毛细管电泳法评价细胞色素c与单链脱氧核糖核酸库的相互作用

作     者：梅芳 赵新颖 屈锋 MEI Fang;ZHAO Xinying;QU Feng

作者机构：北京理工大学生命学院北京100081 北京市理化分析测试中心北京100089 

出 版 物：《色谱》 (Chinese Journal of Chromatography)

年 卷 期：2012年第30卷第12期

页      面：1229-1234页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(21175011 20875009) 科技部基础研究计划项目(2012CB910603) "十二五"国家科技支撑计划项目(2011BAD26B0404) 

主　　题：毛细管电泳 细胞色素c 单链DNA库 碱性蛋白质 核酸适配体 

摘      要：以细胞色素c(Cyt c)为碱性蛋白质模型,建立了毛细管电泳评价Cyt c与3种不同链长的单链脱氧核糖核酸(ssDNA)库相互作用的评价方法,研究了离子强度对Cyt c与ssDNA库相互作用的影响。比较了Cyt c与含有20、40和60个随机碱基序列的3种不同链长的ssDNA库的作用及基于未涂层毛细管和涂层毛细管的毛细管区带电泳方法。因碱性蛋白质在未涂层毛细管管壁上存在吸附,因此利用未涂层毛细管区带电泳不能区别3种ssDNA库与其作用的差异。利用涂层毛细管电泳法,在压力辅助的反向电压下,根据游离ssDNA库的峰面积变化可比较3种ssDNA库与细胞色素c的相互作用差异。结果表明,含有20个随机寡核苷酸链长的ssDNA库与Cty c的作用最强。此外,NaCl浓度显著影响Cyt c与ssDNA60库的作用。在优化的实验条件下,0.02 mol/L NaCl有利于两者的相互作用。调节盐浓度可抑制非特异性静电作用,能提高碱性蛋白质适配体的单轮筛选效率。利用未涂层毛细管电泳分析复合物及游离ssDNA库的峰面积变化,可优化有利复合物形成的盐浓度。