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PBDE-209对卵巢癌及仓鼠卵巢上皮细胞体外增殖的影响

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PBDE-209对卵巢癌及仓鼠卵巢上皮细胞体外增殖的影响

作者：刘晓燕广州医学院

学位级别：硕士

多溴联苯醚(Polybrominated Diphenyl Ethers,PBDEs)是一类含溴原子的芳香族化学物,常作为阻燃剂加到油漆、塑料、纺织、电子电器等产品中,目前已广泛应用于电子、电脑和泡沫等家具中。随着工业的发展,PBDEs在世界范围的需求不断增加,... 详细信息

多溴联苯醚(Polybrominated Diphenyl Ethers,PBDEs)是一类含溴原子的芳香族化学物,常作为阻燃剂加到油漆、塑料、纺织、电子电器等产品中,目前已广泛应用于电子、电脑和泡沫等家具中。随着工业的发展,PBDEs在世界范围的需求不断增加,环境中的PBDEs的浓度也逐年增多。有资料显示,发达国家80%的电子垃圾进入中国、印度和巴基斯坦等国,其中中国占了90 %,导致城市的户外空气中PBDEs浓度比农村空气中的10倍还多,在我国一些地区已形成了电子垃圾拆解集散地,原始的拆解手段(露天焚烧、烘烤和酸洗等)使PBDEs等持久性有毒污染物不断向周围释放,严重污染了当地环境,危害人体健康。由于PBDEs具有难降解性、环境稳定性、高脂溶性和生物放大作用,能够通过食物链的转移,使生物受到毒害,最终导致对人体健康的危害。目前国内外对低溴联苯醚的相关毒性研究较多,而且结果较肯定,从大量动物实验中发现低溴类PBDEs具有肝肾毒性、生殖毒性、甲状腺毒性、神经发育毒性及潜在的致癌性等,因此,在欧盟及美国已禁止使用。而十溴联苯醚(decabrominated PBDE, PBDE-209或DeBDE)的毒性较低溴联苯醚类低,在美国及欧洲仍允许生产使用。我国不但是PBDEs的生产、使用和出口大国,而且还是接收电子垃圾的大国,其中PBDE-209的生产使用量最大,因此PBDE-209已成为我国重要的环境污染物。PBDE-209在环境中可以经光解、高温分解、生物及微生物降解等过程,转化成溴二苯并二噁英、多溴二苯并呋喃及低溴代的联苯醚,更容易进入生物体,引起更强的毒性作用。但是,关于PBDE-209对机体是否存在危害仍有很多争议,研究证明PBDE-209具有神经发育毒性,免疫毒性,内分泌毒性以及致癌性;动物试验证实PBDE-209有胎毒性,在孕期接触PBDE-209,能使雄性子鼠的生殖功能受损。近年来卵巢癌发病率呈持续上升趋势,是女性死亡率最高的生殖系统恶性肿瘤。目前卵巢癌病因尚未明确,但遗传因素和环境因素交互作用对卵巢癌的影响已引起人们的关注。PBDE-209可影响女性生殖系统及内分泌水平(激素),而环境中日益增高的PBDE-209浓度与女性生殖系统肿瘤发病率的升高目前并无相关的报道。因此,本课题从细胞水平出发,深入研究PBDE-209对体外培养的卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞和中国仓鼠卵巢上皮细胞株CHO细胞增殖的影响,观察低浓度PBDE-209暴露对癌细胞的增殖以及对细胞周期的影响,并初步探讨在这一过程中信号转导通路pkcα-ERK的磷酸化变化。第一部分PBDE-209对卵巢癌细胞和仓鼠卵巢上皮细胞体外增殖的影响【目的】观察低浓度PBDE-209暴露引起OVCAR-3和CHO细胞形态学改变;MTT法检测细胞生物活性的变化;免疫荧光化学检测增殖细胞核抗原Ki67的表达变化;并用流式细胞术检测PBDE-209引起的细胞周期的分布变化。【实验方法】 (1)贴壁培养OVCAR-3和CHO细胞,连续计数接种后0-7天的细胞数,描绘三种细胞株的细胞生长曲线,并计算细胞群体倍增时间。 (2)取复苏后2-3代OVCAR-3和CHO细胞为实验细胞,饥饿同步化处理后,加入不同浓度PBDE-209作用不同时间(0-72h),观察细胞生长形态变化;并用MTT法测定细胞吸光度值,计算细胞增殖率变化。 (3)用免疫荧光化学方法,观察不同浓度PBDE-209作用于OVCAR-3和CHO细胞72h后Ki67的表达变化。 (4)用流式细胞术检测不同浓度PBDE-209作用于OVCAR-3和CHO细胞72h后,细胞周期分布变化。【结果】 (1)卵巢癌细胞株和仓鼠卵巢上皮细胞株在生长形态和特点上完全不同:OVCAR-3细胞胞体接近椭圆形且形态不规则,呈集落样生长,接触性抑制较差,细胞群体倍增时间是36.74±1.29 h;而CHO细胞胞体呈梭形,亦呈集落样生长,耐饥饿能力差,细胞群体倍增时间是40.56±1.25h。 (2)随着PBDE-209作用时间的延长以及浓度的升高,细胞增殖明显,细胞间隙变小。MTT检测发现,PBDE-209引起两种细胞株细胞增殖率变化呈现时间依赖和浓度依赖效应。50nM作用于OVCAR-3细胞24h即可以引起细胞的增殖;作用48h时使细胞增殖率增加1.53倍;而72h的暴露可以引起细胞1.75倍的增殖变化。而CHO细胞对PBDE-209的反应相对较轻,100nM PBDE-209作用48h和72h时细胞增殖率分别为1.47倍和1.51倍,弱于OVCAR-3细胞。 (3)免疫荧光化学观察发现0-100nM PBDE-209作用72h时,可以引起Ki67阳性细胞百分率变化呈现浓度依赖效应。25nM、50nM和100nM PBDE-20

关键词： OVCAR-3细胞 CHO细胞 PBDE-209 增殖 pkcα ERK G(?)6976 PD98059

棕榈酸调节牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的分子机理

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棕榈酸调节牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的分子机理

作者：金心东北农业大学

学位级别：硕士

奶牛的奶产量主要取决于乳合成能力和牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)增殖的能力,而乳脂肪是评估牛奶质量的重要指标。在生命科学领域,探究乳脂肪合成的分子机制是一个重要的科学问题。脂肪酸(fatty acids,FAs)... 详细信息

奶牛的奶产量主要取决于乳合成能力和牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)增殖的能力,而乳脂肪是评估牛奶质量的重要指标。在生命科学领域,探究乳脂肪合成的分子机制是一个重要的科学问题。脂肪酸(fatty acids,FAs)既是提供能量的物质,也是生物膜组成的一部分,而且还能经转录因子活化和细胞膜受体信号的途径从而调控基因的表达。脂肪酸可以通过刺激脂肪生成基因的表达来促进乳腺中乳脂的合成。棕榈酸(palm acid,PA)是脂肪合成的主要底物之一,因此可以推测在乳脂肪合成过程中,棕榈酸既可作为乳脂前体物,也可作为影响乳脂肪合成的信号分子。作为外源信号,棕榈酸可以通过激活磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)来调控细胞代谢。实验室前期研究结果表明,PA参与调节BMECs乳脂合成,但具体机制有待进一步探索。G蛋白偶联受体C家族6组A(G protein-coupled receptor class C group 6 member A,GPRC6A)是近年来新发现的一种G蛋白偶联受体,可与多种配体结合,已有研究发现,GPRC6A参与BMECs乳合成,但具体机制有待进一步探索。本实验的研究对象为通过组织块法培养的BMECs,通过免疫荧光和Western blotting观察BMECs中角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)的表达,从而证明已获得纯化并且生长状态良好的可进行体外培养的BMECs。向在体外进行培养的BMECs中添加0、50、100、150和200μM的PA,通过BODIPY染色以及甘油三酯(triglyceride,TG)试剂盒进行检测,结果表明随着PA浓度的增加,BMECs中脂滴及TG含量逐渐增加;通过Western blotting的方法检测相关蛋白的表达,在PA浓度为100μM时,对乳脂合成以及固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)的表达和成熟具有最佳刺激作用,同时p-pkcα的蛋白水平也显著增加,随后下降。以上结果说明PA通过剂量依赖性的方式促进乳脂合成;添加100μM的PA为最适浓度,过量的PA可能具有细胞毒性。为研究PA调节SREBP-1c表达和成熟的分子机理,添加PA同时添加PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K信号通路。Western blotting检测发现,抑制PI3K几乎完全阻断了PA对SREBP-1c表达的刺激。PI3K抑制实验表明,PI3K是PA诱导SREBP-1c表达的关键介导分子。添加100μM的PA同时抑制蛋白激酶Cα(pkcα),通过Western blotting检测表明,pkcα敲低仅部分降低了PA对SREBP-1c表达的刺激,但消除了PA对SREBP-1c成熟的刺激作用,同时部分降低了PA对PI3K激活的刺激。pkcα抑制实验表明,pkcα和PI3K可能具有不同的信号调节机理。添加100μM的PA同时抑制GPR120和GPRC6A,通过Western blotting检测表明,PA不影响GPR120的表达,并且敲低GPR120不会改变PA对SREBP-1c信号的刺激。GPRC6A基因敲低显著降低了PI3K和pkcα的磷酸化以及SREBP-1c的表达和成熟。GPRC6A抑制实验表明,GPRC6A是PA对PI3K/pkcα-SREBP-1c信号传导刺激的关键介导分子。Western blotting检测发现,添加100μM PA后,BMECs中GPRC6A的蛋白质水平显著增加。免疫荧光检测发现GPRC6A荧光信号形成一个薄而圆形的结构,表明GPRC6A位于BMECs的质膜上。免疫荧光检测发现100μM的PA处理显著增加GPRC6A的细胞膜定位。结果证明PA以剂量依赖的方式促进GPRC6A表达和质膜定位,提示PA可能是GPRC6A的一种新的激活因子。以上结果表明,PA剂量依赖性调节GPRC6A表达定位、pkcα活化和SREBP-1c蛋白表达及成熟,过量的PA可能具有细胞毒性。PA通过GPRC6A-PI3K/pkcα信号传导途径促进BMECs的乳脂合成。本研究工作为进一步利用PA提高乳脂肪合成提供了理论与实验依据。

关键词： GPRC6A 乳脂棕榈酸 PI3K pkcα SREBP-1c

二氯醋酸二异丙胺，吡格列酮及肾上腺髓质素对内皮细胞功能影响的体外研究

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二氯醋酸二异丙胺，吡格列酮及肾上腺髓质素对内皮细胞功能影响的...

作者：万沁四川大学

学位级别：硕士

目的 1.探讨二氯醋酸二异丙胺(DIPA),吡格列酮(PIO)及肾上腺髓质素(AM)对内皮细胞(EC)功能指标细胞凋亡率,上清液一氧化氮(NO)浓度及可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平的影响;2.观察DIPA,PIO及AM对EC蛋白激酶C(pkc)亚型pkcα、pkcδ... 详细信息

目的 1.探讨二氯醋酸二异丙胺(DIPA),吡格列酮(PIO)及肾上腺髓质素(AM)对内皮细胞(EC)功能指标细胞凋亡率,上清液一氧化氮(NO)浓度及可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平的影响;2.观察DIPA,PIO及AM对EC蛋白激酶C(pkc)亚型pkcα、pkcδ的表达的影响,了解其可能的作用机理。方法以体外原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,对DIPA,PIO及AM进行了以下方面的研究:1.对高糖诱导的血管EC功能紊乱的影响:(1)流式细胞仪检测EC凋亡峰;(2)硝酸还原酶法测定上清液NO浓度;(3)双抗体夹心ABC-ELISA法测定上清液中sICAM-1水平;2.对pkc亚型pkcα、pkcδ表达的影响:(1)用激光共聚焦显微镜观察在高糖作用及药物干预下HUVECs胞内pkcα、pkcδ表达变化,以探讨pkcα、pkcδ的位置变化在影响EC功能中的作用;(2)运用Western Blotting杂交技术观察高糖作用及药物干预后的HUVECs中pkcα、pkcδ蛋白水平的变化,以定量探讨pkcα、pkcδ在影响EC功能中的作用;3.用改进的DPN诱导分析法检测DIPA对HUVECs中丙酮酸脱氢酶(PDH)活性的影响。实验分组:(1)正常对照组;(2)高浓度葡萄糖培养组:加入葡萄糖浓度为30mM:

关键词：二氯醋酸二异丙胺(甘乐,DIPA) 吡格列酮(PIO) 肾上腺髓质素(AM) 内皮细胞功能蛋白激酶C(pkc) pkcα pkcδ

祛风化痰解毒方及其拆方调节食管癌EC9706细胞PLC-γ1-PI3K信号转导的研究

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祛风化痰解毒方及其拆方调节食管癌EC9706细胞PLC-γ1-PI3K信号转...

作者：陈瑞河南中医学院

学位级别：硕士

目的：通过观察不同制备方法所得的祛风化痰解毒方及其拆方：祛风方、化痰方、解毒方对人食管癌细胞EC9706增殖的抑制、细胞周期及蛋白PLCγ1、pkcα、PI3K的影响，研究活血、解毒、化痰的方法治疗食管癌的机理，寻求有效的的药物制备... 详细信息

目的：通过观察不同制备方法所得的祛风化痰解毒方及其拆方：祛风方、化痰方、解毒方对人食管癌细胞EC9706增殖的抑制、细胞周期及蛋白PLCγ1、pkcα、PI3K的影响，研究活血、解毒、化痰的方法治疗食管癌的机理，寻求有效的的药物制备方法，探讨“风邪、痰、毒”与食管癌发生的分子生物学机制。方法：备选中药分别采用采用醇提法和水煮醇沉的方法制备药物，用MTT法筛选出各药物及不同的制备方法对人食管癌细胞EC9706抑制的影响，选出抑制率较高且出膏率高的药物，根据《中药学》药物功效初步分为祛风方、化痰方、解毒方;运用正交实验设计选出最佳的药物组合;分别用祛风方、化痰方、解毒方及祛风化痰解毒合方作用于细胞EC9706，在倒置显微镜下观察各组对其生长状态和增殖的影响;采用流式细胞术检测各组药物对细胞生长周期的作用及影响;用Wertern blot测试活血方、解毒方、化痰方及合方组对食管癌细胞EC9706中PLCγ1、pkcα、PI3K蛋白表达的影响。结果：①备选药物中出膏率较高且利用MTT法检测出对人食管癌细胞EC9706抑制作用明显且药效明显的有水煮醇沉法制备的常山、蟾皮，醇提法制备的蝉蜕、土荆皮、皂角、斑蝥，出膏率依次为蟾皮＞皂角＞斑蝥＞土荆皮＞常山＞蝉蜕，抑制作用大小排列依次为常山皂角＞常山＞蟾皮＞斑蝥＞蝉蜕＞土荆皮。②依据药物筛选结果和药物功效，对药物初步拟定为祛风方、化痰方、解毒方，根据正交实验设计得出最佳组合的祛风化痰解毒全方。③祛风化痰解毒方及其拆方干预人食管癌细胞EC9706，在倒置显微镜下观察可见各组药物对细胞的形态改变明显;各组药物不同的剂量和作用时间对细胞的抑制作用不同，存在剂量依赖性和时间效应关系，抑制作用大小依次为化痰解毒活血方＞化痰方＞解毒方＞祛风方。④各治法组G0/G1期细胞比率均有所下降，祛风组下降显著;各药物组的S期细胞比率均有下降，其中祛风组和解毒下降比率较大;各药物组G2/M期细胞比率升高，其中祛风组G2/M期细胞比率升高显著，⑤用Wertern blot可以检测到人食管癌细胞EC9706中PLCγ1、pkcα、PI3K蛋白呈高表达状态，使用祛风方、化痰方、解毒方、全方干预细胞，发现各方对高表达蛋白有不同程度的抑制作用，其中全方效果最为显著，化痰方次之，解毒方较低。结论：①祛风化痰解毒方及其拆方能显著地抑制食管癌细胞的增殖，祛风、化痰、解毒药物相互配伍可以协同并增强抑制食管癌细胞的增殖。②化痰组和全方组将细胞阻滞在G1/G0期，解毒组和祛风组将细胞阻滞在G2/M是抑制食管癌细胞增殖的重要因素。③调节食管癌中PLCγ1、pkcα、PI3K蛋白的表达状态是祛风化痰解毒方及其拆方抑制食管癌细胞增殖的关键机制。④从祛风化痰解毒方及其拆方的药物作用效果可以推测，在食管癌病变发生机制中，“风邪、痰、毒、”与PLCγ1、pkcα、PI3K蛋白的高表达状态关系密切。

关键词：食管癌 EC9706细胞祛风化痰解毒 PLCγ1 pkcα PI3K

清热燥湿解毒活血方及其拆方调节人结肠癌细胞RKO PLCγ1介导的信号传导研究

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清热燥湿解毒活血方及其拆方调节人结肠癌细胞RKO PLCγ1介导的信...

作者：韩颖河南中医学院

学位级别：硕士

目的:从临床治疗结肠癌常用的中药中筛选出抑制人结肠癌细胞生长的有效中药组成方剂,观察该方对结肠癌细胞的抑制作用,探讨清热燥湿解毒活血方及其拆方对结肠癌的作用机制和中医病机,为结肠癌治疗提供有效的中医方剂。方法:对1979年6月... 详细信息

目的:从临床治疗结肠癌常用的中药中筛选出抑制人结肠癌细胞生长的有效中药组成方剂,观察该方对结肠癌细胞的抑制作用,探讨清热燥湿解毒活血方及其拆方对结肠癌的作用机制和中医病机,为结肠癌治疗提供有效的中医方剂。方法:对1979年6月014年3月中国期刊数据库(CNKI)收录的中医诊治结肠癌的文献,通过频度分析总结出250味中药作为初筛的具体药物,用95%乙醇浸泡一周,第7天开始制备中药醇提物,以100μg/ml药物浓度处理人结肠癌RKO细胞,倒置显微镜下观察结肠癌细胞RKO的形态学变化,48小时后,运用MTT比色法筛选出对结肠癌RKO细胞有明显抑制作用的药物,用正交实验设计选出最佳组合药物并组成有效方剂,流式细胞术观察该方及其拆方对RKO细胞周期的作用,并用Western blot方法分析该方及其拆方对RKO细胞PLCγ1介导的信号蛋白表达的影响,探讨结肠癌发生的中医病机与RKO生长信号转导的关系,寻找治疗结肠癌的有效方药。结果:1清热燥湿解毒活血方及拆方对结肠癌细胞RKO的生长有明显抑制作用,与空白对照组比较,各治法组对细胞形态均有较大影响。清热解毒组细胞明显变小,增殖速度缓慢,细胞数目减少,排列稀疏。清热燥湿组细胞形态变小,数目减少。行气活血组细胞形态呈长梭形,数目有所减少。全方组细胞形态变小,细胞间质增大,数目减少显著。2清热燥湿解毒活血方及其拆方均能有效抑制细胞RKO的生长,全方组抑制作用最强,抑制率随药物浓度、时间的增加而增高,对细胞生长的抑制呈现剂量-效应和时间-效应的依赖关系。3.清热燥湿解毒活血方及其拆方对RKO细胞周期有明显的影响,G1期数值持续增高,S期无明显数值的变化,G2期数值降低。说明清热燥湿解毒活血方及其拆方将细胞RKO阻滞于G2期,从而起到抑制细胞生长的作用。4人结肠癌细胞RKO可检测到EGFR、PLCγ1、pkcα蛋白分子不同程度的超量表达。5用IC50药物浓度作用细胞时,清热解毒燥湿活血方及拆方能有效的抑制EGFR、PLCγ1、pkcα信号通路各个蛋白表达水平。结论:1清热燥湿解毒活血方及其拆方对人结肠癌RKO的生长均有抑制作用,全方组效果最好,清热解毒、清热燥湿、行气活血几法具有协同效应。2清热燥湿解毒活血方对人结肠癌RKO的抑制具有剂量和时间依赖性作用。3清热燥湿解毒活血方及其拆方将细胞RKO阻滞于G2期,从而起到抑制细胞生长的作用。3通过药效反证,证实在结肠癌病变中,湿热、热毒、气滞、血瘀与EGFR、PLCγ1、pkcα信号表达和转导增强关系密切。4通过文献分析和实验研究结果表明:结肠肿瘤性疾病存在湿热、热毒、气滞、血瘀病机。

关键词：结肠癌清热燥湿解毒活血方信号传导 EGFR PLCγ1 pkcα

理气活血清热方及各拆方抑制人胃腺癌细胞BGC823 PDGFRβ-PLC-γ1信号转导的研究

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理气活血清热方及各拆方抑制人胃腺癌细胞BGC823 PDGFRβ-PLC-γ1...

作者：秦秀德河南中医学院

学位级别：硕士

目的:通过观察理气活血清热方(W)及各拆方(黄连Q,木香、八月札L,当归、水红花子H,黄连,木香、八月札QL,黄连、当归、水红花子QH,木香、八月札、当归、水红花子LH)对胃腺癌细胞BGC823增殖抑制和PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号转导通路的影响... 详细信息

目的:通过观察理气活血清热方(W)及各拆方(黄连Q,木香、八月札L,当归、水红花子H,黄连,木香、八月札QL,黄连、当归、水红花子QH,木香、八月札、当归、水红花子LH)对胃腺癌细胞BGC823增殖抑制和PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号转导通路的影响,研究清热、理气、活血法治疗胃腺癌的机理,探讨热毒、气滞及瘀血与胃腺癌病变和PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号转导的关系。方法:采用人胃腺癌细胞BGC823为实验对象,用倒置显微镜观察细胞生长情况,并计算细胞抑制率,筛选出有效的药物;用正交试验优选出疗效最好的方剂;设对照组和用清热理气活血全方及其六个拆方处理细胞,在倒置显微镜下观察BGC823细胞生长及形态改变,用Westernblot检测BGC823细胞PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号转导通路各蛋白表达的影响。结果:①理气活血清热方及各拆方对BGC823细胞增殖明显抑制,对细胞形态作用明显不同,清热组细胞可见细胞皱缩,透光度减小,形态不规则,细胞间基质呈现丝网状,贴壁性变差;理气组细胞表面逐渐粗糙,继而胞质内充满多量颗粒状物质,然后出现空泡样变化;活血组细胞疏松,呈团状,细胞间隙加大,胞质粗糙;全方组及其它拆方组细胞形态与清热组、活血组相似,培养基中可见有较多的细胞碎片。②清热理气活血全方及各拆方均能抑制BGC823细胞生长,全方作用最强,随药物浓度的增加,对细胞生长抑制呈现剂量—效应依赖关系。③人胃腺癌BGC823细胞可检测到PDGFRβ、PLC-γ1、pkcα蛋白分子的过度表达。④当用IC50药物剂量处理细胞时,理气活血清热全方及各拆方均能抑制PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号通路各蛋白表达水平,其作用强弱依次为W>LH>QH>QL>H>L>Q。结论:①清热理气活血全方及各拆方均能明显抑制人胃腺癌细胞BGC823的生长,全方组效果最好,理气、活血、清热三法联用具有协同作用。②胃腺癌发病和PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα转导通路信号增强密切相关。③清热理气活血全方及各拆方均能下调BGC823细胞PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号通路各蛋白表达水平,理气、活血、清热及合方抑制胃腺癌细胞增殖与抑制PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号转导相关。④通过药效反证,在胃腺癌病变中,热毒、气滞、瘀血与PDGFRβ-PLC-γ1-pkcα信号表达和转导增强密切相关。⑤理气活血清热是治疗胃癌的重要方法。

关键词：人胃腺癌 BGC823细胞理气活血清热方 PDGFRβ PLC-γ1 pkcα 信号转导

鼠冠状病毒核衣壳蛋白电荷非均一性与其磷酸化的相关性

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微生物与感染 2019年第5期14卷 267-276页

作者：文荣王玉燕叶荣复旦大学上海医学院基础医学院教育部卫健委医科院医学分子病毒学重点实验室病原生物学系

核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现... 详细信息

核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现MHV-A59感染鼠neuro-2a细胞后期表达的N蛋白呈现明显的电荷不均一性,其中只有小部分发生磷酸化并被装配至病毒颗粒中;等电聚焦电泳显示N蛋白的电荷呈连续分布。用蛋白脂酰化抑制剂2-溴棕榈酸(2-BP)和蛋白酶体抑制剂MG-132处理后显示病毒复制水平不但与N蛋白电负性相关,而且与细胞的pkcαS657磷酸化和内质网蛋白水平相关。结果提示磷酸化修饰与鼠冠状病毒N蛋白电荷不均一性及稳定性密切相关。

关键词：鼠冠状病毒核衣壳蛋白电负性 pkcα 磷酸化

蛋白激酶Cα、βⅡ、ε、ζ在结肠癌组织中的表达及意义

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中国肛肠病杂志 2010年第8期30卷 9-12页

作者：范桂莲唐建武黑龙江省大庆油田总医院病理科黑龙江大庆163001 大连医科大学病理教研室辽宁大连116027

为探讨蛋白激酶C（proteinkinaseC，pkc）α、βⅡ、ε、ζ在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌发生、发展及转移的关系，采用免疫组织化学SP法检测64例原发性结肠癌（其中管状腺癌52例，包括高分化腺癌9例，中分化腺癌28例，低分化腺癌1... 详细信息

为探讨蛋白激酶C（proteinkinaseC，pkc）α、βⅡ、ε、ζ在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌发生、发展及转移的关系，采用免疫组织化学SP法检测64例原发性结肠癌（其中管状腺癌52例，包括高分化腺癌9例，中分化腺癌28例，低分化腺癌15例；黏液腺癌12例）及其淋巴结转移灶中pkcα、βⅡ、ε、ζ的表达情况。结果显示，pkcα、βⅡ在管状腺癌组织中的阳性表达率均高于黏液腺癌，P〈0．05；而pkcε在管状腺癌组织中的阳性表达率低于黏液腺癌，P〈0．05。在结肠癌淋巴结转移灶中pkcα的阳性表达率明显低于原发灶，P〈0．05。pkcε在管状腺癌高分化组的阳性表达率明显低于低分化组，P〈0．05，在各个肿瘤类型中，pkcζ的阳性率均较高，在90．0％以上。结果表明，pkcα、βⅡ、ε表达可能与结肠癌病理类型有关，而pkcε在黏液腺癌组织中的高表达可能与黏液分泌有关；pkcα可能在结肠癌的浸润、转移中起重要作用；pkcε高表达可能与结肠癌分化程度有关，pkcζ的阳性率较高，可能与肿瘤细胞的增殖或凋亡有关。

关键词：结肠肿瘤 pkcα pkcβⅡ pkcε pkcζ 免疫组织化学

星形孢菌素通过PI3K/Akt信号途径影响人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的研究

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临床和实验医学杂志 2018年第1期17卷 47-50页

作者：赵林刘四清汪强四川绵阳四〇四医院妇产科四川绵阳621000

目的探讨蛋白激酶C(pkc)抑制剂星形孢菌素(STS)对人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的影响,并初步探讨其信号机制。方法培养人宫颈癌细胞Hela细胞株,建立STS组与空白对照组。采用MTT法观察各组细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,以Real-... 详细信息

目的探讨蛋白激酶C(pkc)抑制剂星形孢菌素(STS)对人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的影响,并初步探讨其信号机制。方法培养人宫颈癌细胞Hela细胞株,建立STS组与空白对照组。采用MTT法观察各组细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,以Real-time PCR与Western Blot检测细胞pkcα、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)在mRNA水平与蛋白水平表达量以及对PI3K磷酸化的作用。结果 MTT实验中,0.5μmol/L STS组24 h后吸光度A值显著低于空白对照组,而增殖抑制率显著高于空白对照组(Ppkcα、PI3K、Akt mRNA表达量分别为空白对照组的43.4%、65.8%、55.6%,差异有统计学意义(Ppkcα、PI3K、Akt、P-PI3K蛋白表达量为空白对照组的34.7%、38.8%、80.6%,75.3%,差异有统计学意义(Ppkcα的表达后抑制了下游PI3K/Akt信号的激活有关。

关键词：宫颈癌星形孢菌素增殖侵袭 Hela pkcα PI3K Akt