一种新融合抗菌肽Hex-Mag基因的克隆、表达及其抗菌活性的研究

作     者：李桂平 陈仪本 LI Gui-ping;CHEN Yi-ben

作者机构：中国科学院南海海洋研究所广州510301 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广州510070 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2007年第47卷第1期

页      面：115-120页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：广东省科技攻关项目(2003C104022)~~ 

主　　题：Hexapeptide(RRWQWR) Magainin1-12 重叠区扩增基因拼接法 融合肽Hex-Mag 

摘      要：通过在Magainin1-12(GIGKFLHSAKKF)的N端添加碱性氨基酸片段Hexapeptide(RRWQWR)以增强其对细胞膜的吸附能力来提高Magainin1-12的抗菌活性。利用Hexapeptide和Magainin1-12的基因序列,结合酵母偏爱密码子设计出新的融合基因Hex-Mag,通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,gene SOEing)利用PCR扩增出基因片段,再将融合基因进行酶切并纯化后导入穿梭质粒pPIC9中,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115毕赤酵母宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达出的融合肽Hex-Mag分子量约2.3kDa,其耐热性强,在100℃条件下,其活性可维持3h以上。琼脂糖孔穴扩散法检测显示Hex-Mag对多种革兰氏阴性菌和阳性菌具有抑制活性,与Magainin1-12相比,其活性有明显增强,N端正电荷增加的预期效应得到初步体现。