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基于miR-486-5p/ETS-1信号轴研究新风胶囊改善类风湿关节炎炎症反应的机制

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基于miR-486-5p/ETS-1信号轴研究新风胶囊改善类风湿关节炎炎症反...

作者：朱子衡安徽中医药大学

学位级别：硕士

1目的通过Apriori关联规则、随机行走模型数据挖掘方法观察新风胶囊(XFC,xinfeng capsule)与类风湿关节炎(RA,rheumatoid arthritis)患者临床炎症指标的关系,探讨XFC治疗RA的远期临床疗效;通过临床实验观察XFC对RA患者免疫指标、炎症因... 详细信息

1目的通过Apriori关联规则、随机行走模型数据挖掘方法观察新风胶囊(XFC,xinfeng capsule)与类风湿关节炎(RA,rheumatoid arthritis)患者临床炎症指标的关系,探讨XFC治疗RA的远期临床疗效;通过临床实验观察XFC对RA患者免疫指标、炎症因子、相关m RNA表达水平的影响;通过体外细胞实验研究成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞活力、增殖水平、迁移能力、凋亡水平、细胞周期、炎症因子、mi R-486-5p、ETS-1 m RNA表达水平变化及XFC对其影响,从mi R-486-5p/ETS-1信号轴调控炎症反应角度探索XFC治疗RA的作用机制。2方法2.1临床数据挖掘研究本研究收集安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科2022年06月至2023年03月的RA患者。对照组予以西医基础治疗,XFC组在西医基础治疗上予以XFC(一天3次,1次3粒)治疗。通过Apriori关联规则探索XFC与临床炎症指标血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRp)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)的关系,并通过随机行走模型评价XFC对上述炎症指标的远期治疗效果。2.2临床实验研究按随机数字表法将RA患者分为XFC组和对照组,每组各50例。对照组患者予以来氟米特片(10mg/次,1次/天)口服治疗,XFC组在来氟米特片治疗基础上加用XFC(3粒/次,3次/日)口服治疗;疗程均为3个月。观察治疗前后类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环状胍氨酸多肽抗体(anti-CCp,anti-Cyclic Citrullinated peptide)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、mi R-486-5p、ETS-1的表达水平。2.3体外细胞实验研究RA及正常人关节成纤维样滑膜细胞购买赛百慷(上海)生物技术股份有限公司。细胞进行传代培养,至3代时开始实验。细胞培养24h,并在细胞达到0.70时通过Lipofectamine 2000将质粒转入细胞中。将细胞分为以下六组:FLS组、RA-FLS组、XFC+RA-FLS组、RA-FLS+mi R-486-5p mimics-NC组、RA-FLS+mi R-486-5p mimics组、XFC+RA-FLS+mi R-486-5p mimics组。通过双荧光素酶基因报告实验验证mi R-486-5p与ETS-1的靶向关系;通过CCK-8、平板克隆实验、细胞迁移实验、流式细胞术、实时定量pCR法(real time quantitative pCR,RT-pCR)、酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA),探讨XFC对成纤维样滑膜细胞活力、增生能力、迁移水平、细胞周期、凋亡水平以及IL-1β、IL-10、mi R-486-5p、ETS-1表达水平的影响。3结果3.1临床数据挖掘研究结果3.1.1 Apriori关联规则观察新风胶囊与RA患者临床炎症指标的关系结果显示,XFC的使用与ESR、CRp、SAA、VEGF的降低有强关联关系。3.1.2随机行走模型观察新风胶囊对RA患者临床炎症指标的远期疗效结果显示,XFC组CRp、ESR、VEGF在改善系数方面均优于对照组。3.2临床实验研究结果3.2.1 RA组与正常组RF、anti-CCp、IL-1β、IL-10表达水平比较相较于正常组,RA组RF、anti-CCp、IL-1β水平明显升高,IL-10水平明显降低(p486-5p、ETS-1 m RNA表达水平比较相较于正常组,RA组mi R-486-5p m RNA表达水平明显升高,ETS-1 m RNA表达水平明显降低(p486-5p、ETS-1 m RNA表达水平与IL-1β、IL-10、RF、anti-CCp水平的相关性RA患者中mi R-486-5p与RF、IL-1β呈正相关;ETS-1与IL-10呈正相关(pp5观察组与对照组治疗前后RF、anti-CCp水平变化情况与治疗前相比,两组患者治疗后RF、anti-CCp水平明显降低(p5或pp水平改变优于对照组(p<0.01)。3.2.6

关键词：新风胶囊类风湿关节炎炎症 miR-486-5p ETS-1

miR-486-5p的靶基因预测及其在胰腺腺癌中作用的生物信息学分析

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中国普通外科杂志 2020年第6期29卷 715-722页

作者：任天宇周新童党胜春江苏大学附属医院普通外科江苏镇江212001

背景与目的:胰腺癌是癌症相关性死亡的主要原因之一,是消化系统恶性程度最高的肿瘤,其主要的病理类型为胰腺腺癌(pAAD),预后较差。miR-486-5p在不同癌症中起重要的作用,但尚缺乏miR-486-5p在pAAD中的研究报告。本研究通过生物信息学方... 详细信息

背景与目的:胰腺癌是癌症相关性死亡的主要原因之一,是消化系统恶性程度最高的肿瘤,其主要的病理类型为胰腺腺癌(pAAD),预后较差。miR-486-5p在不同癌症中起重要的作用,但尚缺乏miR-486-5p在pAAD中的研究报告。本研究通过生物信息学方法探寻miR-486-5p的靶基因并分析靶基因在pAAD中的表达及意义。方法:使用pROGmirV2数据库分析miR-486-5p与pAAD预后的相关性。综合运用多个数据平台来预测miR-486-5p的靶基因,并使用DAVID在线数据库对筛选出的靶基因进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科(KEGG)信号通路分析,再以STRING数据库构建靶基因蛋白质-蛋白质相互作用(ppI)网络,并利用Cytoscape软件进行可视化编辑,筛选ppI网络中的核心基因,最后验证筛选出的核心基因,找出与pAAD预后相关的核心基因。结果:miR-486-5p低表达pAAD患者的总生存时间较miR-486-5p高表达患者明显缩短(p5)。得到至少被3个数据库预测到的靶基因数目共187个。GO分析显示,靶基因主要参与蛋白质稳定、蛋白质磷酸化、RNA聚合酶II启动子的转录正调节及凋亡过程的负调节等生物学过程;KEGG分析显示靶基因主要参与FOXO信号通路、p53信号通路、Ras信号通路及pI3K-Akt信号通路等。miR-486-5p潜在靶基因的蛋白网络分析发现,SIRT1、pTEN、SMAD2、CSNK2A1、SE RpINE1是ppI网络中关键靶基因;进一步通过GEpIA验证发现CSNK2A1、SERpINE1在pAAD组织中均明显上调(均p5),这些基因的高表达与pAAD患者的总体存活和无病生存相关(均p5),CSNK2A1和SERpINE1的高表达的pAAD患者有更差的预后。结论:miR-486-5p通过对靶向基因的调控,作用于pAAD患者体内多种信号通路的网络,参与pAAD的发生和发展,影响pAAD患者的预后。

关键词：胰腺肿瘤 miR-486-5p 基因预后计算生物学

miR-486-5p通过调节NOTCH2的表达而参与子痫前期发病机制的研究

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MiR-486-5p通过调节NOTCH2的表达而参与子痫前期发病机制的研究

作者：秦仕婷青岛大学

学位级别：硕士

目的:本研究建立了子痫前期(preeclampsia,pE)胎盘组织微小非编码RNA(MicroRNA,mirNA)差异表达谱并对其胎盘组织、血浆和单个核细胞进行差异验证。探讨差异表达谱中差异明显的miR-486-5p作为诊断pE的生物学标志物的临床价值以及mir-486... 详细信息

目的:本研究建立了子痫前期(preeclampsia,pE)胎盘组织微小非编码RNA(MicroRNA,mirNA)差异表达谱并对其胎盘组织、血浆和单个核细胞进行差异验证。探讨差异表达谱中差异明显的miR-486-5p作为诊断pE的生物学标志物的临床价值以及miR-486-5p通过NOTCH2而参与pE发病的相关机制。方法:(1)选取5例pE患者和5例正常妊娠孕妇的胎盘组织进行转录组测序技术(RNA-seq)来初步发现胎盘组织中差异表达的mirNAs,同时利用30例pE患者和30例正常妊娠妇女胎盘组织对差异表达的miR-486-5p展开验证。(2)利用实时荧光定量pCR(qpCR)技术对100例患者和100例正常妊娠妇女的单个核细胞和血浆中的miR-486-5p的表达量展开验证,并分析血浆中miR-486-5p的表达水平以及与临床指标的相关性。(3)用Lipo3000瞬时转染NC,miR-486-5p mimic,inhibitor NC和miR-486-5p inhibitor进入滋养层细胞系JEG-3和BeWo细胞以及血管内皮细胞系HUVECs。(4)进行体外细胞增殖、侵袭、浸润和划痕实验,探究miR-486-5p对人绒毛滋养层细胞株BeWo和JEG-3的作用。(5)进行酶联免疫吸附测定(ELISA)实验,探究miR-486-5p对血管内皮细胞株HUVECs中炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。(6)在线数据库Targetscan、mirDB以及mirWalk初步预测miR-486-5p所有靶向基因,利用STRING在线网站进行靶基因相互作用图谱绘制,用双荧光素实验证实miR-486-5p与NOTCH2的靶向作用。(7)用Western blotting(WB)检测NOTCH2蛋白的表达,同时分析胎盘中miR-486-5p和NOTCH2的相关性。(8)用qpCR技术检测滋养层细胞系转染NC,miR-486-5p mimic,inhibitor NC和miR-486-5p inhibitor 24h后NOTCH2 mRNA的表达以及用WB检测转染48h后NOTCH2蛋白的表达。(9)进行体外细胞增殖、迁移和侵袭实验,探究滋养层细胞株BeWo细胞转染miR-486-5p inhibitor+si-NOTCH2,miR-486-5p inhibitor和inhibitor NC后的不同变化。结果:(1)RNA-seq的结果显示出,相较于正常妊娠妇女,pE患者胎盘组织中共有72个差异表达的mirNAs,其中34个mirNAs呈现上调趋势,38个mirNAs呈现下调趋势。(2)qpCR技术结果显示,相对于正常妊娠妇女,pE患者的胎盘组织、单个核细胞和血浆中表达的miR-486-5p均呈现显著的上调趋势。其中,不论是在血浆还是单个核细胞样本中,其中重度pE患者和早发型pE患者的miR-486-5p的表达水平升高的更加显著。皮尔逊相关分析结果显示,血浆中miR-486-5p的表达量与收缩压、舒张压、平均动脉压、肌酐、谷丙转氨酶与谷草转氨酶均有一定的正相关。(3)体外功能实验结果显示,与NC相比,miR-486-5p mimic抑制了BeWo细胞和JEG-3细胞的迁移,浸润和增值,而同inhibitor NC相比,转染miR-486-5p inhibitor后BeWo细胞和JEG-3细胞的迁移,浸润和增值能力增强。(4)ELISA结果展示,相较于NC组,转染miR-486-5p mimic后的血管内皮细胞HUVECs中表达的炎症因子,IL-6和TNF-α可表现出显著的上升趋势,同样,对比于inhibitor NC组,HUVECs细胞转染miR-486-5p mimic后,IL-6和TNF-α的表达水平呈现有统计学意义的下降趋势。(5)miR-486-5p与NOTCH2的相关性研究显示,pE患者的胎盘组织中NOTCH2的表达水平明显下调,qpCR技术结果显示组织中miR-486-5p的表达与NOTCH2的表达呈现线性负性相关关系。(6)miR-486-5p可以抑制NOTCH2表达的验证:于BeWo、JEG-3和HUVECs细胞中,过表达miR-486-5p后,NOTCH2 mRNA水平均显著下调,同时抑制miR-486-5p后,NOTCH2mRNA水平均显著上调。此外,将BeWo和JEG-3细胞中过表达miR-486-5p后,NOTCH2蛋白水平显著下降。而抑制滋养层细胞中的miR-486-5p后,NOTCH2蛋白的表达水平则显著的增加。双荧光素实验的结果证实,在BeWo细胞中共转染野生型载体时荧光强度可显著下降,而共转染突变型载体时荧光强度却并未发生变化,进一步证实了miR-486-5p可以通过NOTCH2而参与子痫前期的发病过程。(7)相比于inhibitor NC组,抑制miR-486-5p可促

关键词：妊娠期高血压子痫前期 miR-486-5p NOTCH2

糖尿病肾病肾小球内皮细胞外泌体源性miR-486-5p对足细胞损伤的影响及机制研究

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糖尿病肾病肾小球内皮细胞外泌体源性miR-486-5p对足细胞损伤的影...

作者：吴伦碧河北医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究以体外培养的人肾小球内皮细胞(human renal glomerular endothelial cells,HRGECs)及人肾小球足细胞(human glomerular podocytes,HpCs)为研究对象,探讨糖尿病肾病时HRGECs外泌体源性mi R-486-5p对HpCs损伤的影响及可能机制,为进一步探索糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)蛋白尿形成机制,寻求可能治疗靶点提供实验依据。方法:1.检测DKD肾小球内皮细胞来源的外泌体是否介导足细胞损伤以体外培养的HRGECs及HpCs为研究对象,将HRGECs随机分为对照组(control,葡萄糖浓度为5 m M)、高糖刺激组(high glucose,HG,葡萄糖浓度为30 m M)、甘露醇组(mannitol,MA,甘露醇浓度为30 m M)和TGF-β1刺激组(transforming growth factor-β1,TGF-β1,TGF-β1浓度为20 ng/ml),培养48 h,更换为正常HRGECs的ECM培养基继续培养24 h:(1)取此培养上清与HpCs的培养基RpMI1640按照1:1的比例配制成条件培养基,以此条件培养基培养HpCs 48 h;(2)收集上清并提取外泌体,透射电镜及蛋白质免疫印迹(western blot,WB)鉴定外泌体形态和检测特异性标记蛋白的表达,免疫荧光(immunofluorescence,IF)验证pKH67标记的外泌体是否可被HpCs摄取;(3)提取外泌体,以30μg/ml浓度的外泌体刺激HpCs 48 h,收集各组HpCs,WB检测HpCs中nephrin和podocin蛋白表达水平。2.检测DKD肾小球内皮细胞来源的外泌体中mi R-486-5p是否参与介导足细胞损伤⑴以体外培养的HRGECs为研究对象,随机分为对照组、HG刺激组、MA组和TGF-β1刺激组,培养48 h,更换为正常HRGECs培养基ECM继续培养24 h,收集上清并提取外泌体,基因芯片技术筛选外泌体中差异表达的mi RNA,实时荧光定量pCR(quantitative real time polymerase chain reaction,real time pCR)检测各组外泌体中mi R-486-5p水平。⑵HRGECs随机分为对照组、HG组、MA组、HG+mi R-486-5p inhibitor组、HG+NC组以及TGF-β1组、TGF-β1+mi R-486-5p inhibitor组、TGF-β1+NC组,细胞融合至50%时进行转染,24 h后加入HG及TGF-β1刺激48 h,再更换为正常HRGECs培养基ECM继续培养24 h,收集培养上清,提取外泌体,real time pCR检测外泌体中mi R-486-5p水平;以30μg/ml浓度的外泌体刺激HpCs 48 h,real time pCR检测HpCs中mi R-486-5p水平,WB检测HpCs中nephrin、podocin蛋白表达水平。3.检测DKD肾小球内皮细胞来源的外泌体中mi R-486-5p是否通过调控pTEN/Akt信号通路,介导足细胞损伤HRGECs随机分为control、HG、MA、HG+mi R-486-5p inhibitor、HG+NC、TGF-β1、TGF-β1+mi R-486-5p inhibitor及TGF-β1+NC组,细胞融合至50%时进行转染,孵育24 h后加入高糖及TGF-β1刺激48 h,再更换为正常HRGECs培养基ECM继续培养24 h,收集培养上清,提取外泌体,以30μg/ml浓度的外泌体刺激HpCs 48 h,WB检测HpCs中pTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)、p-Akt、Akt蛋白表达水平。结果:1.DKD时肾小球内皮细胞来源的外泌体可介导足细胞的损伤⑴WB结果显示,与对照组相比,高糖及TGF-β1刺激HRGECs后,其培养上清会造成HpCs中nephrin和podocin蛋白水平降低。⑵透射电镜结果显示,HRGECs上清提取物为圆形或椭圆形,具有双层膜结构,直径为80-150 nm,符合外泌体形态特征;WB结果证实外泌体提取成功。IF结果显示,高糖及TGF-β1刺激HRGECs所分泌的外泌体可被HpCs摄取;且高糖及TGF-β1刺激HRGECs所分泌的外泌体可引起HpCs中nephrin和podocin蛋白水平降低。2.DKD时肾小球内皮细胞来源的外泌体中mi R-486-5p水平升高,进而引起足细胞损伤⑴提取外泌体,基因芯片技术筛选差异表达的mi RNA,显示mi R-486-5p水平升高。Real time pCR验证高糖及TGF-β1刺激HRGECs所分泌的外泌体mi

关键词：糖尿病肾病肾小球内皮细胞外泌体 miR-486-5p 足细胞

miR-486-5p调控MST4表达介导脑出血损伤作用机制研究

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MiR-486-5p调控MST4表达介导脑出血损伤作用机制研究

作者：黄兰秀皖南医学院

学位级别：硕士

目的:探究急性脑出血后血清中mi R-486-5p表达水平是否发生改变,及mi R-486-5p表达水平与血肿体积的关系,进一步探讨脑出血损伤后哺乳动物ste20样激酶4(Mammalian sterile-20-like kinase 4,MST4)的表达量对细胞活力的影响,研究mi R-486... 详细信息

目的:探究急性脑出血后血清中mi R-486-5p表达水平是否发生改变,及mi R-486-5p表达水平与血肿体积的关系,进一步探讨脑出血损伤后哺乳动物ste20样激酶4(Mammalian sterile-20-like kinase 4,MST4)的表达量对细胞活力的影响,研究mi R-486-5p是否靶向MST4,参与调控脑出血后的病理损伤过程,影响脑出血损伤情况。材料和方法:生物信息学分析筛选脑出血后差异表达同时可能与MST4相互作用的micro RNA。采用双荧光素酶基因报告实验检测mi R-486-5p与MST4的靶向关系。收取2021年4月至22年7月于皖南医学院第一附属医院神经内科住院的急性脑出血患者及健康体检者各30例,采用定量实时聚合酶链反应(Quantitative Real-Time pCR,q RT-pCR)检测脑出血人群及健康人群血清中mi R-486-5p的水平。依据头颅CT影像计算血肿体积,分析mi R-486-5p的表达水平与血肿体积的相关性。用Hemin诱导HT22细胞损伤建立离体脑出血模型,采用q RT-pCR检测HT22细胞出血损伤后和正常细胞中mi R-486-5p的表达水平。采用CCK-8测定使用MST4抑制剂橙皮苷(Hesperadin,Hp)后各组细胞损伤情况,蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)测定各组MST4表达变化。使用mi R-486-5p mimic及inhibitor转染HT22细胞,将mi R-486-5p上调或下调后,采用WB检测MST4表达水平,采用CCK-8测定各组细胞损伤情况。结果:生物信息学分析结果提示mi R-486-5p在脑出血后差异表达并且与MST4存在作用关系。MST4的3’-UTR存在保守的mi R-486-5p结合位点,构建突变序列,双荧光素酶报告基因检测结果显示:mi R-486-5p mimic与野生型MST4双荧光素酶质粒共转染时,荧光值下降(p5),与突变型MST4双荧光素酶质粒共转染时,荧光值无明显变化(p>0.05)。下调mi R-486-5p后,MST4表达上升(p5),细胞损伤程度增加(p5)。急性脑出血人群血清中mi R-486-5p表达明显低于健康人群(p5)。血清mi R-486-5p水平对急性脑出血有预测价值(AUC=0.8939,95%置信区间:0.8148-0.9729,敏感度0.9333,特异度0.7667,约登指数0.7)。急性脑出血患者血清mi R-486-5p表达水平与血肿体积呈显著负相关(r=-0.6513,p486-5p表达显著降低(p5),与脑出血后血清mi R-486-5p表达水平变化相一致。在Hemin诱导HT22细胞中出血损伤后,MST4表达显著升高(p5);使用MST4抑制剂后,细胞损伤程度减轻(p5),MST4表达下降(p5),MST4抑制剂具有脑保护作用。结论:mi R-486-5p在脑出血后低表达,mi R-486-5p表达水平与血肿体积负相关。脑出血后MST4表达升高,MST4抑制剂具有脑保护作用。mi R-486-5p可以靶向结合并下调MST4,参与调控脑出血后的病理损伤过程,改善细胞活力,减轻损伤程度。

关键词：脑出血 miR-486-5p MST4 HT22细胞

miR-486-5p靶向TRpM2对帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响

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中国老年学杂志 2021年第1期41卷 115-122页

作者：彭秀华柳明杰锦州市中心医院神经内科辽宁锦州121000 锦州医科大学

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(Mpp+)诱导的帕金森病(pD)模型细胞凋亡及自噬的影响。方法用Mpp+诱导SK-N-SH细胞建立pD细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-pCR)与Western印迹平行检测pD细胞模型中... 详细信息

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(Mpp+)诱导的帕金森病(pD)模型细胞凋亡及自噬的影响。方法用Mpp+诱导SK-N-SH细胞建立pD细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-pCR)与Western印迹平行检测pD细胞模型中miR-486-5p、瞬时受体电位(TRp)M2的表达;将miR-486-5p mimics、mir-NC、si-TRpM2、si-NC转染至SK-N-SH细胞,转染后细胞分为Con组、Mpp+组、Mpp++miR-486-5p组、Mpp++mir-NC组、Mpp++si-TRpM2组、Mpp++si-NC组。流式细胞仪分析pD细胞模型凋亡率;Western印迹检测pD细胞模型自噬蛋白标记物微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ、LC3Ⅰ、线粒体功能相关蛋白线粒体融合蛋白(Mfn)2、核呼吸因子(NRF)1及凋亡蛋白B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)3表达情况;双荧光素酶报告基因检测验证miR-486-5p与TRpM2的靶向调控作用。结果Mpp+处理后的SK-N-SH细胞凋亡率明显升高(ppase3蛋白表达水平明显升高(pppD细胞模型中miR-486-5p表达水平降低(ppM2表达水平升高(ppD细胞模型中miR-486-5p过表达与干扰TRpM2的表达可明显降低细胞凋亡率与LC3Ⅱ、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达(ppmiR-486-5p可靶向调控TRpM2的表达;TRpM2过表达可逆转miR-486-5p过表达对Mpp+诱导的SK-N-SH细胞中线粒体功能相关蛋白、自噬相关蛋白表达及细胞凋亡的作用。结论miR-486-5p过表达可通过下调TRpM2的表达而抑制pD模型细胞凋亡及自噬。

关键词：帕金森病 miR-486-5p 瞬时受体电位(TRp)M2 凋亡自噬

circ-CBLB/miR-486-5p在脾虚湿盛型类风湿关节炎患者中的异常表达及意义

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海南医学院学报 2023年第17期29卷 1324-1331页

作者：李舒万磊刘健黄传兵陈莹莹李方泽胡赛赛程静安徽中医药大学安徽合肥230031 安徽中医药大学第一附属医院风湿科安徽合肥230031

目的:探讨circ-CBLB/miR-486-5p在脾虚湿盛型类风湿关节炎患者中的异常表达及意义。方法:纳入的30例健康者来自安徽省中医院体检中心,纳入的60例类风湿关节炎患者来自安徽中医药大学第一附属医院。类风湿关节炎患者的疾病活动评分采用VA... 详细信息

目的:探讨circ-CBLB/miR-486-5p在脾虚湿盛型类风湿关节炎患者中的异常表达及意义。方法:纳入的30例健康者来自安徽省中医院体检中心,纳入的60例类风湿关节炎患者来自安徽中医药大学第一附属医院。类风湿关节炎患者的疾病活动评分采用VAS评分和DAS28评分评估、关节症状和脾虚证候积分采用分级量化法评估、免疫炎症指标采用相关仪器检测、炎症细胞因子采用酶联免疫吸附法检测、巨噬细胞标志物采用流式细胞术检测、通路基因表达量采用实时荧光定量法检测;通过受试者曲线来评估circCBLB和miR-486-5p对类风湿关节炎疾病活动度的预测效果。结果:(1)类风湿关节炎患者miR-486-5p、CD14+CD86+、ESR、CRp、RF、Anti-CCp-Ab、IL-6、TNF-α水平显著高于与健康者,circ-CBLB、CD14+CD163+、IL-4、IL-10水平显著低于健康者;(2)类风湿关节炎患者circ-CBLB表达水平,与CD14+CD163+呈正相关,与miR-486-5p、CD14+CD86+呈负相关;miR-486-5p表达水平与CD14+CD163+呈负相关,与CD14+CD86+呈正相关;CD14+CD86+与CD14+CD163+呈负相关;ESR与circ-CBLB呈负相关,与miR-486-5p、CD14+CD86+、CRp呈正相关;CRp与circ-CBLB、CD14+CD163+呈负相关,与CD14+CD86+、ESR呈正相关;(3)类风湿关节炎患者circ-CBLB表达水平与关节压痛、晨僵、少气懒言、食后腹胀积分呈负相关;miR-486-5p表达水平与关节压痛、食欲减退积分呈正相关。(4)ROC曲线显示:circCBLB方面,ESR、CRp、VAS、DAS28 AUC分别为0.662(p=0.032),0.658(p=0.035),0.516(p=0.830),0.791(p=0.000)。miR-486-5p方面,ESR、CRp、VAS、DAS28 AUC分别为0.566(p=0.385),0.511(p=0.883),0.592(p=0.223),0.727(p=0.003)。结论:脾虚湿盛型类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中的circ-CBLB、miR-486-5p的异常表达与类风湿关节炎的炎症极化标志物、免疫炎症、疾病活动度、关节症状及脾虚证候有关,且circ-CBLB的低水平表达和miR-486-5p的高水平表达对类风湿关节炎疾病活动度有一定的预测价值。

关键词：类风湿关节炎 circ-CBLB miR-486-5p 炎症极化脾虚湿盛证

miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-pI3K/AKT-mTOR信号通路的影响

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基因组学与应用生物学 2021年第2期40卷 481-488页

作者：郭晓萍陈时锦张名媛蒋钦杨兰干球广西医科大学实验动物中心南宁530021 桂林力源粮油食品集团有限公司研究院南宁530005 广西大学动物科学技术学院桂林541100

本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-pI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制。利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制m... 详细信息

本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-pI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制。利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制miR-486-5p的表达,利用荧光定量pCR法检测miR-486-5p过表达和抑制效率,同时检测过表达和抑制miR-486-5p后IGF-1、INSR、IRS1、pI3K、pI3KR1、pDK1、AKT1、pTEN、Fox O1、m TOR、4EBp1基因的mRNA变化。荧光定量pCR结果显示24 h过表达倍数和抑制效率分别为2.8倍和35%,48 h过表达倍数和抑制效率分别为1.4倍和15%。过表达mir-486后,24 h和48 h时INSR、pDK1、pTEN、AKT1、FoxO1、4EBp1基因均显著下调;抑制mir-486后,24 h时4EBp1显著上调,48 h时IGF-1显著上调,4EBp1显著下调。本研究表明过表达miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达受到抑制,抑制miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达上升,这可能是肥胖患者血清miR-486-5p升高损害胰岛素信号引起葡萄糖摄取能力降低,从而导致胰岛素抵抗发生的原因。

关键词： miR-486-5p IGF-1-pI3K/AKT-mTOR信号通路 C2C12细胞

mir-221-3p和miR-486-5p的表达与输卵管性不孕症患者腹腔镜术后生殖预后的相关性分析

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中国性科学 2024年第1期33卷 54-58页

作者：蒲章卫窦晓梦董羊羊纪江海宋欣沧州市人民医院妇科河北沧州061000

目的探讨mir-221-3p和miR-486-5p的表达与输卵管性不孕症患者腹腔镜术后生殖预后的相关性。方法选取2019年10月至2021年9月就诊于沧州市人民医院的100例输卵管性不孕患者作为研究对象,根据腹腔镜术后1年内是否妊娠分为妊娠组(n=66)和未... 详细信息

目的探讨mir-221-3p和miR-486-5p的表达与输卵管性不孕症患者腹腔镜术后生殖预后的相关性。方法选取2019年10月至2021年9月就诊于沧州市人民医院的100例输卵管性不孕患者作为研究对象,根据腹腔镜术后1年内是否妊娠分为妊娠组(n=66)和未妊娠组(n=34)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(pCR)法检测患者血清mir-221-3p和miR-486-5p的水平并进行分析,采用化学免疫发光法检测血清卵泡刺激素(FSH)、催乳素(pRL)和黄体生成素(LH)水平。收集并比较两组患者临床特征,采用pearson相关性分析患者妊娠情况与血清mir-221-3p和miR-486-5p表达的相关性,采用Logistic回归分析输卵管性不孕症妊娠情况的影响因素。结果妊娠组患者血清mir-221-3p和miR-486-5p表达水平显著高于未妊娠组患者(p5),FSH和LH水平均显著低于未妊娠组(p5)。两组患者盆腔炎病史、子宫输卵管造影(HSG)检查、盆腔粘连和盆腔积液指标比较,差异具有统计学意义(p5);患者术后未妊娠与mir-221-3p、miR-486-5p水平均呈负相关(r=-0.675、-0.585,p5);mir-221-3p及miR-486-5p的表达、FSH、LH、HSG检查、盆腔粘连和盆腔炎病史为患者妊娠情况的影响因素(p5)。结论mir-221-3p和miR-486-5p的表达与输卵管性不孕症患者腹腔镜术后未妊娠呈负相关,对判断患者预后情况具有一定的临床意义。

关键词：输卵管性不孕症 mir-221-3p miR-486-5p 预后