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Arg77和Glu80定点突变同时去除葡激酶中的t和B细胞抗原表位(英文)

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微生物学报 2011年第5期51卷 692-703页

作者：徐瑞光贺进田贾锴陈希刘建伟朱科河北师范大学生命科学学院石家庄050016 石家庄制药集团河北中润制药技术有限公司石家庄05004l

【目的】对葡激酶的t和B细胞抗原表位重叠的关键氨基酸Arg77和Glu80进行定点突变以降低葡激酶的免疫原性。【方法】基于Arg77和Glu80的溶剂可及表面积设计葡激酶的突变体;突变体在大肠杆菌DH5α中进行表达。经过三步层析法纯化后,分析... 详细信息

【目的】对葡激酶的t和B细胞抗原表位重叠的关键氨基酸Arg77和Glu80进行定点突变以降低葡激酶的免疫原性。【方法】基于Arg77和Glu80的溶剂可及表面积设计葡激酶的突变体;突变体在大肠杆菌DH5α中进行表达。经过三步层析法纯化后,分析突变体的纤溶活性和免疫原性。【结果】免疫学实验提示,葡激酶导致th2免疫反应;Glu80突变为丙氨酸和丝氨酸减少了溶剂可及表面积,同时去除了部分t和B细胞抗原表位;Arg77突变为天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸仅去除了部分T细胞抗原表位;6个组合突变体中,Sak(R77Q/E80A)和Sak(R77Q/E80S)有效去除了部分B和T细胞抗原表位,降低了葡激酶的免疫原性;Sak(R77Q/E80A)and Sak(R77Q/E80S)的纤溶活性和催化效率与r-Sak相当。

关键词：葡激酶 T细胞抗原表位 B细胞抗原表位免疫原性蛋白质工程

羊口疮病毒ORFV113蛋白的主要特性及B细胞和T细胞抗原表位预测

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贵州畜牧兽医 2023年第5期47卷 45-48页

作者：李刚龙琴琴吴鹏曾月娥庞峰贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

为了预测羊口疮病毒ORFV113蛋白的主要特性及其优势B细胞和T细胞抗原表位,分别利用在线软件ProtParam预测ORFV113蛋白的理化性质,DeeptMHMM预测其跨膜区,SignalP 6.0预测其信号肽,SOPMA预测其二级结构,PSORt预测其亚细胞定位,ABCpred预... 详细信息

为了预测羊口疮病毒ORFV113蛋白的主要特性及其优势B细胞和T细胞抗原表位,分别利用在线软件ProtParam预测ORFV113蛋白的理化性质,DeeptMHMM预测其跨膜区,SignalP 6.0预测其信号肽,SOPMA预测其二级结构,PSORt预测其亚细胞定位,ABCpred预测其优势B细胞表位,IEDB预测其优势细胞毒性t细胞表位。结果:ORFV113蛋白由208个氨基酸组成,为不稳定亲水性蛋白,分子质量约22.08 ku,理论等电点(PI)为4.36,在3~25 aa处存在1个跨膜区,不含信号肽,主要定位于细胞质膜;ORFV113蛋白的二级结构由延伸链(16.35%)、α-螺旋(23.08%)、β-转角(4.81%)、无规则卷曲(55.77%)组成;ORFV113蛋白存在11个优势B细胞表位,分别位于164~179 aa、62~77 aa、132~147 aa、120~135 aa、138~153 aa、101~116 aa、56~71 aa、188~203 aa、175~190 aa、49~64 aa、108~123 aa;存在3个优势t细胞表位,分别位于63~71 aa、121~129 aa、162~170 aa。结论:ORFV113蛋白为亲水性的跨膜蛋白,含有多个优势B细胞和T细胞抗原表位,可作为多表位疫苗的靶点。

关键词：羊口疮病毒 ORFV113蛋白蛋白特性 B细胞抗原表位 T细胞抗原表位

树鼩RBP3蛋白T细胞抗原表位的预测及其致葡萄膜炎活性

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树鼩RBP3蛋白T细胞抗原表位的预测及其致葡萄膜炎活性

作者：高杰重庆医科大学

学位级别：硕士

研究背景与目的间质视黄醇结合蛋白(Retinol-binding Protein,RBP),也称为光感受器间维生素A类结合蛋白(Interphotoreceptor Retinoid-binging Protein,IRBP)是主要由视网膜视杆细胞产生和分泌的一种糖蛋白,位于光感受器间基质,发挥转... 详细信息

研究背景与目的间质视黄醇结合蛋白(Retinol-binding Protein,RBP),也称为光感受器间维生素A类结合蛋白(Interphotoreceptor Retinoid-binging Protein,IRBP)是主要由视网膜视杆细胞产生和分泌的一种糖蛋白,位于光感受器间基质,发挥转运和释放光感受器和视网膜色素上皮之间的维生素A类的作用。此外,IRBP还具有很强的抗原性和致葡萄膜炎活性。利用IRBP免疫诱导易感性实验动物建立的实验性自身免疫性葡萄膜炎(Experimental Autoimmune Uveoretinitis,EAU)模型,是研究人自身免疫性葡萄膜炎的主要工具。目前,大部分研究使用异源性的人和或牛的IRBP,如人IRBP、IRBP免疫C57BL/6小鼠;IRBP免疫B10.RⅢ小鼠;人的R14(IRBP)、R16(IRBP)免疫Lewis大鼠,以及牛的IRBP抗原免疫诱导大鼠。IRBP诱导EAU的机制并不完全清楚,但目前研究认为可能的机制是具有免疫优势的多肽片段与抗原提呈细胞上的主要组织相容性复合物(Major Histocompatibility Complex,MHC)有较强的亲和力,即IRBP的免疫优势表位结合于抗原提呈细胞上的MHC分子的重要位点上,激活抗原提呈细胞,活化后的抗原提呈细胞可诱导Na?ve t细胞分化为效应性th1细胞和th17细胞,随后上述细胞通过产生如IFN-γ和IL-17等炎性细胞因子而引起疾病的发生。近来,树鼩作为灵长类最亲密的近亲,在视觉系统,免疫系统等方面与灵长类具有高度的相似性,并且已成功利用树鼩建立近视、肝炎等疾病模型。并且研究表明,树鼩的MHC-Ⅱ类分子含有人类相应的MHC-Ⅱ类分子。全基因组测序研究报道了树鼩间质视黄醇结合蛋白RBP3(ELW66657.1),但有关其蛋白的T细胞抗原表位以及是否具有潜在的致葡萄膜炎活性树鼩是否可建立EAU模型并未见报道。基于以上背景,我们进行了以下三个方面的研究:(1)通过DNAMAN软件比对分析树鼩RBP3蛋白与人IRBP蛋白、狒狒IRBP,牛IRBP?大鼠IRBP和小鼠IRBP氨基酸序列的同源性;Protean软件预测树鼩RBP3蛋白的T细胞抗原表位;根据预测结果,筛选并合成与诱导经典B10.RⅢ小鼠EAU模型的IRBP具有较高同源性的抗原多肽,并评价其免疫原性和致小鼠葡萄膜炎的活性,以期筛选出具有免疫原性和致萄膜炎活性的树鼩RBP3蛋白抗原多肽;(2)将筛选出的树鼩RBP3多肽片段免疫B10.RⅢ小鼠诱导EAU,与IRBP诱导B10RⅢ小鼠EAU比较,探讨筛选出的树鼩RBP3抗原多肽诱导B10.RⅢ小鼠葡萄膜炎的发生条件、临床表现、病理组织学特征以及免疫表型特征,以期确定出树鼩RBP3诱导的EAU模型特征;(3)筛选并合成与人R14抗原片段具有较高同源性的树鼩RBP3肽段和人R14抗原片段免疫树鼩,初步探讨上述抗原诱导树鼩实验性自身免疫性葡萄膜炎模型发生的条件、临床表现以及病理特征。通过上述研究,以期为建立新型的EAU模型提供基础的理论依据,以及为葡萄膜炎的研究提供一种理想的动物模型。第一部分树鼩RBP3蛋白T细胞抗原表位的预测及其致葡萄膜炎的活性方法采用DNAMAN软件比对分析树鼩RBP3蛋白氨基酸序列与人IRBP、狒狒IRBP、牛IRBP、大鼠IRBP以及小鼠IRBP蛋白氨基酸序列的同源性。利用Protean软件预测并分析树鼩RBP3蛋白的th细胞抗原优势表位,以及与鼠MHC-Ⅱ类分子相互作用的t细胞抗原位点。根据预测结果合成RBP3肽段,并以100μg RBP3多肽与弗氏完全佐剂(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)充分乳化的PBS溶液200μl通过皮下注射于B10.RⅢ小鼠,按照相同的方法用200μl CFA-PBS溶液免疫B10.RⅢ小鼠作为正常对照组。应用裂隙灯显微镜和H&E染色法评价小鼠眼部炎症的临床表现和病理组织学变化,以期评价RBP3多肽致小鼠的葡萄膜炎活性。应用Mtt法检测RBP3多肽对炎症高峰期脾脏淋巴细胞的诱导增殖情况,以期评价筛选出的RBP3多肽的免疫原性。结果Blast结果显示,树鼩RBP3与人的IRBP同源性最高(83.50%),然后按大鼠IRBP(82.94%)、狒狒IRBP(82.81%)、小鼠IRBP(82.63%)、牛IRBP(82.23%)依次递减。预测分析结果显示,树鼩RBP3蛋白含有47个th细胞抗原优势表位,约占整个氨基序列的44%,同时也具有34个与鼠MHC-Ⅱ类分子I区免疫相关抗原结合位点,约占整个氨基酸序列的19%。B10.RⅢ小鼠在免疫10天后开始产生炎症,13天炎症达到高峰,通过裂隙灯显微镜观察发现,小鼠角膜浑浊、睫状充血、虹膜异常色素沉着、前房积脓、瞳孔不规则和缺损。病理组织HE染色结果发现显示眼组织呈现全葡萄膜炎,眼前段和眼后

关键词：实验性自身免疫性葡萄膜炎树鼩RBP3 IRBP T细胞抗原表位

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丙型肝炎病毒T细胞抗原表位的研究进展

军事医学科学院院刊 2001年第4期25卷 306-309页

作者：闫瑾琦凌世淦军事医学科学院基础医学研究所北京100850

丙型肝炎是一种在全球流行甚广的病毒性传染病 ,目前还没有特效的治疗药物和预防方法 ,对人类健康危害很大 ,因此 ,急需发展预防性和治疗性疫苗来控制丙型肝炎病毒的感染。t细胞介导的细胞免疫因具有清除病毒感染的重要作用 ,在丙型肝... 详细信息

丙型肝炎是一种在全球流行甚广的病毒性传染病 ,目前还没有特效的治疗药物和预防方法 ,对人类健康危害很大 ,因此 ,急需发展预防性和治疗性疫苗来控制丙型肝炎病毒的感染。t细胞介导的细胞免疫因具有清除病毒感染的重要作用 ,在丙型肝炎疫苗研究中受到越来越大的关注 ,本文就t细胞免疫的重要性及CD4 + 和CD8+

关键词：肝炎病毒丙型 t细胞免疫 T细胞抗原表位

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t淋巴细胞抗原表位的预测

国外医学（免疫学分册） 1999年第2期22卷 91-93页

作者：郭华章汪涛第四军医大学基础部

Ｔ淋巴细胞抗原表位，就是抗原蛋白中经抗原提呈细胞处理由主要组织相容性抗原分子提呈给Ｔ淋巴细胞受体的多肽片断。确定Ｔ淋巴细胞抗原表位，对于研究细胞免疫的机理、过程，对于研制针对病毒的亚单位多肽及基因疫苗具有重要意义。随... 详细信息

Ｔ淋巴细胞抗原表位，就是抗原蛋白中经抗原提呈细胞处理由主要组织相容性抗原分子提呈给Ｔ淋巴细胞受体的多肽片断。确定Ｔ淋巴细胞抗原表位，对于研究细胞免疫的机理、过程，对于研制针对病毒的亚单位多肽及基因疫苗具有重要意义。随着对ＭＨＣ分子构象的阐明，ＡＰＣ细胞提呈抗原过程的逐步了解及试验资料的积累，有可能对Ｔ淋巴细胞抗原表位进行初步预测。

关键词： T细胞抗原表位预测 MHC

结核分支杆菌Rv1166的T细胞抗原表位预测分析

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武汉轻工大学学报 2018年第3期37卷 43-46,97页

作者：李海波王华林张绍鹏郑辉王培东余晓丽武汉轻工大学生物与制药工程学院湖北武汉430023

预测和分析结核分枝杆菌Rv1166的CD4^+t和CD8^+t细胞表位,并找出优势表位。先通过NCBI数据库获取目的基因的氨基酸序列,再与结核分枝杆菌复合群以及人类基因进行BLASt同源比对。然后使用Net MHC预测和分析目的基因的CD4^+t细胞表位,再通... 详细信息

预测和分析结核分枝杆菌Rv1166的CD4^+t和CD8^+t细胞表位,并找出优势表位。先通过NCBI数据库获取目的基因的氨基酸序列,再与结核分枝杆菌复合群以及人类基因进行BLASt同源比对。然后使用Net MHC预测和分析目的基因的CD4^+t细胞表位,再通过Net MHC、BIMAS、SYFPEItHI、Net CtL四款在线软件预测和分析CD8^+t细胞表位。最后综合二者的预测结果,找出优势表位。结果为:Rv1166具有免疫原性,综合CD4^+t和CD8^+t细胞表位得到优势表位RLWNMStVL。这个优势候选表位将作为结核特异诊断和多表位结核疫苗的研究基础。

关键词：结核分支杆菌 Rv1166 T细胞抗原表位

羊口疮病毒114蛋白的优势抗原表位预测及ORFV多表位疫苗的构建

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贵州畜牧兽医 2024年第1期48卷 21-24页

作者：周伟杰梁绍波龙琴琴庞峰贵州大学动物科学学院动物医学系贵州贵阳550025

为了探究羊口疮病毒114蛋白作为羊口疮病毒多表位疫苗靶标的可能性,试验利用在线软件ABCpred预测114蛋白的优势B细胞表位,利用在线软件IEDB的MHC-Ⅰbinding server预测114蛋白的优势细胞毒性t细胞(CtL)表位;利用IEDB的MHC-Ⅱbinding ser... 详细信息

为了探究羊口疮病毒114蛋白作为羊口疮病毒多表位疫苗靶标的可能性,试验利用在线软件ABCpred预测114蛋白的优势B细胞表位,利用在线软件IEDB的MHC-Ⅰbinding server预测114蛋白的优势细胞毒性t细胞(CtL)表位;利用IEDB的MHC-Ⅱbinding server预测114蛋白的优势辅助性t细胞(HtL)表位;使用柔性短肽接头连接114蛋白的优势B、T细胞抗原表位,构建羊口疮病毒多表位疫苗。结果:羊口疮病毒114蛋白由346个氨基酸组成,包含12个优势B细胞抗原表位,分别位于292~307 aa、264~279 aa、146~161 aa、331~346 aa、113~128 aa、298~313 aa、35~50 aa、324~339 aa、281~296 aa、162~177 aa、315~330 aa、204~219 aa;包含1个优势CtL抗原表位,位于65~73 aa;包含5个优势HtL抗原表位,分别位于69~83 aa、68~82 aa、70~84 aa、48~62 aa、284~298 aa;构建了基于114蛋白的优势抗原表位的羊口疮病毒多表位疫苗。结论:羊口疮病毒114蛋白包含多个优势B细胞和T细胞抗原表位,可作为羊口疮病毒多表位疫苗的候选靶标,具有诱导强烈体液免疫与细胞免疫反应的可能性。

关键词：羊口疮病毒 114蛋白 B细胞抗原表位 T细胞抗原表位多表位疫苗

超抗原葡萄球菌肠毒素A、B和C1的t细胞抗原HLA表位预测

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微生物学免疫学进展 2001年第1期29卷 8-10页

作者：杨连君司晓辉第四军医大学病理学教研室西安710032 上海第二医科大学第九人民医院口腔医学研究所上海200011

为预测超抗原葡萄球菌肠毒素 (SE)家族中的SEA、SEB和SEC1的HLAI和HLAⅡ抗原结合表位 ,并对其活化t细胞作用的机理进行探讨 ,根据已发表的SEA、SEB和SEC1基因全序列 ,用T细胞抗原表位预测软件Guo tif 2 0对其进行T细胞抗原表位预测 ,... 详细信息

为预测超抗原葡萄球菌肠毒素 (SE)家族中的SEA、SEB和SEC1的HLAI和HLAⅡ抗原结合表位 ,并对其活化t细胞作用的机理进行探讨 ,根据已发表的SEA、SEB和SEC1基因全序列 ,用T细胞抗原表位预测软件Guo tif 2 0对其进行T细胞抗原表位预测 ,统计与HLAI和HLAⅡ各抗原位点结合的SEA、SEB和SEC1肽段的出现次数。结果显示 ,SEA、SEB和SEC1具有共同的特点 ,即都是主要与HLAⅠ类分子的A3位点和HLAⅡ类分子的DR1位点具有较强的结合。说明SEA、SEB和SEC1与HLAⅠ类分子和HLAⅡ类分子都有很强的结合性。三者在HLAⅠ和HLAⅡ结合位点上具有较强的同源性。

关键词：超抗原葡萄球菌肠毒素 T细胞抗原表位 HLA分子预测

大理地区流行3a丙型肝炎病毒E基因序列分析

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中国病原生物学杂志 2019年第5期14卷 539-544页

作者：王佳丽马顺高张米王静林柳爱华宝福凯云南省传染病医院检验科云南昆明650301 大理州人民医院检验科云南省畜牧兽医科学院重点实验室昆明医科大学病热带医学研究所

目的了解云南省大理地区主要流行基因型3a丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)E基因分子特征和遗传进化特点。方法2014年1-5月,在大理州人民医院采集临床诊断为丙型肝炎患者血清,提取病毒RNA,采用3a HCV E基因特异引物进行Rt-PCR扩增... 详细信息

目的了解云南省大理地区主要流行基因型3a丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)E基因分子特征和遗传进化特点。方法2014年1-5月,在大理州人民医院采集临床诊断为丙型肝炎患者血清,提取病毒RNA,采用3a HCV E基因特异引物进行Rt-PCR扩增并测序,采用Clustal X2.1、DNAStAR、Mega 7.1、NetNGlyc 1.0和SYFPEItHI 1.0等生物信息学软件进行序列分析。结果共收集到丙型肝炎患者血清48份,其中4份(标本号为3、4、9、12)3a HCV E基因扩增阳性,测序后分别获得4株病毒1327 nt序列。遗传进化分析显示4株HCV病毒与国内、外流行3a型HCV位于同一进化分支内,核苷酸和氨基酸同源性分别为83.2%~91.5%和82.4%~92.3%,与基因3型其它基因亚型HCV同源性分别为69.6%~73.1%和73.6%~77.7%,与其它基因型HCV病毒同源性均低于66%和70.3%。4、9、12号病毒E基因均存在10个潜在糖基化位点,3号病毒缺少1个224位潜在糖基化位点,其余9个糖基化位点位置与另3株病毒均相同;与其它病毒相比,4株病毒仅有5个T细胞抗原表位预测分值发生变化,其余抗原表位预测分值变化不大。结论大理地区主要流行基因型是HCV3a,其致病性、免疫特性等生物学特征未发生明显改变。

关键词：丙型肝炎病毒基因分型 T细胞抗原表位大理