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不同pH条件下除臭生物滤池微生物种群结构的分子生态分析

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微生物学报 2005年第3期45卷 446-450页

作者：陈桐生李建军岑英华孙国萍广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室中国科学院南海海洋研究所广州510301

采用分子生物学方法研究生物滤池中不同pH环境下的微生物种群的基因多样性,通过扩增细菌16SrRNA基因的V3可变区,结合应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分析除臭生物滤池的生物种群的结构变化,并回收主要的DNA片段,采用PCR测序及T载体克隆... 详细信息

采用分子生物学方法研究生物滤池中不同pH环境下的微生物种群的基因多样性,通过扩增细菌16SrRNA基因的V3可变区,结合应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分析除臭生物滤池的生物种群的结构变化,并回收主要的DNA片段,采用PCR测序及T载体克隆测序,明确优势菌群的系统发育地位。结果表明,除臭生物滤池在不同的pH条件下,微生物的多样性及其丰度存在较大差别,强酸性对微生物具有较高的选择作用,与中性条件相比,微生物种群多样性相对较低。同时在滤池的不同层次上也表现出明显的空间分布多样性差异,序列比对显示硫氧化细菌在除臭过程中占有优势地位。为更好的处理恶臭气体提供可靠的科学依据。

关键词：生物滤池恶臭处理微生态 PCR-变性梯度凝胶电泳

一种新融合抗菌肽Hex-Mag基因的克隆、表达及其抗菌活性的研究

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微生物学报 2007年第1期47卷 115-120页

作者：李桂平陈仪本中国科学院南海海洋研究所广州510301 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广州510070

通过在Magainin1-12(GIGKFLHSAKKF)的N端添加碱性氨基酸片段Hexapeptide(RRWQWR)以增强其对细胞膜的吸附能力来提高Magainin1-12的抗菌活性。利用Hexapeptide和Magainin1-12的基因序列,结合酵母偏爱密码子设计出新的融合基因Hex-Mag,通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,gene SOEing)利用PCR扩增出基因片段,再将融合基因进行酶切并纯化后导入穿梭质粒pPIC9中,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115毕赤酵母宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达出的融合肽Hex-Mag分子量约2.3kDa,其耐热性强,在100℃条件下,其活性可维持3h以上。琼脂糖孔穴扩散法检测显示Hex-Mag对多种革兰氏阴性菌和阳性菌具有抑制活性,与Magainin1-12相比,其活性有明显增强,N端正电荷增加的预期效应得到初步体现。

关键词： Hexapeptide(RRWQWR) Magainin1-12 重叠区扩增基因拼接法融合肽Hex-Mag

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废水处理中的可溶性微生物产物

微生物学通报 2006年第6期33卷 112-116页

作者：方卫许玫英岑英华李云路孙国萍广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 中国科学院研究生院北京100049

可溶性微生物产物(SMP)是污水生物处理中有机物质的主要成分,对出水水质有着重要影响。对污水生物处理中SMP的产生、分子质量分布、生物可降解性、毒性、离子螯合性、吸附性等进行了综述,分析了影响SMP产生的因子。分析表明,SRT、HRT、... 详细信息

可溶性微生物产物(SMP)是污水生物处理中有机物质的主要成分,对出水水质有着重要影响。对污水生物处理中SMP的产生、分子质量分布、生物可降解性、毒性、离子螯合性、吸附性等进行了综述,分析了影响SMP产生的因子。分析表明,SRT、HRT、进水浓度、基质性质、有毒物质的存在以及温度都会对SMP的产生及浓度产生影响,控制系统运行的这些参数,可使出水中SMP量降到最少,从而提高出水质量。

关键词：可溶性微生物产物废水处理污泥停留时间生物降解性

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真空冷冻干燥法保存菌种

微生物学报 1975年第1期 57-71页

作者： RESEARCH GROUP OF CULTURE COLLECTION(Institute of Microbiology,Academia Sinica,Peking) 中国科学院微生物研究所菌种保藏组

我们测验了在室温(波动为5—36℃)贮藏4年半-8年,用脱脂牛奶作保护剂,真空冷冻干燥保存的559种2010株细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌的存活力,以及其中部分菌株的主要生理特性。贮存在室温的真空冷冻干燥法保存的84种484株细菌,180种56... 详细信息

我们测验了在室温(波动为5—36℃)贮藏4年半-8年,用脱脂牛奶作保护剂,真空冷冻干燥保存的559种2010株细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌的存活力,以及其中部分菌株的主要生理特性。贮存在室温的真空冷冻干燥法保存的84种484株细菌,180种565株放线菌,59种459株酵母菌和236种502株丝状真菌的存活力分别是467(96.5%)、516(91.33%)、394(85.83%)和439(87.45%)。我们还观测了贮藏在5℃,1957年真空冷冻干燥法保存的细菌。在这种条件下保存16年的32种126株细菌,103株(81.74%)保持着活力,除个别菌株外,没有任何种的死亡。所测定的17株真空冷冻干燥保存的菌种的生理特性,与定期移植保存的同一菌株对比结果,除两株大肠杆菌,其中1株谷氨酸脱羧酶活力减退外,其他菌株都没有明显的变化。

关键词：链霉菌保存菌种菌种保藏株数真空冷冻干燥法斜面保藏曲霉微生物名称芽抱杆菌乳杆菌羽扇豆根瘤菌根瘤细菌属假丝酵母酵母菌

云南松(Pinus yunnanensis)林外生菌根真菌的时空分布

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生态学报 2007年第6期27卷 2325-2333页

作者：于富强肖月芹刘培贵中国科学院昆明植物研究所中国科学院研究生院北京100039

2000年至2005年，调查了滇中及其附近云南松林下外生菌根真菌的生态分布，共采集、鉴定标本834号，计有27科39属211种（含变种、变型）。结果表明，红菇属（Russula）、牛肝菌属（Boletus）、乳菇属（Lactarius）、乳牛肝菌属（Suillus... 详细信息

2000年至2005年，调查了滇中及其附近云南松林下外生菌根真菌的生态分布，共采集、鉴定标本834号，计有27科39属211种（含变种、变型）。结果表明，红菇属（Russula）、牛肝菌属（Boletus）、乳菇属（Lactarius）、乳牛肝菌属（Suillus）、口蘑属（Tricholoma）、鸡油菌属（Cantharellus）和革菌属（Thelephora）等为云南松林下的主要外生菌根菌类群。它们的发生与分布受到气候（如：气温和降水）、植被（如：林龄、林地郁闭度和草本植被）、地形特征（如：海拔、坡向和坡度）、土壤条件（如：pH值、地表腐殖质和枯枝落叶层等）和人为干扰（比如：商业化采集、林木采伐、火烧和地表物清理）诸多因素的影响。总结为如下：（1）5a的调查结果显示，云南松外生菌根菌的分布表现出季节性变化的规律;其中以每年1、2、3月份的物种多样性为最低，雨季期间急剧增加，至中夏和秋末达到顶峰，种类最为繁多。（2）在海拔1500-2100m，云南松外生菌根菌种类随着海拔的升高而逐渐增加，至顶峰后，又呈缓慢下降趋势。海拔因素不但对其物种多样性，而且对于类群的组成也具有重要的影响。特定的类群往往发生在特定海拔范围。（3）随着云南松林龄的增加，外生菌根菌呈现由少至多的演替过程。外生菌根菌多样性随云南松林生长而逐渐增加的演替方式，可能与宿主光合作用产物、根部分泌物和土壤条件的逐渐变化有关。（4）人类干扰是云南松外生菌根菌物种多样性和类群组成的主要负影响因子。大规模的商业化采集可破坏或枯竭地下菌丝体，打破各物种之间的竞争平衡，减少孢子释放影响资源再生能力，进而直接影响到子实体的产生。外生菌根菌物种多样性的减少趋势会随林木砍伐和火烧强度的增加而加剧。地表枯枝落叶层与杂草密度也会影响子实体的产生，其中枯枝落叶层的厚度与云南松外生菌根菌子实体的发生呈负相关性，而被紫茎泽兰覆盖的云南松林地内也很少会发现相应的子实体。

关键词：云南松季节性变化空间分布真菌演替

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水体中诺瓦克病毒RT-PCR检测研究

微生物学通报 2007年第4期34卷 650-653页

作者：寇晓霞吴清平范宏英张菊梅中国科学院武汉病毒研究所广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广州510070 中国科学院研究生院北京100049 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室

诺瓦克病毒是公认的食源性或水源性非细菌性胃肠炎的主要致病因子之一。建立诺瓦克病毒的RT-PCR检测方法,验证其特异性及灵敏度,并在实验室人工污染水样,进行模拟水样的检测,验证RT-PCR检测方法的实用性。所用引物为RNA多聚酶区的JV12/J... 详细信息

诺瓦克病毒是公认的食源性或水源性非细菌性胃肠炎的主要致病因子之一。建立诺瓦克病毒的RT-PCR检测方法,验证其特异性及灵敏度,并在实验室人工污染水样,进行模拟水样的检测,验证RT-PCR检测方法的实用性。所用引物为RNA多聚酶区的JV12/JV13,多次反复实验,均可产生327bp预期大小的特异条带,并通过杂交进一步证实了其特异性和正确性;在临床粪样中,可达到的最高检测限为50pg/mL。在共42份模拟样品的检测中,经过播毒、富集和浓缩,38份均可检出诺瓦克病毒。其中4份池塘水未检出。在模拟水样中的检测灵敏度为200pg/mL。实验中所建立的试验条件和体系可用于实际水样中诺瓦克病毒的筛选,对水质控制起到了很好的监控作用。

关键词：诺瓦克病毒水检测 RT-PCR 水源性食源性

珠江三角洲地区副溶血性弧菌遗传多样性和致病性相关研究

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现代食品科技 2015年第7期31卷 283-292页

作者：吴葵吴清平张菊梅郭伟鹏中国科学院南海海洋研究所广东广州510301 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070 中国科学院大学北京100049

副溶血性弧菌(Vibiro parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,本文研究了珠江三角洲地区副溶血性弧菌的遗传多样性。从54株副溶血性弧菌出发,研究了它们的API20E生化反应、抗生素耐药性、O抗原血清型,进行了ERIC-PCR分子分型,并检... 详细信息

副溶血性弧菌(Vibiro parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,本文研究了珠江三角洲地区副溶血性弧菌的遗传多样性。从54株副溶血性弧菌出发,研究了它们的API20E生化反应、抗生素耐药性、O抗原血清型,进行了ERIC-PCR分子分型,并检测了两种毒力基因tdh和trh的分布。54株副溶血性弧菌可被分为6个生化反应类群,主要类群为Biochem-A;菌株对萘啶酮酸、环丙沙星、氯霉素均不耐药,而对氨苄青霉素耐药率最高,耐药率0.88;O抗原血清型分别为O1、O2、O3、O4、O5、O6、O8、O10、O11,O2为主要血清型,O3为临床主要血清型;ERIC-PCR分子分型将54株菌分成47个型别,ERIC-PCR图谱相似性大于0.80的类群有12个,没有明显的优势类群;有12株副溶血性弧菌为tdh阳性,阳性率为0.22,其中10株为临床来源菌株;有2株副溶血性弧菌为trh阳性,阳性率为0.04,均为食品分离株。珠三角地区食品和临床来源的副溶血性弧菌具有丰富的遗传多样性。

关键词：副溶血性弧菌遗传多样性生化分型抗生素耐药性 O-血清型分子分型毒力基因

副溶血性弧菌vanM基因原核表达及酰基高丝氨酸内酯信号分子鉴定研究

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现代食品科技 2015年第6期31卷 29-35 128,128页

作者：吴葵吴清平张菊梅徐晓可中国科学院南海海洋研究所广东广州510301 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070 中国科学院大学北京100049

从副溶血性弧菌ATCC33847扩增van M基因,连接到p MD19-T载体进行克隆测序和序列比对;将测序正确的van M序列经Nde I和Eco RI酶切后连接到p ET22b;以IPTG诱导van M基因在BL21(DE3)中表达;利用acyl-HSL报告菌株KYC55检测ATCC33847和带有va... 详细信息

从副溶血性弧菌ATCC33847扩增van M基因,连接到p MD19-T载体进行克隆测序和序列比对;将测序正确的van M序列经Nde I和Eco RI酶切后连接到p ET22b;以IPTG诱导van M基因在BL21(DE3)中表达;利用acyl-HSL报告菌株KYC55检测ATCC33847和带有van M基因的大肠杆菌的acyl-HSL活性;萃取Van M合成的acyl-HSL信号分子,经HPLC-MS测试后与标准品进行对比分析。成功测序了ATCC33847 van M基因,与鳗弧菌van M基因序列相似性达到57%;并构建了p ET22b-van M表达质粒,以0.6 mmol/L IPTG诱导BL21(DE3)表达系统时Van M融合蛋白表达量最大;经过KYC55检测ATCC33847和带有p ET22b-van M的大肠杆菌能够产生acyl-HSL活性;HPLC-MS分析显示,ATCC33847和携带p ET22b-van M的BL21(DE3)萃取物中含有3-Hydroxybutanoyl-HSL(3-OH-C4-HSL)和3-Hydroxydecanoyl-HSL(3-OH-C10-HSL)信号分子。本研究克隆表达了副溶血性弧菌van M,首次证明了副溶血性弧菌利用Van M信号分子合成酶合成acyl-HSL信号分子3-OH-C4-HSL和3-OH-C10-HSL。

关键词：副溶血性弧菌 van M 原核表达酰基高丝氨酸内酯

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一起糠鳞杵柄鹅膏中毒事件调查分析

中国工业医学杂志 2024年第2期37卷 217-219页

作者：胡贝罗玉琼李云桥管辉岳秦华明邓旺秋广东省科学院微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070 暨南大学环境学院惠州市惠城区疾病预防控制中心惠州市第三人民医院急诊医学部

2023年5月惠州市发生一起误食野生蘑菇引起16人中毒事件,经及时治疗无人员死亡。本文通过流行病学调查、形态学与分子生物学鉴定方法对该起事件中毒原因进行调查分析,为同类毒蘑菇中毒的预防和救治提供参考。1 事件经过2023年5月21日某... 详细信息

2023年5月惠州市发生一起误食野生蘑菇引起16人中毒事件,经及时治疗无人员死亡。本文通过流行病学调查、形态学与分子生物学鉴定方法对该起事件中毒原因进行调查分析,为同类毒蘑菇中毒的预防和救治提供参考。1 事件经过2023年5月21日某拳馆厨师将学员采摘的两朵野生蘑菇作为食材切片后烹煮成菜肴,16名学员及工作人员进食后约10 min陆续出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状。2.5 h后相继前往当地医院就诊。

关键词：糠鳞杵柄鹅膏食物中毒分子鉴定毒蘑菇