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江西科学 1990年第1期8卷 17-23页

作者：熊占郭兴华江西省科学院微生物所中国科学院微生物所

本文简要地报道了由枯草杆菌运载体pUB_(110)和大肠杆菌运载体pGEM_3构建的一个多功能穿梭载体pBE_2.该载体能在枯草杆菌和大肠杆菌中复制和表达,并具有一个强启动子和一个多酶切位点区可供广泛利用,是一个比较理想的运载体.

关键词：枯草杆菌大肠杆菌穿梭载体构建

芽孢杆菌外毒素保护性抗原与上游强启动子穿梭载体的构建

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中国热带医学 2006年第9期6卷 1546-1548页

作者：刘蓉娜黄汉菊徐静华华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系微生物学教研室湖北武汉430030 中国药品生物制品检定所北京100050

目的构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)的两种穿梭载体与上游强启动子。方法将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pbluescript-sk(+)上,构建载体pBLKSP;以A16R疫苗株(Tox+,Cap-,弱毒株)DNA为模板,设计合成内外侧引物巢式PCR... 详细信息

目的构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)的两种穿梭载体与上游强启动子。方法将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pbluescript-sk(+)上,构建载体pBLKSP;以A16R疫苗株(Tox+,Cap-,弱毒株)DNA为模板,设计合成内外侧引物巢式PCR扩增获得保护性抗原(PA)的全基因,先克隆到载体pBLKSP,再将其和质粒PUB110重组构建成两种穿梭载体。结果酶切鉴定显示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了带有强启动子的两种穿梭载体。为在无毒炭疽疫苗株中的高效表达和炭疽芽孢杆菌的分子疫苗研究奠定了基础。

关键词：炭疽芽孢杆菌穿梭载体重组基因

运用穿梭载体建立产甘油假丝酵母质粒基因文库

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生物技术 1998年第2期8卷 9-11页

作者：王正祥诸葛健无锡轻工大学生物工程学院江苏214036

产甘油假丝酵母WL2002─5既具有耐高渗压性能，又能以葡萄糖为原材料高产甘油，且耐高渗压性能与高产甘油的能力相关。本研究以大肠杆菌—酿酒酵母穿梭质粒YEp51为载体，通过对产甘油假丝酵母WL2002─5高分子量染色体DNA的提取、Sau3AI... 详细信息

产甘油假丝酵母WL2002─5既具有耐高渗压性能，又能以葡萄糖为原材料高产甘油，且耐高渗压性能与高产甘油的能力相关。本研究以大肠杆菌—酿酒酵母穿梭质粒YEp51为载体，通过对产甘油假丝酵母WL2002─5高分子量染色体DNA的提取、Sau3AI部分酶切、体外重组等建立起产甘油假丝酵母WL2002—5的质粒基因文库，库容为5．3×105，已满足对WL2002—5某一特定基因的克隆。

关键词：产甘油假丝酵母质粒基因文库穿梭载体

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贝氏柯克斯体穿梭载体构建及转化方法建立

生物技术通讯 2016年第5期27卷 625-628页

作者：罗声栋卢姗姗胡燕王涛于永慧冯乐孙志会宋立华病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 解放军第302医院临床研究管理中心北京100039

目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan^R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P... 详细信息

目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan^R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-Kan^R串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果:构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论:建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。

关键词：贝氏柯克斯体 Q热穿梭载体转化 RSF1010质粒

启动子探针型穿梭载体pEQ3的构建及BCG启动子片段的分离

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 160-161页

作者：邱薇徐恒刘世贵成都军区后勤部军事医学研究所昆明650032 四川联合大学生物工程研究所成都610064

卡介苗(Bacille de Calmette-Guerin,BCG)是世界上应用最广泛的菌苗,而且也是最安全,最稳定的疫苗,还是目前所知最强的免疫佐剂之一。由于在免疫学上具有许多独特优点,如:可研制成活菌苗、提高免疫力、延长保护期、适合表达免疫原性弱... 详细信息

卡介苗(Bacille de Calmette-Guerin,BCG)是世界上应用最广泛的菌苗,而且也是最安全,最稳定的疫苗,还是目前所知最强的免疫佐剂之一。由于在免疫学上具有许多独特优点,如:可研制成活菌苗、提高免疫力、延长保护期、适合表达免疫原性弱的抗原基因、方便、成本低等,使卡介苗在90年代迅速成为基因工程疫苗研究中的热点。要将BCG改造成为活的重组多价疫苗载体,集佐剂与抗原于一身,就需要在分枝杆菌中建立与***类似的基因转化系统。

关键词：启动子穿梭载体分枝杆菌卡介苗肠杆菌重组质粒基因工程疫苗插入片段基因转化系统启动子探针型载体

一个新型大肠杆菌,枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的穿梭载体的构建

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一个新型大肠杆菌,枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的穿梭载体的构建

低碳经济与高效养殖——第六次全国饲料营养学术研讨会暨动物营养学分会成立三十周年大会

作者：陈巧杨明明西北农林科技大学动物科技学院

乳酸杆菌是重要的动物肠道益生菌,随着分子生物学和基因工程技术的发展,乳酸杆菌的基因工程成为饲用生物技术的一个重要研究内容,本实验构建新的大肠杆菌,枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的穿梭载体,为益生菌的研究和应用奠定基础。分别PCR扩增... 详细信息

乳酸杆菌是重要的动物肠道益生菌,随着分子生物学和基因工程技术的发展,乳酸杆菌的基因工程成为饲用生物技术的一个重要研究内容,本实验构建新的大肠杆菌,枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的穿梭载体,为益生菌的研究和应用奠定基础。分别PCR扩增约700bp的融合有多克隆位点的大肠杆菌质粒ColEI复制乳酸杆菌是重要的动物肠道益生菌,随着分子生物学和基因工程技术的发展,乳酸杆菌的基因工程成为饲用生物技术的一个重要研究内容,本实验构建新的大肠杆菌,枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的穿梭载体,为益生菌的研究和应用奠定基础。分别PCR扩增约700bp的融合有多克隆位点的大肠杆菌质粒ColEI复制

关键词：大肠杆菌枯草芽孢杆菌乳酸杆菌穿梭载体构建

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大肠杆菌-枯草芽孢杆菌小型穿梭载体的构建

大肠杆菌-枯草芽孢杆菌小型穿梭载体的构建

全国首届动物生物技术学术研讨会

作者：杨朝霞杨明明郁枫余志强林峰张西锋樊俊华武汉阳光广济医药开发有限公司浙江大学材料与化工学院西北农林科技大学动物科技学院华中农业大学河南农业大学河南郑州西北农林科技大学动物科技学院武汉阳光广济医药开发有限公司

以大肠杆菌（***）克隆载体pUC19为模板,分别用两对引物扩增了含有复制起始序列（ori）和复制蛋白基因（rep）的近700bp片段,以枯草芽孢杆菌（***）质粒载体pGDV1为基本骨架,构建了三个大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pGDVM,pGDVM1和pGD... 详细信息

以大肠杆菌（***）克隆载体pUC19为模板,分别用两对引物扩增了含有复制起始序列（ori）和复制蛋白基因（rep）的近700bp片段,以枯草芽孢杆菌（***）质粒载体pGDV1为基本骨架,构建了三个大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pGDVM,pGDVM1和pGDVM2。经大肠杆菌-枯草杆菌反复穿梭实验和细菌连续培养分析检测,结果显示含大肠杆菌pUC19复制起始区（ori）和复制起始蛋白基因（rep）的近700bp克隆片段在大肠杆菌中具有完全的复制起始和复制功能;构建的三个质粒载体在大肠杆菌和枯草杆菌中能稳定的遗传。

关键词：穿梭载体枯草杆菌大肠杆菌稳定性 pGDVM

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鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析

鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析

中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：刘柏含牛银杰赵丽丽孙畅尹海畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术重点实验室/实验动物与比较医学研究室牡丹江师范学院

鸭瘟病毒为疱疹病毒科成员,其基因组约为150KB,含有多个复制非必须区。本实验选择已经证实的US2-SORF3、US7-US8和UL15-UI18的非编码区作为插入位点构建构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒... 详细信息

鸭瘟病毒为疱疹病毒科成员,其基因组约为150KB,含有多个复制非必须区。本实验选择已经证实的US2-SORF3、US7-US8和UL15-UI18的非编码区作为插入位点构建构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,收毒,进行噬斑筛选。结果以pBlusecriptⅡSK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用pUC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑。说明拯救鸭瘟重组毒的研究中,pBlusecriptⅡ载体可能不是最佳的适用载体,为以后重组病毒的拯救提供实验依据。

关键词：鸭瘟病毒穿梭载体噬斑纯化

利用Hsp基因调控元件构建胞内表达的***-BCG穿梭载体

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中华放射医学与防护杂志 2003年第8期 632-632页

目的构建能够携带外源蛋白基因并能在胞内表达的***-BCG (Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体. 方法用多聚酶链式反应(PCR)从结核分枝杆菌毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌热休克蛋白(Hsp)60 N端6个氨基酸及其上游调控元件基因,克隆入*... 详细信息

目的构建能够携带外源蛋白基因并能在胞内表达的***-BCG (Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体. 方法用多聚酶链式反应(PCR)从结核分枝杆菌毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌热休克蛋白(Hsp)60 N端6个氨基酸及其上游调控元件基因,克隆入***-BCG穿梭载体pOLYG中,以屋尘螨抗原(Der p2)为外源蛋白,用间接免疫荧光染色法观察该载体介导的Der p2基因在牡牛分枝杆菌(***)宿主中的表达. 结果经测序证实所克隆的Hsp60ss基因序列正确,所构建的胞浆内表达***-BCG穿梭载体(pIC)能完成在大肠杆菌和***细胞之间的穿梭,并介导抗生素抗性基因的表达,经免疫荧光检查外源基因Der p2可表达于***宿主胞内,并受到培养温度的调节. 结论成功构建了在***胞内表达外源蛋白的***-BCG穿梭载体.

关键词：穿梭载体分枝杆菌表达

以胸苷酸合成酶基因为选择压力的穿梭质粒载体的构建

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以胸苷酸合成酶基因为选择压力的穿梭质粒载体的构建

中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：王春凤秦泽荣孙哲刘尚高王春凤中国农业大学吉林农业大学

以干酪乳杆菌***34103染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增出胸苷酸合成酶Thymidylate synthase,thyA)基因,回收纯化。选择以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒pW425e为基本质粒,以thyA基因取代红霉素基因,获... 详细信息

以干酪乳杆菌***34103染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增出胸苷酸合成酶Thymidylate synthase,thyA)基因,回收纯化。选择以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒pW425e为基本质粒,以thyA基因取代红霉素基因,获得重组载体并鉴定。此重组载体可以对thyA基因缺陷的大肠杆菌X51和嗜酸乳杆菌DOMLaS107进行功能弥补,即可以在没有外源性胸腺嘧啶核苷的LB和MRS培养基上生长。进而构建了以thyA基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体,其大小为3716bps,并命名为pW425t。

关键词： thyA基因选择压力穿梭载体构建