检索结果-南通市图书馆

竹花叶病毒sybr greenⅱ反转录实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

农业生物技术学报 2019年第4期27卷 752-760页

作者：朱丰晓陈家璐张智俊浙江农林大学林业与生物技术学院浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室

竹花叶病毒(Bamboo mosaic virus, BaMV)是目前为止被发现感染竹类植物唯一的RNA病毒,严重影响竹类植物经济价值。因此,快速准确检测BaMV,对其预防和控制具有重要意义。本研究参考BaMV外壳蛋白基因(coat protein, CP)保守区设计2对特异... 详细信息

竹花叶病毒(Bamboo mosaic virus, BaMV)是目前为止被发现感染竹类植物唯一的RNA病毒,严重影响竹类植物经济价值。因此,快速准确检测BaMV,对其预防和控制具有重要意义。本研究参考BaMV外壳蛋白基因(coat protein, CP)保守区设计2对特异性引物,运用反转录实时荧光定量PCR (reverse transcription real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)法对该病毒进行定性和定量分析,建立了一套基于sybr greenⅱ的BaMV的RT-qPCR检测体系。该检测体系的标准曲线循环阈值(Ct)与模板浓度的对数呈现良好的线性关系,扩增效率和相关系数分别为100%和0.999。重复性实验表明组内及组间变异系数均在1.5%以内。同时,利用此方法首次检测到8个不同竹种中亦存在BaMV。结果表明,sybr greenⅱRT-qPCR检测竹花叶病毒的方法灵敏、特异、重复性好,可用于竹花叶病毒的快速检测。

关键词：竹花叶病毒(BaMV) sybr greenⅱ 反转录实时荧光定量PCR (RT-qPCR)

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

sybr greenⅱ实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼细胞色素CYP1A mRNA方法的建立

SYBR GreenⅡ实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼细胞色素CYP1A mRNA方...

引用

第九届中国实验动物科学年会（2010新疆）

作者：王英英中国水产科学研究院珠江水产研究所

根据剑尾鱼CYP1A和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从浸泡诱导后的剑尾鱼肝脏中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒10倍梯度稀释,采用SY BR greenⅡ染料... 详细信息

根据剑尾鱼CYP1A和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从浸泡诱导后的剑尾鱼肝脏中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒10倍梯度稀释,采用SY BR greenⅡ染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明,构建的剑尾鱼CYP1A和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为10-26,12-26,扩增效率分别为100.53%,98.40%;建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数R均在0.99以上,融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.79℃,83.86℃,表明扩增产物特异性非常好,组内变异系数为0.15%～0.83%,组间变异系数为0.86%～1.66%。本实验建立的剑尾鱼CYP基因实时荧光定量PCR方法具有检测范围广、扩增效率高、特异性好、重复性和稳定性良好等特点,可用于对剑尾鱼CYP基因的转录水平进行测定。

关键词：剑尾鱼 CYPlA 实时荧光定量PCR sybr greenⅱ

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR的建立和临床应用

引用

中国动物传染病学报 2021年第4期29卷 81-87页

作者：庞琳琳赵秋华王欣张俊杰郭爽李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永袁万哲魏建超河北农业大学动物医学院保定071001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 上海市闵行区动物疫病预防控制中心上海201109

为了检测血液、鼻拭子、组织等样本中副猪嗜血杆菌的含量,本研究根据GenBank副猪嗜血杆菌不同血清型的保守区设计引物,建立了sybr greenⅱ荧光定量PCR方法,并对其敏感性、特异性、重复性进行了分析。结果显示:所建立的sybr greenⅱ荧光... 详细信息

为了检测血液、鼻拭子、组织等样本中副猪嗜血杆菌的含量,本研究根据GenBank副猪嗜血杆菌不同血清型的保守区设计引物,建立了sybr greenⅱ荧光定量PCR方法,并对其敏感性、特异性、重复性进行了分析。结果显示:所建立的sybr greenⅱ荧光定量PCR的组间差异性小于4%,组内差异性小于2.5%;溶解曲线峰值单一,特异性良好;其敏感性是普通PCR的100倍,且明显优于细菌分离方法。该方法可用于副猪嗜血杆菌感染早期的诊断和流行性调查。

关键词：副猪嗜血杆菌 sybr greenⅱ 荧光定量PCR 临床应用

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于Real-time PCR及ARMS技术鉴定铁皮石斛药材的研究

基于Real-time PCR及ARMS技术鉴定铁皮石斛药材的研究

引用

作者：徐慧君南京师范大学

学位级别：硕士

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是我国兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)的珍稀濒危特有种,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、抗癌防老等功效,应用历史悠久。以其茎加工而成的名贵中药材“铁皮枫斗”价格昂贵... 详细信息

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是我国兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)的珍稀濒危特有种,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、抗癌防老等功效,应用历史悠久。以其茎加工而成的名贵中药材“铁皮枫斗”价格昂贵,近年来铁皮枫斗商品市场鱼龙混杂,以假乱真、以次充好的现象屡现。本实验通过实时定量PCR技术与突变扩增阻滞体系(amplification refractory mutation system, ARMS)相结合的实验手段建立了一种快速而精准的传统中药材鉴定方法。这一方法能有效的区分铁皮石斛材料与混淆品,适用于新鲜的及干燥的材料,尤其适用于深加工的中药材。本论文以60种石斛材料的ITS序列比对结果为背景,以ARMS技术为指导设计了7对特异性ARMS引物。通过PCR扩增实验筛选出其中特异性最佳同时扩增效率最高的一对引物HT1/HT2。本文旨在建立一种基于sybr greenⅱ染料的荧光定量PCR方法,通过引物对HT1/HT2特异性扩增来分析鉴定铁皮枫斗。实验结果表明HT1/HT2引物对铁皮石斛的特异性荧光定量PCR扩增效果最佳。以HT1/HT2为引物的铁皮枫斗荧光定量PCR鉴别实验结果显示,当被测样品为铁皮石斛时,其Ct值约为20.48,而其他种类的石斛显示了更高的Ct值,结果为31.83±2.65。经统计学分析得两者具有显著性差异(P<0.001)。通过本实验的方法有效克服了枫斗中高含量多糖对DNA扩增的影响,有效区别由铁皮石斛D. officinale加工而成的铁皮枫斗及由其他石斛加工而成的其他枫斗。我们首次将荧光定量PCR技术应用于铁皮石斛药材铁皮枫斗的鉴别中,并结合了ARMS技术增强了引物的特异性。铁皮石斛扩增片段长度仅109bp,既很好克服了DNA片段在深加工过程中的降解带来的问题又大大缩短了扩增的时间提高了鉴定效率。这种将ARMS与荧光定量PCR相结合的方法是铁皮枫斗鉴定的重要方法,该方法显示了灵敏度高、可重复性强、便捷快速、应用性强等优点。

关键词：枫斗荧光定量PCR sybr greenⅱ ARMS 鉴定

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

湖北地区猪A群轮状病毒的流行病学调查与VP7基因的遗传分析

湖北地区猪A群轮状病毒的流行病学调查与VP7基因的遗传分析

引用

作者：张子微长江大学

学位级别：硕士

猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)是养猪场仔猪发生病毒性腹泻的主要病原之一,可通过口鼻感染猪只,引发仔猪胃肠道病变,导致仔猪腹泻、呕吐、排水样粪便,A群为主要致病血清型。PoRV在猪场感染率可达45.5%。因此建立一种PoRV的荧光定... 详细信息

猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)是养猪场仔猪发生病毒性腹泻的主要病原之一,可通过口鼻感染猪只,引发仔猪胃肠道病变,导致仔猪腹泻、呕吐、排水样粪便,A群为主要致病血清型。PoRV在猪场感染率可达45.5%。因此建立一种PoRV的荧光定量RT-PCR方法对该病毒进行流行病学调查,明确流行基因型,对防控猪A群轮状病毒具有重要意义。本研究开展以下三方面的研究内容:1.猪A群轮状病毒荧光定量检测方法的建立:基于A群PoRV的VP7基因片段设计一对特异性引物,建立sybr greenⅱ实时荧光定量PCR检测方法,并与GB/T 36871-2018建立的方法进行对比。结果表明建立的sybr greenⅱ实时荧光定量PCR法具有良好的特异性;检测下限为10拷贝/μL;标准曲线为Y=-3.5547x+38.87,扩增效率为91%;批间变异系数范围为0.31%～0.47%,批内变异系数范围为0.34%～0.76%,表明该方法扩增效率高,重复性、稳定性好。应用该方法和GB/T36871-2018同时对采集的临床样本进行检测,符合率为100%,该方法为猪场临床样本检测提供了检测手段。2.湖北地区猪A群轮状病毒流行病学调查:采用本研究建立的猪轮状病毒的荧光定量PCR法对2021年8月至2022年12月湖北地区使用轮状病毒灭活苗的规模化猪场的4964份样品进行检测。结果显示,PoRV总体阳性率为18.07%(897/4964);不同类型样本PoRV阳性率:拭子18.80%(639/3399)、血样3.90%(24/616)、初乳17.49%(60/343)、肠内容物47.12%(90/191)、猪舍环境22.65%(77/340)和畜禽运输车辆9.33%(7/75);不同日龄猪群拭子PoRV阳性率:0-28日龄21.57%(313/1451)、29-60日龄27.98%(204/729)、61-100日龄14.31%(93/650)、母猪5.10%(29/569);2021～2022年不同月份PoRV阳性率:2021年8月阳性率最低为6.67%,11月阳性率最高为26.10%;2022年6月阳性率最低为4.81%,1月阳性率最高为39.14%。数据表明PoRV在肠内容物中检出率高,主要感染60及以下日龄猪群;该病毒在湖北地区全年存在,在3月～6月阳性率较低,1月～2月、10月～12月阳性率较高。3.湖北地区PoRV的VP7基因遗传进化分析:本研究设计1对特异性引物用于VP7基因扩增,扩增产物大小为967 bp。将25份阳性样本进行测序并与参考序列构建遗传进化树,同时进行同源性分析。结果显示测序序列G4型9株,G5型7株,G9型7株,G26型2株,25份序列之间核苷酸同源性为74.8%～100%,推导氨基酸同源性71.2%～100%,相同基因型核苷酸同源性为90.3%～100%,推导氨基酸同源性为90.5%～100%,相同基因型之间保守。相同基因型之间序列与参考毒株进行对比发现核苷酸变异位点多,但推导的氨基酸之间相对保守。

关键词：猪轮状病毒 sybr greenⅱ 流行病学 VP7

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

牛肝菌对动物肠道微生物的影响

引用

食品工业 2023年第7期44卷 159-162页

作者：刘晓雪奚楚瑜李文杰张苒娇田洋宋爽云南农业大学食品科学技术学院昆明650201 国家辣木加工技术研发专业中心昆明650201 云南省生物大数据重点实验室昆明650201

通过灌胃牛肝菌溶液并与益生元和生理盐水形成阳性对照和阴性对照,收集3组小鼠的粪便从中提取DNA,并根据细菌的16S rRNA基因序列设计双歧杆菌属、乳酸杆菌属的特异性引物。结果表明,通过荧光定量扩增图得出CT值:阳性对照组<试验组<空白... 详细信息

通过灌胃牛肝菌溶液并与益生元和生理盐水形成阳性对照和阴性对照,收集3组小鼠的粪便从中提取DNA,并根据细菌的16S rRNA基因序列设计双歧杆菌属、乳酸杆菌属的特异性引物。结果表明,通过荧光定量扩增图得出CT值:阳性对照组<试验组<空白对照组,阳性对照组的对数转换后的拷贝数值高于其余2组且空白组的对数转换后的拷贝数最低。试验结果说明在食用一定量牛肝菌后肠道中的乳酸杆菌属和双歧杆菌属有一定促进作用,能够刺激二者的生长繁殖,使得肠道中乳酸杆菌和双歧杆菌数量增加。

关键词：牛肝菌益生元双歧杆菌乳酸杆菌 sybr greenⅱ

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于Real-time PCR及ARMS技术鉴定铁皮石斛药材

基于Real-time PCR及ARMS技术鉴定铁皮石斛药材

引用

多学科交叉，产学研联合，实现西部药用植物资源的可持续利用——第十届全国药用植物及植物药学术研讨会

作者：徐慧君丁小余南京师范大学生命科学学院

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是我国兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)的珍稀濒危特有种,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、抗癌防老等功效,应用历史悠久。以其茎加工而成的名贵中药材"铁皮枫斗"价格昂贵,... 详细信息

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是我国兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)的珍稀濒危特有种,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、抗癌防老等功效,应用历史悠久。以其茎加工而成的名贵中药材"铁皮枫斗"价格昂贵,近年来铁皮枫斗商品市场鱼龙混杂,以假乱真、以次充好的现象屡现。我们通过实时定量PCR技术与突变扩增阻滞体系(amplification refractory mutation system,ARMS)相结合的实验手段建立了一种快速而精准的传统中药材鉴定方法。这一方法能有效的

关键词：枫斗荧光定量PCR sybr greenⅱ ARMS 鉴定

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：