毛细管电泳-激光诱导荧光检测用于多个胞内蛋白激酶的抑制剂筛选和选择性评价(英文)

作     者：张倩倩 张雪佩 张含智 康经武 ZHANG Qianqian;ZHANG Xuepei;ZHANG Hanzhi;KANG Jingwu

作者机构：中国科学院上海有机化学研究所上海200032 

出 版 物：《色谱》 (Chinese Journal of Chromatography)

年 卷 期：2013年第31卷第7期

页      面：646-655页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 0817[工学-化学工程与技术] 0703[理学-化学] 

基　　金：National Natural Science Foundations of China(90713021,20975109,20675086) National Key Laboratory of the Organic Biochemistry Opening Foundation 

主　　题：毛细管电泳 激光诱导荧光检测 蛋白激酶抑制剂筛选 选择性评价 

摘      要：发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法。CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能。共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽、2种选择性蛋白激酶抑制剂和1种非选择性蛋白激酶抑制剂用于方法的建立。特异性底物肽与细胞裂解液混合后孵育,被其相应的激酶选择性地磷酸化,利用CE-LIF分离检测磷酸化产物和底物肽。同时测定一个抑制剂对几种蛋白激酶的抑制活性,用于评价抑制剂的选择性。与传统的单靶标筛选模式相比,这种基于细胞裂解液的多靶标筛选方法能提供更多的信息,更加高效,且细胞裂解液作为一种廉价的激酶来源大大降低了筛选成本。