K亚群禽白血病病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：陈轩 赵海燕 杨素 曹伟胜 黄海超 邵建宏 赵福振 沙才华 廖秀云 CHEN Xuan;ZHAO Haiyan;YANG Su;CAO Weisheng;HUANG Haichao;SHAO Jianhong;ZHAO Fuzhen;SHA Caihua;LIAO Xiuyun

作者机构：珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东珠海519000 华南农业大学兽医学院广州510642 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2018年第34卷第2期

页      面：224-231页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31672552) 题目:禽白血病病毒新亚群受体的解析及其介导的分子感染机制 广东省自然科学基金(2016A030313403) 题目:新出现K亚群禽白血病病毒的病原学研究 国家肉鸡产业技术体系岗位科学家(CARS-41-G16) 岗位名称:生物安全与综合防控岗 广东省现代农业产业技术体系创新团队项目(2016LM1114) 团队名称:广东省家禽产业技术体系创新团队 珠海出入境检验检疫局科技项目(ZH2016-6) 题目:禽白血病K亚群病毒快速检测方法研究~~ 

主　　题：禽白血病病毒(ALV-K) K亚群 实时荧光RT-PCR 检测方法 应用 

摘      要：根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒（Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K）特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-K的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果显示,本方法能对ALV-K进行特异性扩增,而对A亚群、B亚群、J亚群、E亚群禽白血病毒和新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、禽网状内皮组织增生病病毒（REV）、禽流感病毒（AIV）等禽病病原未见扩增。该方法最低能够检测到3.4×101拷贝数/μL的阳性质粒,灵敏度是RT-PCR的100倍。应用本方法对人工攻毒ALV-K的SPF鸡各脏器进行病毒定量分析,结果显示,在攻毒鸡体内心、肝、脾、肺、肾等脏器中均能检测到ALV-K,且肝、肾和脾中的病毒含量显著高于心和肺（P〈0.01）。