表达产物分子量约为 80kD。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,说明该编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因的表达产物具有抗原性

关键词：日本血吸虫抱雌沟蛋白基因克隆基因表达

日本血吸虫中国大陆株肌动蛋白编码基因的克隆和表达

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生物化学与生物物理学报 2000年第5期32卷 545-549页

作者：朱建国林矫矫冯新港吴祥甫周元聪蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室!上海200232 中国科学院上海生物化学研究所上海200031中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室!上海200232中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫

根据曼氏血吸虫肌动蛋白基因SmAct2设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出一大小为 1131bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框基因 ,与SmAct2碱基同源性为 92 %。将... 详细信息

根据曼氏血吸虫肌动蛋白基因SmAct2设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出一大小为 1131bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框基因 ,与SmAct2碱基同源性为 92 %。将其克隆到表达载体 pET2 8a(+)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得了较高量的表达 ,融合表达产物分子量约为 47kD。利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白兔所得抗血清对该表达产物进行Western印迹检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,说明所克隆的基因为编码日本血吸虫中国大陆株肌动蛋白基因。

关键词：日本血吸虫肌动蛋白基因克隆基因表达

应用Sj23基因重组抗原诊断牛、羊血吸虫病研究

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畜牧兽医学报 2003年第5期34卷 506-508页

作者：林娇娇李浩陆珂石耀军傅志强蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海动物生物技术研究中心上海200232

以血吸虫基因重组抗原LHD Sj23/pGEX(血吸虫23kD抗原大亲水区多肽/pGEX载体表达蛋白)作为抗原,应用ELISA法检测黄、水牛和绵羊血吸虫病。结果对黄、水牛的阳性符合率为94 0%(79/84)和85 5%(53/62),阴性符合率为82 7%(81/98)和95 1%(77/8... 详细信息

以血吸虫基因重组抗原LHD Sj23/pGEX(血吸虫23kD抗原大亲水区多肽/pGEX载体表达蛋白)作为抗原,应用ELISA法检测黄、水牛和绵羊血吸虫病。结果对黄、水牛的阳性符合率为94 0%(79/84)和85 5%(53/62),阴性符合率为82 7%(81/98)和95 1%(77/81),对绵羊的阳性符合率为86 04%(111/129),阴性符合率为100%(91/91)。以血吸虫成虫抗原(SWAP)及虫卵抗原(SEA)作为诊断抗原获得的结果差异不明显。对锥虫感染绵羊血清不出现交叉反应。由于基因重组抗原的制备比虫体抗原制备简便、价廉,同时由于基因重组抗原的应用有利于诊断技术的标准化,以基因重组抗原作为血吸虫病诊断抗原具有良好的研究应用前景。

关键词：应用 Sj23基因重组抗原诊断牛羊血吸虫病阳性符合率阴性符合率交叉反应

日本血吸虫(中国大陆株)虫卵全长cDNA文库的构建及分析

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 109-112页

作者：苑纯秀冯新港林矫矫杨柳石耀军李浩陆珂蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海市动物生物技术研究中心上海200232

成熟虫卵是血吸虫病的主要致病因素和传播的唯一因子,抗卵免疫对于预防血吸虫病和阻断传播流行均具有重要意义。应用SMART cDNA文库构建技术,构建日本血吸虫虫卵全长cDNA文库。文库容量为7.55×106,滴度为7.2×1010,重组比率为97%。应... 详细信息

成熟虫卵是血吸虫病的主要致病因素和传播的唯一因子,抗卵免疫对于预防血吸虫病和阻断传播流行均具有重要意义。应用SMART cDNA文库构建技术,构建日本血吸虫虫卵全长cDNA文库。文库容量为7.55×106,滴度为7.2×1010,重组比率为97%。应用三个已知全长基因(SjPP,SjTEGT and SjeIF 5)引物在文库中成功钓取到相应的全长基因。另外还由文库直接扩增到一个日本血吸虫新基因烯醇酶基因。高质量的虫卵全长cDNA文库的构建,为抗病疫苗尤其是抗卵抗原的筛选和研究提供了重要资源。

关键词：日本血吸虫虫卵 cDNA文库

日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果

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中国农业科学 2006年第8期39卷 1659-1666页

作者：姚利晓林矫矫傅志强朱传刚李浩陆珂刘金明石耀军沈阳蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心上海200232

目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研... 详细信息

目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY902477)长1311bp,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kD,等电点为5.51;其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threoninespecificproteinphosphatase,简称PP)的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPⅤ等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%。(3)成功构建核酸疫苗pCMV-Script/SjPP,免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%,粪便减卵率为31.91%。结论(1)获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。(2)含SjPP基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。

关键词：日本血吸虫东方田鼠丝/苏氨酸蛋白磷酸酶核酸疫苗免疫保护

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血吸虫发育调控的信号转导研究进展

中国人兽共患病杂志 2004年第1期20卷 62-65页

作者：程国锋林矫矫蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所

血吸虫为扁形动物门、裂体科的雌雄异体寄生虫.由血吸虫感染引起的血吸虫病是一种严重危害人畜健康的寄生虫病,为仅次于疟疾的第二重要热带病.该病在全球76个国家和地区流行,共约2亿患者,6亿人群受威胁.目前,在我国尚在108个县和57个县... 详细信息

血吸虫为扁形动物门、裂体科的雌雄异体寄生虫.由血吸虫感染引起的血吸虫病是一种严重危害人畜健康的寄生虫病,为仅次于疟疾的第二重要热带病.该病在全球76个国家和地区流行,共约2亿患者,6亿人群受威胁.目前,在我国尚在108个县和57个县级农场流行,共有患者82万[1].每年为防治此病支出巨大,药物治疗不能控制再感染.种种因素表明迫切需要利用现代分子生物学技术开发高效的血吸虫病免疫预防苗.

关键词：血吸虫发育调控信号转导研究进展

含日本血吸虫可溶性抗原及重组GST的免疫刺激复合物对小鼠的免疫试验

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中国农业大学学报 1998年第S2期3卷 60-64页

作者：刘金明王美叶萍傅志强蔡学忠石耀军陈永军林矫矫林邦发施幅恢中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232

免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免... 详细信息

免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。

关键词：日本血吸虫免疫刺激复合物成虫可溶性粗抗原谷胱甘肽-S-转移酶