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毛细管电泳-电化学发光联用检测金线鱼中的组氨酸

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中国食品学报 2014年第8期14卷 248-255页

作者：董乐翁凌钱勇强安冬平婷婷王力集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 泉州师范学院化学与生命科学学院福建泉州362000

为建立1种快速检测水产品中组氨酸含量的方法,采用毛细管电泳(CE)分离-三联吡啶钌[Ru(bpy)32+]电化学发光(ECL)检测联用,研究电位、进样量、毛细管电泳高压、缓冲液pH等条件对信号强度、迁移时间的影响。结果显示,检测的最佳条件是:检... 详细信息

为建立1种快速检测水产品中组氨酸含量的方法,采用毛细管电泳(CE)分离-三联吡啶钌[Ru(bpy)32+]电化学发光(ECL)检测联用,研究电位、进样量、毛细管电泳高压、缓冲液pH等条件对信号强度、迁移时间的影响。结果显示,检测的最佳条件是:检测电位1.05 V,Ru(bpy)32+浓度5mmol/L(溶于pH8.0的磷酸盐缓冲溶液),进样时间12 s,进样高压10 kV,运行高压14 kV;运行缓冲溶液pH 8.0。在此条件下对组氨酸标准品进行快速检测,得到其线性方程为I=0.9082c-48.72,相关系数r=0.9985(n=5),检出限(S/N=3)为0.668μmol/L。采用该方法测定金线鱼样品中的组氨酸,得到峰高和迁移时间的相对标准偏差(RSD)值分别为0.25%和0.06%,加标回收率为92.81%和104.39%。该方法可应用于金线鱼中组氨酸含量的测定,具有高效、高灵敏度、样品消耗少及操作成本低的优点,为此方法应用于其他水产品中氨基酸的检测提供了试验基础。

关键词：毛细管电泳电致化学发光三联吡啶钌组氨酸

毛细管电泳-激光诱导荧光检测用于多个胞内蛋白激酶的抑制剂筛选和选择性评价(英文)

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色谱 2013年第7期31卷 646-655页

作者：张倩倩张雪佩张含智康经武中国科学院上海有机化学研究所上海200032

发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法。CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能。共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽... 详细信息

发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法。CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能。共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽、2种选择性蛋白激酶抑制剂和1种非选择性蛋白激酶抑制剂用于方法的建立。特异性底物肽与细胞裂解液混合后孵育,被其相应的激酶选择性地磷酸化,利用CE-LIF分离检测磷酸化产物和底物肽。同时测定一个抑制剂对几种蛋白激酶的抑制活性,用于评价抑制剂的选择性。与传统的单靶标筛选模式相比,这种基于细胞裂解液的多靶标筛选方法能提供更多的信息,更加高效,且细胞裂解液作为一种廉价的激酶来源大大降低了筛选成本。

关键词：毛细管电泳激光诱导荧光检测蛋白激酶抑制剂筛选选择性评价

毛细管电泳用于组蛋白去乙酰化酶活性分析方法的研究

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毛细管电泳用于组蛋白去乙酰化酶活性分析方法的研究

作者：汪铃山东大学

学位级别：硕士

组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases,HDACs)负责催化组蛋白的水解,与多种细胞进程密切相关,是抗癌药物研究的重要靶点,建立准确高效的HDACs抑制剂筛选方法对于新药开发具有十分重要的现实意义。毛细管电泳(Capillary electrophoresi... 详细信息

组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases,HDACs)负责催化组蛋白的水解,与多种细胞进程密切相关,是抗癌药物研究的重要靶点,建立准确高效的HDACs抑制剂筛选方法对于新药开发具有十分重要的现实意义。毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)作为高效、快速的微量分析技术,具有分离效率高、检测时间短、样品消耗量少、自动化程度高等突出优点。因此本论文建立了基于CE的研究方法,主要内容如下:(1)本文建立了用于HDACs动力学参数测定及抑制剂筛选的基于毛细管的固定化酶(CE-IMER)方法。利用聚多巴胺(Polydopamine,PDA)易沉积到毛细管内壁的特性,将毛细管内壁上涂覆上聚多巴胺涂层并对其进行表征,酶与聚多巴胺间通过弱作用力连接进而被固定在毛细管内壁上,证明了 IMER的成功构建,并进一步优化了多巴胺的浓度、酶固定化时间、底物与酶孵育时间以及多巴胺的修饰时间等条件,在建立好的方法上重复进样底物40次以上时,该固定化酶活性依然能保持初始活性的90%以上,表明了建立的CE-IMER具有良好的稳定性。用所建立的方法测定了固定化酶的动力学参数(Km和Vmax)及其抑制剂的IC50值,与荧光法测定的游离酶结果接近,证实了方法的可靠性,最后将CE-IMER应用到抑制剂筛选中,成功从十多种化合物中筛选出了几种有潜力的抑制剂。(2)为进一步从对HDACs靶点有活性的化合物中筛选出异构体选择性抑制剂,开发了用于HDAC8动力学参数测定及抑制剂筛选的电泳调控微分析(EMMA)方法学。我们考察了电泳分析的最佳条件,最终的实验条件为:贝克曼电泳仪配备二极管阵列检测器,检测波长为327 nm,柱温37℃,熔融石英毛细管(内径75 μm,有效长度为50 cm),Tris-HCl(100 mM,pH=8.0)为背景缓冲溶液,孵育缓冲溶液为Tris-HCl(25 mM,pH=8.0,137 mM NaCl,2.7 mM KCl,1 mM MgCl2,1 mg/mL BSA)溶液,分离电压为 15 kV,底物和酶在3 kV的混合电压下混合0.2 min,孵育时间为5 min。酶解反应后的产物和未反应的底物在毛细管电泳中得到分离检测,利用建立的方法测定了 HDAC8的动力学参数(Km和Vmax)及其两种代表性抑制剂伏立诺他(SAHA)与PCI-34051的IC50值,此方法与传统的荧光分析法相比具有自动化程度高、操作简便、不受假阳性结果干扰等突出优点。总而言之,基于毛细管电泳,本研究开发了两种不同方法用于HDACs的活性分析及抑制剂筛选。其中CE-IMER方法制备的固定化酶微反应器稳定性好,酶经多次重复运行依然保持良好活性,能大大节省酶的使用量,这对于尤其昂贵稀缺的酶样本来说具有十分重要的现实性意义;EMMA法的突出优点在于能够在线进行抑制剂筛选及酶活性检测,将酶促反应的发生场所及底物产物的分离检测场所都集中在了一根毛细管柱内,大大减少了人工误差,这种高度自动化的研究方法充分满足现代药物学高速发展的需求。

关键词：毛细管电泳基于毛细管的固定化酶法电泳调控微分析法 HDACs抑制剂酶动力学参数酶抑制剂筛选

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毛细管电泳在中药糖类成分分析中的研究进展

药物分析杂志 2020年第10期40卷 1727-1735页

作者：刘美廷赵静李绍平澳门大学中药质量研究国家重点实验室中国澳门999078

糖类成分在中药广泛分布,具有多种药理活性。毛细管电泳法(capillary electrophoresis,CE)具备分离效率高、样品消耗量少等优势,在糖类分析中得到较好的应用。本文对CE在中药糖类成分分析中的应用进行了总结。同时介绍了CE针对糖类分析... 详细信息

糖类成分在中药广泛分布,具有多种药理活性。毛细管电泳法(capillary electrophoresis,CE)具备分离效率高、样品消耗量少等优势,在糖类分析中得到较好的应用。本文对CE在中药糖类成分分析中的应用进行了总结。同时介绍了CE针对糖类分析的分离策略和检测方法的研究进展,分离策略包括糖类与硼酸根络合或在强碱条件下电离等,检测方法包括紫外检测、荧光检测、电化学检测和质谱检测。以期为CE在中药糖类成分分析中的研究提供参考。

关键词：毛细管电泳中药单糖寡糖多糖成分分析

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毛细管电泳法表征多肽及糖蛋白的稳定性

色谱 2013年第6期31卷 543-549页

作者：汪勇高培峰赵新颖屈锋北京理工大学生命学院北京100081 北京市理化分析测试中心北京100089

建立了毛细管电泳表征多肽和糖蛋白稳定性的方法。分别以血管紧张素II(Ang II)和植物血球凝集素(PHA)、牛凝血酶(B-Thr)、人凝血酶(H-Thr)、辣根过氧化物酶(HRP)4种糖蛋白为多肽和糖蛋白的模式分子。从样品浓度、电泳缓冲液、样品溶液p... 详细信息

建立了毛细管电泳表征多肽和糖蛋白稳定性的方法。分别以血管紧张素II(Ang II)和植物血球凝集素(PHA)、牛凝血酶(B-Thr)、人凝血酶(H-Thr)、辣根过氧化物酶(HRP)4种糖蛋白为多肽和糖蛋白的模式分子。从样品浓度、电泳缓冲液、样品溶液pH和离子强度等方面优化了血管紧张素II的分离分析条件;从毛细管的选择、样品的电荷状态、电泳缓冲液的选择和分离电压的影响等方面讨论了糖蛋白的分离条件。Ang II和4种糖蛋白的稳定性试验结果表明:Ang II可在pH 7.4的硼酸盐缓冲液(0.02 mol/L)中于4℃下稳定放置48 h;4种糖蛋白可在pH 7.4硼酸盐缓冲液(0.2 mol/L)中于20,4,-20℃下稳定放置48 h;放置时间大于一周且小于四周时,在-20℃下各蛋白质均保持稳定;放置时间大于两周且小于四周时,只有HRP在上述3个温度下均保持稳定。该方法具有高效、快速、简单、低成本的特点,可广泛应用于多肽和蛋白质的稳定性表征。

关键词：毛细管电泳多肽糖蛋白稳定性

毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性

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中国生物制品学杂志 2020年第12期33卷 1441-1444页

作者：吕兴凯王吟任科云胡尚杰何昆陈爱芳张帆武汉光谷人福生物医药有限公司湖北武汉430075 武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207

目的通过毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性。方法将人血浆经Blue Bestarose FF亲和层析、EzFast Phenyl FF疏水层析、EzFast CM FF阳离子层析、EzFast DEAE FF阴离子层析4步纯化后,采用毛细管电泳法对市售人血白蛋白及各层... 详细信息

目的通过毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性。方法将人血浆经Blue Bestarose FF亲和层析、EzFast Phenyl FF疏水层析、EzFast CM FF阳离子层析、EzFast DEAE FF阴离子层析4步纯化后,采用毛细管电泳法对市售人血白蛋白及各层析步骤产物纯度进行分析,并计算回收率。结果市售人血白蛋白纯度为96.6%,出峰时间为19.68 min,包含二聚体、单聚体和多聚体。亲和层析、疏水层析、阳离子交换层析和阴离子交换层析产物的出峰时间分别为19.667、19.867、19.867、20.075 min,与市售人血白蛋白基本一致,纯度分别为90.0%、93.4%、99.9%和99.9%,回收率分别为49.59%、35.49%、24.12%和17.56%。结论人血白蛋白纯化工艺的有效性良好,获得的人血白蛋白纯度较高,但回收率较低。

关键词：毛细管电泳人血白蛋白纯化工艺层析有效性

毛细管电泳法评价细胞色素c与单链脱氧核糖核酸库的相互作用

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色谱 2012年第12期30卷 1229-1234页

作者：梅芳赵新颖屈锋北京理工大学生命学院北京100081 北京市理化分析测试中心北京100089

以细胞色素c(Cyt c)为碱性蛋白质模型,建立了毛细管电泳评价Cyt c与3种不同链长的单链脱氧核糖核酸(ssDNA)库相互作用的评价方法,研究了离子强度对Cyt c与ssDNA库相互作用的影响。比较了Cyt c与含有20、40和60个随机碱基序列的3种不同... 详细信息

以细胞色素c(Cyt c)为碱性蛋白质模型,建立了毛细管电泳评价Cyt c与3种不同链长的单链脱氧核糖核酸(ssDNA)库相互作用的评价方法,研究了离子强度对Cyt c与ssDNA库相互作用的影响。比较了Cyt c与含有20、40和60个随机碱基序列的3种不同链长的ssDNA库的作用及基于未涂层毛细管和涂层毛细管的毛细管区带电泳方法。因碱性蛋白质在未涂层毛细管管壁上存在吸附,因此利用未涂层毛细管区带电泳不能区别3种ssDNA库与其作用的差异。利用涂层毛细管电泳法,在压力辅助的反向电压下,根据游离ssDNA库的峰面积变化可比较3种ssDNA库与细胞色素c的相互作用差异。结果表明,含有20个随机寡核苷酸链长的ssDNA库与Cty c的作用最强。此外,NaCl浓度显著影响Cyt c与ssDNA60库的作用。在优化的实验条件下,0.02 mol/L NaCl有利于两者的相互作用。调节盐浓度可抑制非特异性静电作用,能提高碱性蛋白质适配体的单轮筛选效率。利用未涂层毛细管电泳分析复合物及游离ssDNA库的峰面积变化,可优化有利复合物形成的盐浓度。

关键词：毛细管电泳细胞色素c 单链DNA库碱性蛋白质核酸适配体

毛细管电泳与电感耦合等离子体质谱联用的研究进展及元素形态分析的应用

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纳米技术与精密工程 2017年第6期15卷 486-493页

作者：赵学玒王博龚子珊孙传强蔡彪杜康天津大学精密仪器与光电子工程学院天津300072

毛细管电泳与电感耦合等离子体质谱联用(CE-ICP-MS)具有灵敏度高、分析速度快、样品提升量少等优点,广泛应用于元素形态分析领域.本文阐述了在设计CE-ICP-MS接口中存在的问题,包括毛细管电连接、CE与雾化器的流速匹配以及自吸效应的抑制... 详细信息

毛细管电泳与电感耦合等离子体质谱联用(CE-ICP-MS)具有灵敏度高、分析速度快、样品提升量少等优点,广泛应用于元素形态分析领域.本文阐述了在设计CE-ICP-MS接口中存在的问题,包括毛细管电连接、CE与雾化器的流速匹配以及自吸效应的抑制,报道了目前常用的CE-ICP-MS接口方案,指出毛细管与雾化器之间的接口是CE-ICP-MS联用技术成功的关键.最后,综述了近几年使用CE-ICP-MS联用技术对砷、锰、铬、硒元素进行形态分析的应用进展,并指出该联用技术将会应用到更多的实际样品形态检测中.

关键词：毛细管电泳电感耦合等离子体质谱接口元素形态分析

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毛细管电泳专利技术概述

药物分析杂志 2019年第7期39卷 1167-1176页

作者：田裕胡正耀国家知识产权局专利局专利审查协作湖北中心

本文通过国家专利检索与服务系统检索近50年的毛细管电泳技术相关专利,从专利分析的角度,揭示全球毛细管电泳技术创新的发展态势、技术布局、技术发展动向以及核心专利等,希望能够为我国毛细管电泳技术的发展与创新提供技术支撑。

关键词：毛细管电泳专利分析毛细管区带电泳电动毛细管色谱毛细管凝胶电泳毛细管等电聚焦电泳毛细管等速电泳芯片毛细管电泳