慢病毒介导NGF过表达转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究

作     者：邓明 谢萍 马永刚 明江华 周炎 陈庆 刘志勇 刘世清 DENG Ming;XIE Ping;MA Yong-gang;MING Jiang-hua;ZHOU Yan;CHEN Qing;LIU Zhi-yong;LIU Shi-qing

作者机构：武汉大学人民医院骨科湖北武汉430060 武汉市第三医院中医科湖北武汉430060 武汉大学人民医院风湿免疫科湖北武汉430060 

出 版 物：《中国临床研究》 (Chinese Journal of Clinical Research)

年 卷 期：2019年第32卷第2期

页      面：145-149页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81802203) 中央高校基本科研业务费专项资金(2042017KF0139) 

主　　题：神经生长因子 骨髓间充质干细胞 慢病毒转染 胶质纤维酸性蛋白 神经元特异性烯醇化酶 

摘      要：目的探究慢病毒介导神经生长因子(NGF)过表达转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的作用。方法体外分离,培养人BMSCs,利用基因过表达技术,构建NGF过表达慢病毒载体转染BMSCs。根据转染情况分成3组,空白对照组(未转染慢病毒载体的BMSCs)、空白载体病毒组(转染不含NGF过表达慢病毒载体的BMSCs)和过表达载体病毒组(转染过表达NGF慢病毒载体的BMSCs)。利用流式细胞仪检测BMSCs的表面标记物,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测神经细胞表面蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE) mRNA及蛋白的表达。结果 (1) BMSCs的表面蛋白标记物CD44和CD29在第2代BMSCs的表达为60. 2%和58. 3%,CD34和CD45在第2代BMSCs的表达为3. 4%和2. 6%。(2)慢病毒转染效率为90%以上。转染效率较高。(3)空白对照组、空白载体病毒组和过表达载体病毒组的GFAP和NSE mRNA的相对表达量三组比较有统计学差异(P 0. 05);过表达载体病毒组高于空白载体病毒组,组间比较有统计学差异(P 0. 05)。Western blot检测蛋白表达量也具有同样的表达特点。结论慢病毒介导NGF过表达转染促进BMSCs可以提高BMSCs向神经细胞转化的效率,可以为神经损伤和脊髓损伤提供种子细胞。