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慢病毒转染和电转染原代C57BL/6小鼠神经干细胞的比较

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中国现代医学杂志 2017年第6期27卷 6-9页

作者：加三三胡俊李美宁张凯丽刘志贞山西医科大学生物化学与分子生物学实验室山西太原030001

目的比较慢病毒与电转染两种技术转染小鼠原代神经干细胞的优劣,获得神经干细胞高效转染的方法。方法从C57BL/6小鼠脑组织中提取神经干细胞,进行原代培养;分别进行慢病毒转染和电转染,通过观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达,比较两种转染... 详细信息

目的比较慢病毒与电转染两种技术转染小鼠原代神经干细胞的优劣,获得神经干细胞高效转染的方法。方法从C57BL/6小鼠脑组织中提取神经干细胞,进行原代培养;分别进行慢病毒转染和电转染,通过观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达,比较两种转染方法的转染效果,并用噻唑蓝(MTT)法计算相对存活率,比较两种方法转染后对细胞的影响。结果慢病毒与电转染两种转染技术转染神经干细胞48 h后,慢病毒的转染率为(77.6±6.6)%,高于电转染法转染率([29.2±4.8)%],两者比较,差异有统计学意义(P转染72 h后,慢病毒转染的细胞荧光表达量为(60.0±3.6)%,电转染细胞的荧光表达量仅剩(12.8±2.4)%;MTT法结果显示,电转染组细胞相对存活率为(75.8±2.3)%,慢病毒转染组细胞相对存活率为(70.1±1.4)%,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于原代神经干细胞转染,慢病毒转染法比电转染法具有更高的转染效率及长久稳定性,转染后细胞存活率与电转染法接近,因此慢病毒转染法更能满足研究者的需求。

关键词：神经干细胞慢病毒转染电转染

miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵：抗炎及促进组织修复

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中国组织工程研究 2024年

作者：王思凡何惠宇杨泉韩祥祯新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市口腔医院新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔修复种植科新疆维吾尔自治区口腔医学研究所

背景：巨噬细胞M1/M2极化方向的调节在组织工程应用中尤为关键，及时调控可最大程度地减少促炎、促进抗炎或组织愈合反应。目的：将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵回植入动物模型，据此检测免疫调节在体内环... 详细信息

背景：巨噬细胞M1/M2极化方向的调节在组织工程应用中尤为关键，及时调控可最大程度地减少促炎、促进抗炎或组织愈合反应。目的：将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵回植入动物模型，据此检测免疫调节在体内环境中的相关表达水平等组织修复相关的指标，进一步阐明在体内环境中miRNA-378a是否促进巨噬细胞M2极化及其对免疫调节和组织修复的作用。方法：将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株、阴性对照病毒巨噬细胞株扩增、筛选，复苏培养巨噬细胞株后与胶原蛋白海绵共培养以此构成复合体，具体分组如下：(1)阳性组：过表达miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体；(2)阴性组：阴性对照病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体；(3)对照组：巨噬细胞-胶原蛋白海绵；(4)空白对照组：胶原蛋白海绵。通过免疫荧光及扫描电镜观察各组细胞密度、表型、黏附情况，后回植入小鼠背部皮下模型，分别于造模后4,7 d处死小鼠，通过大体观察、苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化分析慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞胶原蛋白海绵复合体中巨噬细胞极化的方向及其对机体免疫调控、组织修复的作用。结果与结论：(1)免疫荧光镜下观察各组巨噬细胞株确实与胶原蛋白海绵形成复合体；(2)扫描电镜下慢病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞(阳性组)较其他分组细胞密度增加，细胞出现球形、椭圆形及多边形分化，具有更多的伪足；(3)大体观察下总体7 d愈合好于4 d，慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d愈合均好于其他分组；(4)苏木精-伊红染色、Masson染色下，慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生；(5)免疫组化显示，慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于其他分组；对照组及阴性组巨噬细胞无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于空白对照组，而对照组及阴性组之间无统计学差异；阳性组、阴性组、对照组无论4,7 d染色细胞数量均大于空白对照组，且阳性组>阴性组≈对照组>空白对照组；(6)提示在体内环境中miRNA-378a过表达巨噬细胞具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生，对组织修复起到了正向作用，并且能促进巨噬细胞向M2型极化并抑制M1型极化，从而有助于减少机体炎症反应。

关键词： miRNA-378a 慢病毒转染巨噬细胞极化免疫调节组织工程

不同冻存液冻存慢病毒转染后稳转肝癌细胞株HepG2的效果比较

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重庆医学 2013年第28期42卷 3393-3394,3397页

作者：李佳陆会平冯振博莫伟嘉广西医科大学第一附属医院病理科南宁530021

目的筛选冻存慢病毒转染后稳转肝癌细胞株HepG2的最佳冻存液。方法采用甘油和二甲基亚砜(DMSO)2种不同冻存保护剂,以4种不同比例的冻存液分别冻存慢病毒转染后肝癌细胞HepG2及未转染的HepG2细胞,并对上述细胞复苏后的存活率及增殖能力... 详细信息

目的筛选冻存慢病毒转染后稳转肝癌细胞株HepG2的最佳冻存液。方法采用甘油和二甲基亚砜(DMSO)2种不同冻存保护剂,以4种不同比例的冻存液分别冻存慢病毒转染后肝癌细胞HepG2及未转染的HepG2细胞,并对上述细胞复苏后的存活率及增殖能力进行比较分析。结果采用甘油为冻存保护剂时,冻存液[DMEM∶胎牛血清(FBS)∶甘油]比例为0∶9∶1的转染后细胞存活率最高(P=0.001);未转染细胞存活率与冻存液比例无关(P=0.293)。采用DMSO为冻存保护剂时,转染后细胞存活率为0%;未转染细胞存活率在60%及以上,且与冻存液比例无关(P=0.487)。冻存液中血清含量越高,复苏后细胞的增殖能力越强(P慢病毒转染后的稳转肝癌细胞株HepG2的最佳冻存液为90%FBS+10%甘油。

关键词：慢病毒转染肝肿瘤细胞冻存

miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵:抗炎及促进组织修复

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 789-799页

作者：王思凡何惠宇杨泉韩祥祯新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔修复种植科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆维吾尔自治区口腔医学研究所新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市口腔医院新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000

背景:巨噬细胞M1/M2极化方向的调节在组织工程应用中尤为关键,及时调控可最大程度地减少促炎、促进抗炎或组织愈合反应。目的:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵回植入动物模型,据此检测免疫调节在体内环境中... 详细信息

背景:巨噬细胞M1/M2极化方向的调节在组织工程应用中尤为关键,及时调控可最大程度地减少促炎、促进抗炎或组织愈合反应。目的:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵回植入动物模型,据此检测免疫调节在体内环境中的相关表达水平等组织修复相关的指标,进一步阐明在体内环境中miRNA-378a是否促进巨噬细胞M2极化及其对免疫调节和组织修复的作用。方法:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株、阴性对照病毒巨噬细胞株扩增、筛选,复苏培养巨噬细胞株后与胶原蛋白海绵共培养以此构成复合体,具体分组如下:①阳性组:过表达miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;②阴性组:阴性对照病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;③对照组:巨噬细胞-胶原蛋白海绵;④空白对照组:胶原蛋白海绵。通过免疫荧光及扫描电镜观察各组细胞密度、表型、黏附情况,后回植入小鼠背部皮下模型,分别于造模后4,7 d处死小鼠,通过大体观察、苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化分析慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞胶原蛋白海绵复合体中巨噬细胞极化的方向及其对机体免疫调控、组织修复的作用。结果与结论:①免疫荧光镜下观察各组巨噬细胞株确实与胶原蛋白海绵形成复合体;②扫描电镜下慢病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞(阳性组)较其他分组细胞密度增加,细胞出现球形、椭圆形及多边形分化,具有更多的伪足;③大体观察下总体7 d愈合好于4 d,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d愈合均好于其他分组;④苏木精-伊红染色、Masson染色下,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生;⑤免疫组化显示,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于其他分组;对照组及阴性组巨噬细胞无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于空白对照组,而对照组及阴性组之间无统计学差异;阳性组、阴性组、对照组无论4,7 d染色细胞数量均大于空白对照组,且阳性组>阴性组≈对照组>空白对照组;⑥提示在体内环境中miRNA-378a过表达巨噬细胞具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生,对组织修复起到了正向作用,并且能促进巨噬细胞向M2型极化并抑制M1型极化,从而有助于减少机体炎症反应。

关键词： miRNA-378a 慢病毒转染巨噬细胞极化免疫调节组织工程

重组慢病毒介导超极化激活的环核苷酸门控阳离子通道4基因转染BMSCs的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2013年第12期27卷 1512-1516页

作者：于风旭方易冰刘炫赖前成贾建博廖斌泸州医学院附属医院心胸外科四川泸州646000

目的探讨重组慢病毒（1entivirus，LVs）介导超极化激活的环核苷酸门控阳离子通道4（hyperpo。larization．activatedcyclicnucleotide．gatedcationchannel4，HCN4）基因转染大鼠BMSCs构建生物起搏细胞的可行性。方法选取3～5周龄SD大鼠，采用改良全骨髓贴壁培养法分离培养BMSCs。以LVs作为转染载体，增强绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP）为标记，构建LVs．HCN4．EGFP病毒液。取第3代BMSCs分别转染LVs—HCN4．EGFP病毒液（实验组）和LVs．EGFP空白病毒液（对照组），荧光显微镜观察转染24、48、72h后两组绿色荧光表达情况，72h时Westernblot检测HCN4蛋白表达；电生理检测实验组转染72h后BMSCs的起搏电流。结果实验组BMSCs形态正常、生长良好；48h后荧光显微镜下可见散在的绿色荧光，转染效率约10％；72h荧光表达稍增多，转染效率为20％～25％。对照组未见绿色荧光表达。Westernblot检测示转染72h后，实验组可见与HCN4蛋白相对分子质量相同的条带表达，而对照组仅有微弱表达；实验组蛋白条带灰度值为33．75±0．41，显著高于对照组的23．39±0．33（t=17．524，P=-0．013）。实验组转染后的BMSCs检测到起搏电流，并能被CsCl完全阻断，符合起搏电流特点。结论重组LVs介导HCN4基因成功转染大鼠BMSCs，并检测到HCN4蛋白表达及起搏电流。

关键词：超极化激活的环核苷酸门控阳离子通道4 BMSCs 慢病毒转染起搏电流

携带VEGF的慢病毒转染动物骨骼肌向海绵体结构转化的初步研究

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携带VEGF的慢病毒转染动物骨骼肌向海绵体结构转化的初步研究

作者：孙佳乐北京协和医学院

学位级别：硕士

目的:阴茎海绵体是明茎勃起功能的重要结构基础,各种先天性及获得性原因,均可导致阴茎的部分甚至全部病变、缺损,进而出现性功能障碍,探索重建阴茎海绵体的新方法对再造功能性阴茎具有重要意义。方法:前期工作中,采用自体组织股薄肌进... 详细信息

目的:阴茎海绵体是明茎勃起功能的重要结构基础,各种先天性及获得性原因,均可导致阴茎的部分甚至全部病变、缺损,进而出现性功能障碍,探索重建阴茎海绵体的新方法对再造功能性阴茎具有重要意义。方法:前期工作中,采用自体组织股薄肌进行阴茎再造,动物实验的结果证实了再造阴茎在电刺激下可较好的模拟勃起。在此基础上,进一步通过人VEGF165过表达的慢病毒基因载体(LV-GFP-HuVEGF165)转染实验动物犬再造阴茎的肌肉组织,通过神经电刺激对再造阴茎的长度、直径、硬度进行测量,与转染前实验数据进行对比,并观察组织形态学染色;LV-GFP-HuVEGF165转染大鼠腓肠肌,促使骨骼肌内细胞向平滑肌转变,同时进行诱导血管再生,通过免疫组化测定a-SMA,eNOS表达,探索骨骼肌向海绵体组织转化的可能。结果:经过LV-GFP-HuVEGF165转染的实验动物犬的再造阴茎的尺寸、硬度及对于神经刺激的反应与转染前无显著区别,且未造成肌肉组织坏死等不良影响;实验动物SD大鼠经过LV-GFP-HuVEGF165转染的骨骼肌,组织学显示骨骼肌内a-SMA表达阳性,出现类似平滑肌组织的结构,eNOS表达阳性,实验组血管密度明显高于阴性对照组及空白对照组。结论:转染病毒等犬股薄肌生理功能及形态不受影响;转染病毒的SD大鼠腓肠肌可诱导产生平滑肌组织和新生血管形成。

关键词：阴茎海绵体慢病毒转染平滑肌细胞血管内皮细胞

慢病毒介导NGF过表达转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究

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中国临床研究 2019年第2期32卷 145-149页

作者：邓明谢萍马永刚明江华周炎陈庆刘志勇刘世清武汉大学人民医院骨科湖北武汉430060 武汉市第三医院中医科湖北武汉430060 武汉大学人民医院风湿免疫科湖北武汉430060

目的探究慢病毒介导神经生长因子(NGF)过表达转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的作用。方法体外分离,培养人BMSCs,利用基因过表达技术,构建NGF过表达慢病毒载体转染BMSCs。根据转染情况分成3组,空白对照组(未转染慢病毒... 详细信息

目的探究慢病毒介导神经生长因子(NGF)过表达转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的作用。方法体外分离,培养人BMSCs,利用基因过表达技术,构建NGF过表达慢病毒载体转染BMSCs。根据转染情况分成3组,空白对照组(未转染慢病毒载体的BMSCs)、空白载体病毒组(转染不含NGF过表达慢病毒载体的BMSCs)和过表达载体病毒组(转染过表达NGF慢病毒载体的BMSCs)。利用流式细胞仪检测BMSCs的表面标记物,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测神经细胞表面蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE) mRNA及蛋白的表达。结果 (1) BMSCs的表面蛋白标记物CD44和CD29在第2代BMSCs的表达为60. 2%和58. 3%,CD34和CD45在第2代BMSCs的表达为3. 4%和2. 6%。(2)慢病毒转染效率为90%以上。转染效率较高。(3)空白对照组、空白载体病毒组和过表达载体病毒组的GFAP和NSE mRNA的相对表达量三组比较有统计学差异(P 病毒组和空白对照组的组间比较无统计学差异(P> 0. 05);过表达载体病毒组高于空白载体病毒组,组间比较有统计学差异(P 慢病毒介导NGF过表达转染促进BMSCs可以提高BMSCs向神经细胞转化的效率,可以为神经损伤和脊髓损伤提供种子细胞。

关键词：神经生长因子骨髓间充质干细胞慢病毒转染胶质纤维酸性蛋白神经元特异性烯醇化酶

小鼠脂肪源间充质干细胞的培养鉴定及增强绿色荧光蛋白-慢病毒载体转染

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新乡医学院学报 2013年第11期30卷 865-870页

作者：谢遂亮杨达胜毕凌云胡丹新乡医学院第一附属医院儿科河南卫辉453100 新乡市中心医院儿科河南新乡453000

目的探索脂肪源间充质干细胞（ADMSCs）的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数（MOI），并鉴定其感染后的增殖能力，为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪... 详细信息

目的探索脂肪源间充质干细胞（ADMSCs）的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数（MOI），并鉴定其感染后的增殖能力，为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪组织，差速贴壁法培养分离昆明小鼠脂肪源间充质干细胞。经细胞培养液洗涤、离心后接种于细胞培养瓶，放置体积分数5％CO2孵箱中培养，24h后换液，以后每3d更换培养基，待细胞融合达到约90％时，传代培养。取第3代ADMSCs用流式细胞术（FCM）检测其表型、茜素红染色及油红O染色鉴定其多向分化潜能；用携带增强绿色荧光蛋白（EGFP）的慢病毒载体（LV）感染ADMSCs，FCM检测病毒感染效率，四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色法检测感染后的细胞活力。结果（1）差速贴壁法培养分离7-11d时细胞融合达80％以上。原代细胞融合达80％～90％进行1：4传代，细胞贴壁和生长速度快于原代细胞培养。第3代及再传代细胞形体趋于一致，细胞呈梭形。细胞连续传代10次，生长速度未见明显减缓；（2）FCM检测第3代细胞CD29阳性表达98．93％，CD34阳性表达0．17％；（3）第3代细胞成脂诱导14d油红O染色阳性，成骨诱导14d茜红染色阳性；（4）当MOI=25感染第3代细胞72h后，共聚焦荧光显微镜观察细胞EGFP阳性表达60％～70％，细胞活力不受影响；（5）MrIT法显示重组慢病毒转染细胞与未转染慢病毒细胞比较，细胞增殖能力无差异。结论从昆明小鼠腹股沟脂肪组织中分离的ADMSCs可在体外稳定传代；差速贴壁法可以简便、高效地提取ADMSCs；携带EGFP的LV可有效感染ADMSCs，并且感染后其增殖能力不受影响。

关键词：脂肪源间充质干细胞原代细胞培养生物学特性慢病毒转染小鼠

慢病毒载体介导Shh基因转染雪旺细胞移植修复脊髓损伤的实验研究

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慢病毒载体介导Shh基因转染雪旺细胞移植修复脊髓损伤的实验研究

作者：唐浩帅天津医科大学

学位级别：硕士

【目的】脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）后的神经功能恢复一直是困扰医学界的难题,其中轴突的再生和髓鞘化是突破这一难题的重要修复方式,本研究通过慢病毒介导音猥因子（Sonic Hedgehog,Shh）转染大鼠雪旺细胞,持续稳定分泌Shh因... 详细信息

【目的】脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）后的神经功能恢复一直是困扰医学界的难题,其中轴突的再生和髓鞘化是突破这一难题的重要修复方式,本研究通过慢病毒介导音猥因子（Sonic Hedgehog,Shh）转染大鼠雪旺细胞,持续稳定分泌Shh因子,同时促进雪旺细胞的增殖活性以及分泌神经营养因子功能,移植稳定表达Shh因子的雪旺细胞于脊髓损伤部位,探讨Shh因子联合雪旺细胞在修复脊髓损伤中的作用及其发挥协同作用的相关机制,为细胞移植联合基因修饰促进SCI修复提供新策略。【方法】1.大鼠雪旺细胞的分离、培养和鉴定:本研究选取出生后3-5天的SD（Sprague Dawley）大鼠,在其坐骨神经中分离雪旺细胞（Schwann Cells,SCs）,通过双酶消化和差速贴壁对雪旺细胞进行分离、培养以及纯化,S-100免疫荧光对雪旺细胞进行鉴定。2.慢病毒转染雪旺细胞及筛选:构建p LVX-IRES-Puro-Shh慢病毒表达载体,将纯化后的雪旺细胞传代至6孔板中加入病毒工作液,转染成功后加入嘌呤霉素筛选出稳定表达Shh因子的雪旺细胞（S-SCs）。3.检测细胞活性及表达因子:利用MTT法进行细胞活性测定,绘制细胞生长曲线;多时间点ELISA法检测Shh因子及BDNF、NGF的表达水平的变化。4.动物模型的建立及移植后行为学评价:雌性SD大鼠（240±10g）,8周龄,采用Impactor Model II打击系统,建立脊髓挫伤模型,大鼠SCI后7天,在损伤部位进行移植。行为学评价包括SCI后当天以及SCI后12周内每隔2周对各组大鼠进行BBB评分,评估各组大鼠后肢功能的恢复情况。5.移植后损伤区域神经细胞改变:SCI后第12周,通过NF200标记轴突,损伤中心横切染色,观察脊髓损伤局部轴突改变情况;SCI后第2、12周,通过Nestin标记神经干细胞、Olig2标记少突胶质细胞前体细胞、GFAP标记星形胶质细胞,损伤中心横切染色,观察神经细胞的增殖和分化情况。6.移植后损伤区域白质和髓鞘改变:SCI后第2、12周,各组大鼠以损伤部位为中心进行横切,行甲苯胺蓝染色,高倍镜下观察损伤局部的白质和髓鞘改变。【结果】1.细胞形态与生长情况观察:经筛选后转染Shh因子的雪旺细胞符合典型雪旺细胞特征,S-100染色观察转染Shh因子雪旺细胞与正常细胞形态一致。纯化培养后光镜下观察各组雪旺细胞生长情况,S-SCs组细胞密度高于SCs组与V-SCs组,慢病毒转染后未对细胞生长产生负担。2.细胞增殖活性及表达因子检测:通过MTT法检测发现细胞增殖曲线为指数型,S-SCs组细胞增殖活性高于V-SCs组和SCs组,无负代谢影响,其差异具有统计学意义（P＜0.05）;通过ELISA法进行不同时间点Shh、BDNF和NGF含量检测,S-SCs组明显高于SCs组和V-SCs组,可持续稳定分泌至第8周。3运动功能评价:脊髓损伤后12周内对动物进行BBB评分,各组大鼠后肢功能均有恢复,在损伤后第12周,与DMEM移植组和SCs移植组相比,S-SCs移植组BBB评分最高,其差异具有统计学意义（P＜0.01）,S-SCs移植组更好的促进了大鼠后肢的运动功能恢复。4.移植后损伤区域神经细胞改变:免疫荧光染色结果显示,与SCs移植组组和DMEM移植组相比,S-SCs移植组的损伤中心NF200阳性细胞数最多（P＜0.01）;在损伤后第2周和12周,免疫荧光染色结果显示损伤中心Nestin阳性细胞、损伤中心及周围白质的Olig2阳性细胞数,S-SCs移植组最多,SCs移植组和DMEM移植组较少（P＜0.01）;损伤后第2周,损伤区域GFAP阳性细胞数DMEM移植组多于SCs移植组和S-SCs移植组（P＜0.05）,至第12周S-SCs移植组GFAP阳性细胞数最少,其差异具有统计学意义（P＜0.01）。5.移植后损伤局部白质和髓鞘的改变:在SCI第2周时,各组SCI中心白质区损伤严重;第12周时,DMEM组白质区域神经纤维结构不清,排列紊乱;而S-SCs组白质区域神经纤维结构清晰,可见囊性结构中有髓鞘出现,与DMEM组相比可明显改善SCI后损伤面积,减少慢性期的空洞形成。【结论】1.雪旺细胞通过慢病毒转染Shh基因后,能够持续、稳定表达Shh因子,提高雪旺细胞的增殖活性以及神经营养因子BDNF、NGF的表达水平,并且其效果具有长期稳定的特征。2.脊髓损伤局部移植持续稳定表达Shh因子的雪旺细胞,较单纯移植SCs或DMEM,可显著减少损伤区域胶质瘢痕形成,促进损伤区域轴突再生和髓鞘化,促进大鼠后肢功能恢复。3.Shh因子能够增强雪旺细胞的自身活性,并维持稳定表达,通过基因修饰手段将雪旺细胞与Shh因子联合,优势互补,产生协同作用,在损伤后激活内源性神经细胞,促进神经干细胞向少突胶质细胞方向分化,保护轴突并促进轴突的再髓鞘化,为基因修饰联合细胞移植修复脊髓损伤提

关键词：脊髓损伤音猥因子慢病毒转染雪旺细胞神经营养因子细胞移植