SYBR GreenⅡ实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼细胞色素CYP1A mRNA方法的建立
作者单位：中国水产科学研究院珠江水产研究所
会议名称：《第九届中国实验动物科学年会（2010新疆）》
会议日期：2010年
学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种]
关 键 词：剑尾鱼 CYPlA 实时荧光定量PCR SYBR GreenⅡ
摘 要：根据剑尾鱼CYP1A和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从浸泡诱导后的剑尾鱼肝脏中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒10倍梯度稀释,采用SY BR GreenⅡ染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明,构建的剑尾鱼CYP1A和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为10-26,12-26,扩增效率分别为100.53%,98.40%;建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数R均在0.99以上,融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.79℃,83.86℃,表明扩增产物特异性非常好,组内变异系数为0.15%～0.83%,组间变异系数为0.86%～1.66%。本实验建立的剑尾鱼CYP基因实时荧光定量PCR方法具有检测范围广、扩增效率高、特异性好、重复性和稳定性良好等特点,可用于对剑尾鱼CYP基因的转录水平进行测定。