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天青b对淀粉样前体蛋白代谢和Aβ生成的影响

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重庆医科大学学报 2021年第5期46卷 522-525页

作者：燕燕崔传举李艾帆郑州市第一人民医院神经内科郑州450000

目的:探究天青b对淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)代谢及β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)生成的影响。方法:用天青b处理能稳定表达APP695基因的Neuron-2a细胞(N2a-APP695)。利用Western blot检测APP、可溶性APPα(soluble APPα,sAPPα)和β-分泌酶1(β-site APP cleaving enzyme 1,bACE1)的水平,利用ELISA检测Aβ的水平。采用bACE1酶活性检测试剂盒检测bACE1酶活性的抑制。采用t检验分析各组数据。结果:(1)天青b在5、10、15、20μmol/L的终浓度下不会影响N2a-APP695细胞的活力。(2)ELISA检测结果显示天青b能够降低Aβ1-40(P=0.002)和Aβ1-42(P=0.036)的水平。(3)Western blot检测结果显示天青b能够降低全长APP(P=0.018)和sAPPα(P=0.006)蛋白的水平,但不影响bACE1蛋白的水平(P>0.05)。(4)bACE1酶活性检测试剂盒检测结果显示天青b能降低bACE1的活性,其活性抑制率为66.0%(P=0.000)。结论:天青b通过抑制APP的表达和bACE1的活性从而抑制Aβ的生成。

关键词：天青b 淀粉样前体蛋白代谢 β淀粉样蛋白

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不同瑞氏染液天青b含量及染色效果观察

河北医科大学学报 2000年第3期21卷 176-176页

作者：刘永春李顺义郝冀洪王崇李彦会河北医科大学第二医院检验科石家庄050000

血涂片染色是医学检验中最常用、最重要的项目,染色剂中染料的质量,特别是天青b的含量可直接影响染色结果,ICSH推荐使用罗(Romanowsky)氏染色法,目前国内多采用瑞(Wright)氏染色法.为此,作者对5个厂家生产的不同批号瑞氏染料进行天青b... 详细信息

血涂片染色是医学检验中最常用、最重要的项目,染色剂中染料的质量,特别是天青b的含量可直接影响染色结果,ICSH推荐使用罗(Romanowsky)氏染色法,目前国内多采用瑞(Wright)氏染色法.为此,作者对5个厂家生产的不同批号瑞氏染料进行天青b含量分析及染色效果的观察,供国内实验室应用时参考.

关键词：集落计数微生物染色法天青b 血涂片染色

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分光光度法测定饮料中六偏磷酸钠添加剂

分析化学 2009年第9期37卷 1345-1348页

作者：赵希娟李春梅黄承志李原芳西南大学化学化工学院发光与实时分析教育部重点实验室

在pH8.6的Tris-HCl缓冲溶液中,六偏磷酸钠使天青b在溶液中发生聚集,溶液由天蓝色逐渐变为紫色,体系的吸光度降低,光散射增强。在优化条件下,在6.0×10-7～1.0×10-5mol/L范围内,天青b在602nm处的吸光度降低与六偏磷酸钠浓度呈良好的线... 详细信息

在pH8.6的Tris-HCl缓冲溶液中,六偏磷酸钠使天青b在溶液中发生聚集,溶液由天蓝色逐渐变为紫色,体系的吸光度降低,光散射增强。在优化条件下,在6.0×10-7～1.0×10-5mol/L范围内,天青b在602nm处的吸光度降低与六偏磷酸钠浓度呈良好的线性关系,检出限(3σ)为5.3×10-7mol/L。对浓度为5.0×10-6mol/L的六偏磷酸钠溶液平行测定11次,其相对标准偏差为2.5%。本方法用于饮料中添加剂六偏磷酸钠含量的分析,平均标准加入回收率为99.5%～112.3%,可实现六偏磷酸钠的可视化半定量检测。

关键词：紫外-可见分光光度法光散射天青b 六偏磷酸钠

超高效液相色谱-串联质谱联用法对水产品中亚甲基蓝及其代谢物残留的检测

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分析测试学报 2009年第1期28卷 32-36页

作者：杨方范克伟刘正才吴德峰林永辉陈健陈国南福建出入境检验检疫局福建福州350001 福州大学食品安全分析与检测技术教育部重点实验室福建福州350003 福建农林大学动物科学学院福建福州350003

建立了超高效液相色谱-串联质谱同时检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物天青A、天青b、天青C残留的方法。试样中的残留药物采用离子对试剂提取,正己烷脱脂净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定。对前处理及液相色谱分离条件进行了探讨与优化... 详细信息

建立了超高效液相色谱-串联质谱同时检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物天青A、天青b、天青C残留的方法。试样中的残留药物采用离子对试剂提取,正己烷脱脂净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定。对前处理及液相色谱分离条件进行了探讨与优化。4种分析物在0.25～50μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,方法定量下限可达0.5μg/kg。在0.5、1.0、5.0μg/kg范围内,平均加标回收率为80%～91%;相对标准偏差为6.38%～9.41%。方法灵敏、稳定,可满足水产品中亚甲基蓝及其代谢物残留的检测与确证及对药物动力学研究的需要。

关键词：亚甲基蓝天青A 天青b 天青C 残留水产品超高效液相色谱-质谱联用仪

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共振光散射双波长比率法在生物药物高分子和分子簇的表征和分析中的应用

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共振光散射双波长比率法在生物药物高分子和分子簇的表征和分析中...

作者：隆异娟西南师范大学

学位级别：硕士

1993年Pasternack等人首次提出共振光散射(resonance light scattering,RLS)技术,用于生物大分子组装化学以来,共振光散射技术因其实验仪器简单,方法灵敏度高而倍受广大化学研究者关注。在近10年来发展迅速,已成为超分子化学、物理化学... 详细信息

1993年Pasternack等人首次提出共振光散射(resonance light scattering,RLS)技术,用于生物大分子组装化学以来,共振光散射技术因其实验仪器简单,方法灵敏度高而倍受广大化学研究者关注。在近10年来发展迅速,已成为超分子化学、物理化学和分析化学领域中强有力的分析技术。本文在本体实验的基础上,提出了RLS双波长比率法。具体内容如下: 1.键那绿b与黄原胶作用的光散射表征及分析应用,主要结果如下: 在pH9.62水溶液中,黄原胶与染料探针键那绿b(Janus green blue,JGb)发生静电作用,产生了以328.5nm为特征峰的共振光散射(RLS)光谱。此波长下,增强的共振光散射强度(ΔI)与一定黄原胶浓度具有线性关系。据此建立了痕量黄原胶的共振光散射分析方法。当键那绿b的浓度为2.2×10mol/L时,测定黄原胶的检测限为12.24ng/ml。 2.提出了RLS比率法,并将此方法应用于一系列阳离子型染料在肝素分子的聚集研究及其分析应用,结合颗粒粒度分析和RLS成像测定了这些染料分子及它们与肝素形成的复合物的颗粒粒度,研究了RLS产生机理。主要内容是: (1) 以肝素(heparin,Hep)与JGb为例,本文通过对生物高聚药物与染料的反应,本文发展了双波长共振光散射比率法(dual-wavelengths resonance lighting scattering ratiometric method)和吸收比率法(absorbance ratiometric method)。在水溶液中,Hep能与JGb相互反应,并在紫外—可见光区产生增强的RLS信号。通过测量285.0nm和345.0nm处的RLS强度比(I)和吸收值比(A),可以在较长的动态范围内对Hep含量进行检测。当JGb浓度固定在1.00×10mol L,

关键词：共振光散射技术双波长比率法凝聚态键那绿b 肝素黄原胶亚甲基兰天青A 天青b 水-乙醇水-甲醇

有序介孔碳修饰电极在电化学生物传感器中的应用研究

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有序介孔碳修饰电极在电化学生物传感器中的应用研究

作者：方珏东北师范大学

学位级别：硕士

有序介孔碳具有巨大的表面积、狭窄的孔径分布、规则的孔道排列等特点,使其在生物医药领域显示了广泛的应用前景,因此受到越来越多的关注。本文中我们采用XRD、TEM、SEM和N2吸附技术对所得的碳材料进行了形态表征。首先,我们采用电化... 详细信息

有序介孔碳具有巨大的表面积、狭窄的孔径分布、规则的孔道排列等特点,使其在生物医药领域显示了广泛的应用前景,因此受到越来越多的关注。本文中我们采用XRD、TEM、SEM和N2吸附技术对所得的碳材料进行了形态表征。首先,我们采用电化学方法将吩噻嗪染料天青b (Ab)聚合到有序介孔碳(OMC)修饰的玻碳电极(GCE)表面,制得聚天青b/有序介孔碳复合材料(PAb/OME/GCE)修饰电极,并且用循环伏安法和扫描电子显微镜等手段对所得的新纳米复合材料进行表征。结果显示,将该纳米复合材料应用于NADH的电化学催化显示出了良好的性能,将电位降低到+0.045 V,线性范围为3.00 1000 ?M,检出限达到0.10 ?M。该NADH传感器能有效降低检测过程中的过电位并成功消除尿酸、多巴胺和抗坏血酸的干扰。我们用相同的方法对OMC/GCE和PAb/GCE电极做了比较,结果表明这种新的纳米复合材料显示出更好的电活性、选择性以及线性范围。其次,我们采用浸渍法将葡萄糖氧化酶(GOD)吸附在有序介孔碳修饰的电极表面(GOD/OMC/GCE),然后又在其表面覆盖了一层二茂铁丙酮溶液,最终成功构建了一种新的电流型葡萄糖生物传感器。结果表明,该修饰电极Fc/GOD/OMC/GCE对葡萄糖有很好的电催化活性,对葡萄糖的检测线性范围为5.00 ?M 10.00 mM,检出限为1.03±0.15??M (S/N=3)。同时对该修饰电极的选择性与稳定性也做了讨论。

关键词：有序介孔碳天青b 葡萄糖氧化酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸葡萄糖

亚甲基蓝在日本鳗鲡体内代谢和残留消除规律研究

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亚甲基蓝在日本鳗鲡体内代谢和残留消除规律研究

作者：吕新美上海海洋大学

学位级别：硕士

亚甲基蓝是一种噻嗪类染料,在水产养殖过程中常被用作孔雀石绿和硝基呋喃等禁用药物的替代物,作为杀菌剂和解毒剂使用,用来治疗水霉病、小瓜虫病、红嘴病以及亚硝酸盐中毒。虽然日本的肯定列表和欧盟的指令等一些法规暂时并没有把亚甲... 详细信息

亚甲基蓝是一种噻嗪类染料,在水产养殖过程中常被用作孔雀石绿和硝基呋喃等禁用药物的替代物,作为杀菌剂和解毒剂使用,用来治疗水霉病、小瓜虫病、红嘴病以及亚硝酸盐中毒。虽然日本的肯定列表和欧盟的指令等一些法规暂时并没有把亚甲基蓝列为禁用药物,但是国外的一些研究表明,亚甲基蓝具有高毒、致畸、致癌、致突变的作用。由于其大量使用、滥用,对养殖的水产动物造成了一定的毒副作用。所以美国、日本等国家未允许亚甲基蓝在水产养殖中的使用。日本规定亚甲基蓝的最大残留限量是10μg/kg,而欧盟制定的其作为消毒剂使用的最终浓度为0.4 mg/kg。中国并没有规定亚甲基蓝在水产品中的残留限量。目前关于亚甲基蓝的研究主要是其在人类医学中的应用和在环境污染中关于亚甲基蓝的吸附等,而关于亚甲基蓝的药代动力学研究很少,而且大部分是关于亚甲基蓝在哺乳动物中的残留消除规律的研究,在水产养殖中仅仅是研究亚甲基蓝或亚甲基蓝及其代谢物的检测方法。本文建立了高效液相色谱亚甲基蓝及其代谢产物(天青A、天青b、天青C)的检测方法,并对高效液相色谱仪的检测波长、流动相等仪器条件、前处理方法进行了优化,提高了亚甲基蓝及其代谢产物(天青A、天青b、天青C)在组织中的提取率,为研究其在日本鳗鲡组织中的残留消除规律奠定基础。在亚甲基蓝的药浴浓度为10 mg/L和20 mg/L的条件下,用建立的亚甲基蓝及其代谢产物(天青A、天青b、天青C)检测方法测定日本鳗鲡血液及肝脏、肾脏、皮肤、肌肉组织中亚甲基蓝及其代谢产物(天青A、天青b、天青C)的含量,用DAS 3.0药动学软件分析药时数据。实验结果表明天青C在血液及各组织中均未被检测出。10 mg/L药浴浓度组,亚甲基蓝、天青A、天青b在日本鳗鲡血浆中的达峰时间分别为0.25、8、0.25 h,达峰浓度分别为205.6、15.8、160.4μg/L。20 mg/L药浴浓度组,亚甲基蓝、天青A、天青b在日本鳗鲡血液中的达峰时间分别为0.5、12、0.5 h,达峰浓度分别为435.7、35.7、340.3μg/L。日本鳗鲡肝脏、肾脏、皮肤、肌肉组织中的亚甲基蓝、天青A、天青b浓度水平的数据表明,无论是10 mg/L药浴浓度组还是20 mg/L的药浴浓度组,亚甲基蓝、天青A、天青b在日本鳗鲡四种组织中的最高浓度顺序均为肾脏>肝脏>肌肉>皮肤。在药浴浓度10 mg/L条件下,亚甲基蓝、天青A、天青b在日本鳗鲡肝脏、肾脏、皮肤、肌肉组织中的消除半衰期、达峰时间都显著的快于20 mg/L药浴浓度组。实验还发现,不同的亚甲基蓝的药浴浓度,其在日本鳗鲡肝脏、肾脏、皮肤、肌肉组织中的代谢规律是基本相似的,均是随着药浴浓度的升高,各组织中亚甲基蓝、天青A、天青b的浓度均是随时间的延长呈先升高后降低的趋势。本文还运用转录组学方法在一定程度上从分子水平上阐述了亚甲基蓝在日本鳗鲡组织中的代谢机制。构建了日本鳗鲡肝组织cDNA文库通过高通量RNA测序得到亚甲基蓝药浴后的日本鳗鲡的差异表达基因,共获得28,850个,其中上调的差异表达的基因23,032个,下调的差异表达的基因5,818个。然后将差异表达的基因进行GO富集分析、KEGG pathway富集分析,qPCR验证,结果表明,差异表达的基因主要参与的代谢通路有物质能量代谢通路如:柠檬酸循环,碳代谢、嘧啶代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢等;药物代谢通路,主要是药物代谢酶细胞色素P450酶;异物的化学致癌作用,如:转化生长因子-β信号通路(TGF-beta signaling pathway)、WNT信号通路、Jak-STAT信号通路,GnRh信号通路等。这些通路都是参与细胞凋亡的过程。本实验通过转录组学方法解析亚甲基蓝在日本鳗鲡组织中的代谢途径,为亚甲基蓝代谢机理的阐明提供了理论的参考。

关键词：亚甲基蓝天青A 天青b 天青C 残留消除规律转录组

催化光度法测定痕量甲醛和亚硝酸根的研究与应用

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催化光度法测定痕量甲醛和亚硝酸根的研究与应用

作者：霍欢湘潭大学

学位级别：硕士

甲醛的应用范围十分广泛。在纺织品工业中大量用于纺织品处理上;在有机合成工业中,它是重要的原料;酚醛树脂等甲醛衍生物,是家具制造的重要材料;在制药行业,化妆品行业中,它是有效的消毒剂和防腐剂。然而另一方面,甲醛是典型的空气,环... 详细信息

甲醛的应用范围十分广泛。在纺织品工业中大量用于纺织品处理上;在有机合成工业中,它是重要的原料;酚醛树脂等甲醛衍生物,是家具制造的重要材料;在制药行业,化妆品行业中,它是有效的消毒剂和防腐剂。然而另一方面,甲醛是典型的空气,环境污染和工业污染来源。世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)2004年发布的第153号公报指出,甲醛会导致人类致癌。亚硝酸根是氮循环中活跃的中间体,氨氧化不完全或硝酸根还原不完全都可以产生亚硝酸根,广泛存在于环境,水体,食品,医药等物质中,在食品工业和工业水处理中,亚硝酸盐是常用的防腐剂。它可与胺类及酰胺类反应生成致癌物亚硝胺。甲醛和亚硝酸根所带来的潜在的毒性已经引起了人们的极大关注,在更大的范围内控制它们的浓度水平的法令框架已经在大多数发达国家强制执行。对二者的检测不仅是食品、水质等领域检测的重要指标,而且对生命科学有着重要的意义。催化光度法属于分析化学中动力学分析的一个重要分支,具有仪器设备简单,操作简便,灵敏度高的优点,寻找高灵敏且稳定的催化体系对甲醛和亚硝酸根的测定具有实际意义。本论文筛选了可能反应的几种醌亚胺类染料作为还原剂,以溴酸钾作为氧化剂,在酸性介质中基于甲醛和亚硝酸根对反应的催化作用,建立了测定甲醛和亚硝酸根的新方法。实验对反应温度,反应时间,介质以及试剂用量进行了优化,并对反应机理进行了探讨。结果表明这些方法具有较高的灵敏度,应用于食品和水样中甲醛和亚硝酸根的测定,结果满意。本论文主要研究内容如下: 1、研究了在硫酸介质中,甲醛对溴酸钾氧化天青A的催化作用,据此建立了测定甲醛的新催化光度法。其最大吸收波长为610nm,线性范围为0.035～0.66 mg/L,线性回归方程为ΔA=0.074 CHCHO (mg/L) +0.351,相关系数为0.9991,检出限为0.016mg/L。首次测定了一次性纸杯浸出液中甲醛含量,测得甲醛含量均低于WHO饮用水甲醛标准,可以安全使用。 2、研究了在硫酸介质中,甲醛对溴酸钾氧化天青b的催化作用,据此建立了测定甲醛的新催化光度法。其最大吸收波长为590nm,线性范围为0.096～0.24mg/L,线性回归方程为ΔA=3.752CHCHO(mg/L)-0.341,相关系数R为0.9998,检出限为1.3×10mg/L。用于米粉、粉丝等食品中甲醛含量的检测,加标回收率为98.5%～101.2%。 3、研究了在硫酸介质中,亚硝酸根对溴酸钾氧化灿烂甲酚蓝的催化作用,据此建立了测定亚硝酸根离子的催化动光度法。体系的最大吸收波长为630nm,测定亚硝酸根的线性范围为4×10～0.200mg/L,线性回归方程为ΔA=0.645C(mg/L) +0.279,相关系数为0.9944,检出限为2.9×10 mg/L。用于测定环境水样中亚硝酸根含量,加标回收率为97.5%～102.5%。 4、研究了在醋酸介质中,亚硝酸根对溴酸钾氧化硫酸耐尔蓝应的催化作用,据此建立了测量亚硝酸根的催化光度法。其最大吸收波长为640nm,线性范围为4×10～0.240mg/L,线性回归方程为ΔA= 0.850C (mg/L)+0.0268,相关系数为0.9997,检出限为3.5×10mg/L。用于环境水样中亚硝酸根含量的测定,加标回收率为95.0%～100.0%。

关键词：催化光度法甲醛亚硝酸根天青A 天青b 灿烂甲酚蓝耐尔蓝

水产品中亚甲基蓝及其代谢物多残留检测方法的研究

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水产品中亚甲基蓝及其代谢物多残留检测方法的研究

作者：范克伟福建农林大学

学位级别：硕士

亚甲基蓝属噻嗪类染料,在兽医中主要用作消毒剂与解毒剂。由于其对防治淡水鱼的水霉病、红嘴病、小瓜虫病等都有很好的疗效,自从孔雀石绿、结晶紫等三苯甲烷类染料被禁用于水产养殖后,亚甲基蓝成了一种较好的替代品。由于研究发现这种... 详细信息

亚甲基蓝属噻嗪类染料,在兽医中主要用作消毒剂与解毒剂。由于其对防治淡水鱼的水霉病、红嘴病、小瓜虫病等都有很好的疗效,自从孔雀石绿、结晶紫等三苯甲烷类染料被禁用于水产养殖后,亚甲基蓝成了一种较好的替代品。由于研究发现这种染料及代谢物有致畸作用,且在日本与美国,并未允许用于水产养殖,其在水产品中的残留受到广泛重视。目前有关亚甲基蓝检测方法包括分光光度法、液相色谱法及毛细管电泳等,主要针对亚甲基蓝原药,同时检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物天青A,天青b,天青C残留的文献未见报道。因此,有必要对水产品中亚甲基蓝及代谢物的检测进行研究。本文对高效液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用法测定水产品中亚甲基蓝及其代谢物进行了研究和比较。高效液相色谱法的检出限为2.0μg/kg。但其不能够定性被测物质,往往会因为阳性物质的误认导致定量测定存在误差。液质联用法的检出限是1.0μg/kg。其质谱检测器的灵敏度相比较高效液相的检测器的高,可以大大的提高检测的稳定性、准确性、重现性、检出限。首先,比较了不同的还原剂以及酸碱对亚甲基蓝稳定性的影响,发现无色亚甲基蓝常温下就比较容易被氧化为亚甲基蓝,亚甲基蓝在酸性条件下相对稳定。同时,还比较了不同的温度条件、不同的加热时间等对人工投药白鲫鱼及小白鼠样品中亚甲基蓝及其代谢物稳定性的影响,发现样品中先加入5mL对甲苯磺酸-乙酸铵缓冲溶液(PH3.0)70℃恒温水浴加热15min,再按原方法进行处理可以明显提高亚甲基蓝的回收率。其次,对高效液相色谱仪的检测波长、色谱柱、流动相等仪器条件,以及液相色谱质谱联用仪的色谱柱、柱温、流动相、梯度洗脱条件、质谱参数等仪器条件进行了优化,使仪器达到最佳状态。在优化样品前处理条件方面,通过比较不同提取剂和不同提取方法等的提取效果,确定了乙腈-对甲苯磺酸-乙酸铵缓冲溶液为提取溶液,样品匀浆3min后,在温度70℃超声15 min的提取方法,提取液经正己烷除脂,二氯甲烷反提取,Supelco DSC-MCAX固相萃取小柱提纯与净化,优化了洗脱液,讨论了有无过膜的影响;在高效液相色谱法分别对空白活鳗、黄鱼、虾样品进行了0.005、0.020和0.50mg/kg 3个水平加标回收试验,方法回收率在75.9%～93.2%之间,相对标准偏差为3.33%～11.86%,方法检出限为2.0μg/kg,符合组织样品处理的真实度和精密度;对于液相色谱质谱联用方法分别对空白活鳗、烤鳗、黄鱼、虾样品在1.0、2.0、4.0、10.0μg/kg 4个不同浓度水平上分别进行加标回收实验,方法回收率为75.58%-101.26%,相对标准差为3.02%-12.27%,方法检出限为1.0ug/kg,说明该法精密度好、稳定可靠。最后,对人工投药白鲫鱼和小白鼠样品进行检测分析,阳性率几乎达100%,验证了方法的实用性。

关键词：亚甲基蓝天青A 天青b 天青C 水产品液相色谱法液相色谱串联质谱联用法