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k亚群禽白血病病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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病毒学报 2018年第2期34卷 224-231页

作者：陈轩赵海燕杨素曹伟胜黄海超邵建宏赵福振沙才华廖秀云珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东珠海519000 华南农业大学兽医学院广州510642 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

根据GenBank数据库k亚群禽白血病病毒（Subgroup k avian leukosis virus,ALV-k）特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-k特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-k的实时荧光RT-PCR检测方法... 详细信息

根据GenBank数据库k亚群禽白血病病毒（Subgroup k avian leukosis virus,ALV-k）特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-k特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-k的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果显示,本方法能对ALV-k进行特异性扩增,而对A亚群、B亚群、J亚群、E亚群禽白血病毒和新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、禽网状内皮组织增生病病毒（REV）、禽流感病毒（AIV）等禽病病原未见扩增。该方法最低能够检测到3.4×101拷贝数/μL的阳性质粒,灵敏度是RT-PCR的100倍。应用本方法对人工攻毒ALV-k的SPF鸡各脏器进行病毒定量分析,结果显示,在攻毒鸡体内心、肝、脾、肺、肾等脏器中均能检测到ALV-k,且肝、肾和脾中的病毒含量显著高于心和肺（P〈0.01）。

关键词：禽白血病病毒(ALV-k) k亚群实时荧光RT-PCR 检测方法应用

6株k亚群禽白血病病毒分离株的全基因组测序及遗传进化分析

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中国动物传染病学报 2023年第6期31卷 116-126页

作者：游广炬阿热阿依·海依拉提李炜李晓齐高丽曹红王永强郑世军中国农业大学动物医学院公共卫生安全全国重点实验室北京100193

为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C... 详细信息

为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C型逆转录病毒,缺乏病毒致癌基因,分离株DT190901基因组全长为7473 bp;DT190902和DT190905为7467 bp;DT190903和DT190906为7481 bp;DT190904为7493 bp,分离株间基因组序列同源性较高(98.6%~99.9%)。对6个ALV分离株与其他ALV毒株进行序列比较和遗传进化分析,结果表明,分离株的LTR、gag、pol及gp37基因与内源性ALV相比具有较高同源性(>93.8%),gp85基因与ALV-k一致性较高(>95.4%),属于新型ALV亚群(k亚群)遗传分支。分离株的LTR序列与内源性ALV相似,比其他外源性ALV亚群缺少一个CAAT Box、PRE Box、Y Box及CArG Box等转录调控元件。结果表明这6个分离株属于ALV-k亚群,为ALV-k与内源性ALV的重组毒株,其LTR序列与内源性ALV接近可能导致其复制能力及致病性降低。遗传进化分析表明,ALV-k已经在我国局部流行,并出现基因重组和突变毒株,应该引起重视并改进净化防控措施控制ALV-k流行。

关键词：禽白血病病毒 k亚群重组毒株全基因组测序遗传进化分析

禽白血病病毒k亚群RT-LAMP检测方法的建立

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中国兽医科学 2018年第2期48卷 161-166页

作者：黄海超陈轩杨素赵海燕曹伟胜邵建宏赵福振沙才华李忠珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东珠海519000 华南农业大学兽医学院广东广州510642

根据Gen Bank数据库中禽白血病病毒（ALV）k亚群特异性的gp85基因序列,设计了特异性检测ALV k亚群（ALV-k）的RT-LAMP引物。对内、外引物浓度组合和反应温度进行优化,建立了ALV-k的RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,本方法只对ALV-... 详细信息

根据Gen Bank数据库中禽白血病病毒（ALV）k亚群特异性的gp85基因序列,设计了特异性检测ALV k亚群（ALV-k）的RT-LAMP引物。对内、外引物浓度组合和反应温度进行优化,建立了ALV-k的RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,本方法只对ALV-k进行特异性扩增,而对禽白血病的其他亚群以及NDV、REV、AIV、MDV、IBV等常见禽病病原未见扩增。敏感性试验表明,本方法最低能够检测到3.4×104copies/L的质粒。

关键词：禽白血病病毒 k亚群 RT-LAMP 检测方法

多杀性巴氏杆菌与禽白血病病毒亚群混合感染诊断及相关基因分析

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南方农业学报 2022年第2期53卷 526-537页

作者：罗东还吴强温贵兰胡璇张小波文明欧德渊龚新勇贵州大学动物科学学院/贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵阳550025 思南县农业农村局贵州铜仁565100

【目的】明确引起贵州某规模化(20万羽)养殖场三黄鸡群发病的病因及科学用药,最大限度减轻经济损失,同时为规模化养殖场防控禽白血病和净化鸡群提供参考依据。【方法】无菌采集送检病鸡的心脏、肝脏和脾脏等组织进行细菌分离培养、生化... 详细信息

【目的】明确引起贵州某规模化(20万羽)养殖场三黄鸡群发病的病因及科学用药,最大限度减轻经济损失,同时为规模化养殖场防控禽白血病和净化鸡群提供参考依据。【方法】无菌采集送检病鸡的心脏、肝脏和脾脏等组织进行细菌分离培养、生化试验、荚膜分型、毒力基因和耐药基因等分子生物学检测,同时对采集病料进行禽白血病病毒(ALV)PCR检测及gp85基因克隆测序分析。【结果】成功分离获得1株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),命名为Pm-GZXF2021;Pm-GZXF2021为荚膜A型Pm,具有黏附素(ptfA、hsf-1、hsf-2、pfhA、fimA和tadD)、超氧化物歧化酶(sodA)、外膜蛋白(ompA、ompH、plpB和oma87)和铁摄取(exbB、exbD、tonB、Fur、hgbB和hgbA)相关的毒力基因,同时携带有喹诺酮类的gyrB耐药基因和内酰胺类的tem耐药基因;药敏试验结果表明,Pm-GZXF2021对米诺环素、丁胺卡那、哌拉西林、庆大霉素、多西环素、氧氟沙星、新霉素、头孢拉定、麦迪霉素及头孢哌酮等药物敏感,而对头孢他啶、苯唑西林、羧苄西林及头孢曲松等药物已产生耐药性;健康昆明小鼠在接种Pm-GZXF2021纯培养菌液(1.7×10;CFU/mL)后12 h内全部死亡,剖检可见昆明小鼠小肠均出现胶冻样浸润,肝脏肿大且伴有白色坏死灶。从病鸡的组织样品检测出ALV,命名为ALV-GZXF2021;由基于gp85基因核苷酸序列相似性构建的ALV系统发育进化树可知,ALV-GZXF2021与5株ALV-k参考毒株处于同一分支,与A、B、D、E、J亚群处于不同分支,即ALV-GZXF2021属于k亚群。【结论】贵州某规模化养殖场三黄鸡群发病是由Pm与k亚群外源性ALV混合感染所致。因此,养殖场应采取相应的防控措施,一般包括加强饲养管理,做好生物安全措施及疫苗接种等,尤其是建立无禽白血病的种鸡群。

关键词：多杀性巴氏杆菌(Pm) 禽白血病病毒(ALV) k亚群混合感染基因分析

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