检索结果-南通市图书馆

用改进的重叠区扩增基因拼接法构建中间缺失突变体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学遗传学杂志 2004年第1期21卷 52-55页

作者：李成华房海燕邓小云夏昆郑多夏家辉中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的　构建缺失第 32 5～ 373位氨基酸密码子的磷脂酸磷酸化激酶β(phosphatidylinositol 4 - kinase beta,PI4 K-β)基因 ,以探索一种简便的构建中间缺失突变体的方法。　方法　应用重叠区扩增基因拼接法的原理 ,在拼接延伸后 ,再进行... 详细信息

目的　构建缺失第 32 5～ 373位氨基酸密码子的磷脂酸磷酸化激酶β(phosphatidylinositol 4 - kinase beta,PI4 K-β)基因 ,以探索一种简便的构建中间缺失突变体的方法。　方法　应用重叠区扩增基因拼接法的原理 ,在拼接延伸后 ,再进行一次 PCR扩增 ,得到缺失第 32 5～ 373位氨基酸密码子的 PI4 K- β基因 ,克隆至 p CMV- Tag4 A真核表达载体。　结果　成功地构建出缺失第 32 5～ 373位氨基酸密码子的 PI4 K- β突变体。　结论　这种改进的重叠区扩增基因拼接法可以有效而可靠地构建中间缺失突变体 ,具有推广价值。

关键词：重叠区扩增基因拼接法中间缺失突变体克隆磷脂酸磷酸化激酶β 氨基酸密码子

重叠区扩增基因拼接法拼接hIL-2信号肽基因和CVB3的VP1基因

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

承德医学院学报 2003年第4期20卷 277-279页

作者：方艳辉金玉怀王永祥肖丽君承德医学院微生物学及免疫学教研室河北承德067000 河北医科大学

目的 :将 h IL- 2信号肽基因拼接到 CVB3VP1基因的 5′端 ,以获得分泌型 VP1 (s VP1 )基因。方法 :采用重叠区扩增基因拼接法。结果 :凝胶电泳见到预期大小 DNA条带 ,经测序表明基因序列与报导的 h IL- 2信号肽及 CVB3VP1的基因序列一... 详细信息

目的 :将 h IL- 2信号肽基因拼接到 CVB3VP1基因的 5′端 ,以获得分泌型 VP1 (s VP1 )基因。方法 :采用重叠区扩增基因拼接法。结果 :凝胶电泳见到预期大小 DNA条带 ,经测序表明基因序列与报导的 h IL- 2信号肽及 CVB3VP1的基因序列一致。结论 :成功获得了融合基因 s

关键词：重叠区扩增基因拼接法 hIL-2信号肽基因 CVB3基因 VP1基因基因序列凝胶电泳 DNA条带

重叠区扩增基因拼接法在构建膜锚定金黄色葡萄球菌肠毒素A融合基因上的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（医学版） 2003年第5期32卷 412-414页

作者：易平勇余海马文学孙文均姜槐浙江大学医学院浙江杭州310006

目的 :将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,形成融合基因。方法 :利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PLAP- 1C末端信号肽序列和 SEA基因序列。然后 ,将二段基因拼... 详细信息

目的 :将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,形成融合基因。方法 :利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PLAP- 1C末端信号肽序列和 SEA基因序列。然后 ,将二段基因拼接并与 p GEM- T克隆载体连接 ,酶切和测序鉴定。结果 :成功扩增出 h PLAP- 1C末端信号肽序列 131bp和 SEA基因序列 796 bp;经测序证实 ,二段基因序列成功拼接 (90 1bp)。结论 :重叠区扩增基因拼接法能将 SEA基因与 h PL AP- 1C末端信号肽序列拼接 ,形成融合基因。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A 碱性磷酸酶重叠区扩增基因拼接法

一种新融合抗菌肽Hex-Mag基因的克隆、表达及其抗菌活性的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2007年第1期47卷 115-120页

作者：李桂平陈仪本中国科学院南海海洋研究所广州510301 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广州510070

通过在Magainin1-12(GIGKFLHSAKKF)的N端添加碱性氨基酸片段Hexapeptide(RRWQWR)以增强其对细胞膜的吸附能力来提高Magainin1-12的抗菌活性。利用Hexapeptide和Magainin1-12的基因序列,结合酵母偏爱密码子设计出新的融合基因Hex-Mag,通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,gene SOEing)利用PCR扩增出基因片段,再将融合基因进行酶切并纯化后导入穿梭质粒pPIC9中,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115毕赤酵母宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达出的融合肽Hex-Mag分子量约2.3kDa,其耐热性强,在100℃条件下,其活性可维持3h以上。琼脂糖孔穴扩散法检测显示Hex-Mag对多种革兰氏阴性菌和阳性菌具有抑制活性,与Magainin1-12相比,其活性有明显增强,N端正电荷增加的预期效应得到初步体现。

关键词： Hexapeptide(RRWQWR) Magainin1-12 重叠区扩增基因拼接法融合肽Hex-Mag

乙型肝炎病毒基因生物信息学分析及特异片段的制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国医科大学学报 2008年第5期37卷 583-585页

作者：徐晓雪房凯钟连声潘忠诚李超胥威赵雨杰中国医科大学基础医学院生物芯片中心沈阳110001

目的制备HBV基因分型芯片模板。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对,选取6个碱基位点作为分型位点,应用重叠区扩增基因拼接法(SOEing法)对C型HBV片段进行点突变。结果在所选位点上成功引入点突变。结论SOEing法是一种简便引入点... 详细信息

目的制备HBV基因分型芯片模板。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对,选取6个碱基位点作为分型位点,应用重叠区扩增基因拼接法(SOEing法)对C型HBV片段进行点突变。结果在所选位点上成功引入点突变。结论SOEing法是一种简便引入点突变的方法,可以应用此法制备HBV基因分型检测基因所需的模板DNA。

关键词：重叠区扩增基因拼接法乙型肝炎病毒基因分型

猪泛素基因与PRRSV GP5基因融合表达质粒的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科技 2004年第10期34卷 14-18页

作者：任慧英郭鑫杨汉春陈艳红查振林中国农业大学农业部预防兽医学重点实验室北京100094

采用RT PCR技术从长白猪的肌肉组织中扩增出了泛素 (Ubiquitin)基因 ,并将其克隆到 pGEM Teasy载体 ,经测序表明 ,所克隆的基因与GenBank中已登录的序列同源性达 99%。利用设计的融合表达引物 ,分别将泛素基因与猪生殖与呼吸综合征病毒 ... 详细信息

采用RT PCR技术从长白猪的肌肉组织中扩增出了泛素 (Ubiquitin)基因 ,并将其克隆到 pGEM Teasy载体 ,经测序表明 ,所克隆的基因与GenBank中已登录的序列同源性达 99%。利用设计的融合表达引物 ,分别将泛素基因与猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV )GP5蛋白成熟肽基因进行扩增 ,用重叠区扩增基因拼接法将 2个基因片段进行拼接 ,并插入真核表达载体 pcDNA4 .0HISMAXA中 ,构建出了 pcDNA U GP5重组质粒。

关键词：猪泛素基因 PRRSV GP5基因重叠区扩增基因拼接法

C型乙型肝炎病毒基因SOEing法引入228位点突变

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国医科大学学报 2008年第6期37卷 736-738页

作者：徐晓雪房凯钟连生潘忠诚吴土焕赵雨杰中国医科大学基础医学院生物芯片中心沈阳110001

目的为获取乙型肝炎病毒(HBV)基因分型芯片病毒靶序列,对C型HBV第228位碱基进行点突变。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对分析,显示基因型A,C,D,G在228位上的碱基为G,而基因型B,E,F,H为A,所以检测该位点的碱基类型可以实现HBV... 详细信息

目的为获取乙型肝炎病毒(HBV)基因分型芯片病毒靶序列,对C型HBV第228位碱基进行点突变。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对分析,显示基因型A,C,D,G在228位上的碱基为G,而基因型B,E,F,H为A,所以检测该位点的碱基类型可以实现HBV基因型的初步分型。结果将C型乙肝病毒第228位上的单位碱基由G突变为A,经测序后证明突变成功。结论重叠区扩增基因拼接法(SOEing)是一种简便引入点突变的方法,可以应用此法制备HBV基因分型芯片检测基因片段序列。

关键词：乙型肝炎病毒基因分型重叠区扩增基因拼接法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

β-甘露聚糖酶基因高效表达体系的构建

湖北农业科学 2009年第8期48卷 1807-1810页

作者：李斌刘正初王溪森石岩中国农业科学院麻类研究所长沙410205

为构建β-甘露聚糖酶基因高效表达体系,采用重叠区扩增基因拼接法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CTC S-层蛋白启动子和欧文氏杆菌(Erwinia carotovora)CXJZ95-198 β-甘露聚糖酶基因完整开放阅读框定向连接,得到基因拼接体sl... 详细信息

为构建β-甘露聚糖酶基因高效表达体系,采用重叠区扩增基因拼接法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CTC S-层蛋白启动子和欧文氏杆菌(Erwinia carotovora)CXJZ95-198 β-甘露聚糖酶基因完整开放阅读框定向连接,得到基因拼接体slp-man。将slp-man克隆到高效表达载体pET-28a+上,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)JM109中。结果表明,β-甘露聚糖酶基因高效表达体系构建成功,重组菌发酵11h酶活达到671.3U·mL-1,是欧文氏杆菌CXJZ95-198的1.48倍。

关键词： β-甘露聚糖酶基因欧文氏杆菌重叠区扩增基因拼接法

SOE-PCR法检测PRRSV ORF5缺失跨膜区的融合蛋白基因片段的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2009年第3期 80-82页

作者：刘明莉夏平安党占国王中明邱璜卢高峰李伟娟河南农业大学牧医工程学院

PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒，含有8个开放阅读框（open reading frames，ORFs），其中ORF5—7分别编码PRRSV主要的结构蛋白：糖基化囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。糖基化囊膜蛋白（E）又称GP5蛋白，具有良好的抗... 详细信息

PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒，含有8个开放阅读框（open reading frames，ORFs），其中ORF5—7分别编码PRRSV主要的结构蛋白：糖基化囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。糖基化囊膜蛋白（E）又称GP5蛋白，具有良好的抗原性和免疫原性，分子质量约为25ku。重叠延伸PCR技术简称SOE—PCR，又称重叠区扩增基因拼接法、交错延伸剪接PCR技术或套叠PCR技术。此技术利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变，而且不需要内切酶消化和连接酶处理。研究在分析了GP5蛋白跨膜区之后，采用SOE—PCR的方法将跨膜区基因缺失，对GP5蛋白编码跨膜区外的基因片段进行了克隆，旨在为获得高表达、高活性的基因产物打下基础。

关键词： PCR法基因片段跨膜区融合蛋白重叠区扩增基因拼接法 PCR技术 GP5蛋白正链RNA病毒