以胸苷酸合成酶基因为选择压力的穿梭质粒载体的构建
会议名称：《中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会》
会议日期：2000年
学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种]
摘 要：以干酪乳杆菌***34103染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增出胸苷酸合成酶Thymidylate synthase,thyA)基因,回收纯化。选择以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒pW425e为基本质粒,以thyA基因取代红霉素基因,获得重组载体并鉴定。此重组载体可以对thyA基因缺陷的大肠杆菌X51和嗜酸乳杆菌DOMLaS107进行功能弥补,即可以在没有外源性胸腺嘧啶核苷的LB和MRS培养基上生长。进而构建了以thyA基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体,其大小为3716bps,并命名为pW425t。