补中益气汤对洛哌丁胺大鼠便秘模型小肠动力影响的机制研究

作     者：冯沛之 

作者单位：上海中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：都广礼

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：补中益气汤 洛哌丁胺 便秘 小肠动力 平滑肌 PKCα MLC20 P-MLC20 NO 

摘      要：目的:通过观察补中益气汤对洛哌丁胺大鼠便秘模型小肠动力的影响,验证补中益气汤改善便秘的作用;并通过观察补中益气汤对洛哌丁胺大鼠便秘模型血清NO含量的影响,对小肠黏膜形态学的影响以及对小肠组织中MLC20、P-MLC20、PKCα蛋白含量的影响,探讨补中益气汤改善洛哌丁胺大鼠便秘模型小肠动力的作用机制。方法:1、30只SD大鼠依据体重随机区组法分为正常组、模型组、补中益气汤组。模型组与补中益气汤组均采用皮下注射洛哌丁胺（2 mg/kg,bid）复制便秘模型;正常组皮下等体积注射洛哌丁胺溶媒。造模第三天开始治疗组灌胃补中益气汤水煎液（1.23 mg/kg,qd）,连续五天;正常组与模型组等体积灌胃纯净水。期间自由进食饮水。2、处理动物前禁食不禁水过夜,末次给药1小时后,用碳末混悬液灌胃。20分钟后进行腹主动脉取血并收集;快速分离小肠组织,测定小肠推进率;收集小肠组织3份,1份置4%多聚甲醛固定,2份-80℃冻存待用。3、生化法检测各组大鼠血清NO含量。4、处理动物时观察各组大鼠胃肠部位有无明显的溃疡、水肿、充血、胀气以及胃肠颜色的异常;HE病理染色,显微镜下观察各组大鼠小肠形态学的变化。5、Western Blot检测各组大鼠小肠组织中MLC20、P-MLC20、PKCα蛋白含量情况。结果:1、各组大鼠小肠推进率变化:与正常组相比,模型组大鼠的小肠推进率明显下降（p0.01）;与模型组相比,补中益气汤组大鼠的小肠推进率明显上升（p0.01）。2、各组大鼠血清NO含量变化:与正常组相比,模型组大鼠血清NO含量没有明显的变化（p0.05）;与模型组相比,补中益气汤组大鼠血清NO含量没有明显的变化（p0.05）。3、各组大鼠胃肠形态变化:各组大鼠胃肠部位均未见明显溃疡、水肿、充血;模型组大鼠存在明显的胃肠胀气,且胃肠颜色较深;正常组与补中益气汤组未见明显的胃肠胀气,胃肠颜色较浅。HE染色显示模型组大鼠小肠绒毛腔内存在大量的炎性细胞浸润,绒毛上皮细胞残缺;正常组与补中益气汤组小肠绒毛腔内未见明显的炎性细胞浸润,绒毛上皮细胞完整。4、各组大鼠小肠组织中MLC20、P-MLC20蛋白含量的变化:与正常组相比,模型组大鼠小肠组织P-MLC20蛋白的含量明显降低（p0.01）,MLC20蛋白没有明显的变化（p0.05）,MLC20蛋白的磷酸化程度降低（p0.01）;与模型组相比,补中益气汤组大鼠小肠组织P-MLC20蛋白的含量明显上升（p0.01）,MLC20蛋白没有明显的变化（p0.05）,MLC20蛋白的磷酸化程度升高（p0.01）。5、各组大鼠小肠组织中PKCα蛋白含量的变化:与正常组相比,模型组大鼠小肠组织PKCα蛋白的含量明显降低（p0.01）;与模型组相比,补中益气汤组大鼠小肠组织PKCα蛋白的含量明显上升（p0.01）。结论:1、洛哌丁胺诱导的大鼠便秘模型表现为小肠推进率明显下降;小肠绒毛腔内炎性细胞浸润,绒毛上皮细胞缺失;小肠组织MLC20蛋白磷酸化程度的降低与PKCα蛋白的低表达。2、补中益气汤对洛哌丁胺大鼠便秘模型小肠动力具有显著的促进作用,其作用机制如下:（1）抑制小肠绒毛腔内炎性细胞浸润、保护绒毛上皮细胞完整性;（2）促进小肠组织中MLC20的磷酸化,以增强平滑肌的收缩作用;（3）上调小肠组织中PKCα蛋白的表达,增强PKC信号通路的信号转导,促进平滑肌收缩。3、直接作用于小肠平滑肌细胞,上调小肠平滑肌细胞收缩信号通路中关键的信号分子可能是补中益气汤改善洛哌丁胺大鼠便秘模型小肠动力的作用机制之一。