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双甲脒及其代谢物DPMF杀螨活性差异机制研究

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双甲脒及其代谢物DPMF杀螨活性差异机制研究

作者：蔡萍西南大学

学位级别：硕士

朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)具有体积小、繁殖速度快、生活周期短、环境适应性强等特点,能在短期内爆发成灾,造成严重的经济损失。双甲脒(Amitraz)是一种甲脒类杀螨剂,主要用于防治蜱虫、粉虱、介壳虫等,对叶螨的整个... 详细信息

朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)具有体积小、繁殖速度快、生活周期短、环境适应性强等特点,能在短期内爆发成灾,造成严重的经济损失。双甲脒(Amitraz)是一种甲脒类杀螨剂,主要用于防治蜱虫、粉虱、介壳虫等,对叶螨的整个发育阶段的螨态均具有良好防效。DPMF(N-(2,4-Dimethylphenyl)-N-methyformamidine)是双甲脒的一种活性代谢物,对牛蜱虫有更好的杀虫活性。双甲脒被广泛用于防治植食性叶螨,而代谢物DPMF的杀螨活性相关研究还未被报道。因此,本文以一种重要的农业害螨朱砂叶螨为研究对象,在室内生物测定确定双甲脒和DPMF杀螨活性存在差异的基础上,通过增效剂实验、靶标敏感性检测、分子对接等方法从代谢和靶标两个层面对其差异机制进行研究。主要研究内容和结果如下:1.双甲脒和DPMF的杀螨活性测定及增效剂实验使用药膜法对朱砂叶螨进行室内毒力测定,结果表明DPMF和双甲脒对朱砂叶螨的致死中浓度(medium lethal concentration,LC)分别为6.37 mg/L和26.18mg/L,DPMF的杀螨活性优于双甲脒,且前者的杀螨活性约是后者的4.11倍。分别用三种增效剂胡椒基丁醚(PBO)、脱叶磷(DEF)和顺丁烯二酸二乙酯(DEM)抑制三大解毒酶(P450,CCE和GST)后,用双甲脒和DPMF测定其对朱砂叶螨的毒力变化。结果表明,三种增效剂PBO、DEF、DEM对双甲脒的增效比(SR)为0.96、0.97、1.08;三种增效剂PBO、DEF、DEM对DPMF的增效比(SR)为0.90、0.96、0.86。抑制三大解毒酶后,双甲脒和DPMF的杀螨活性无显著变化,表明两者的活性差异可能与代谢酶解毒能力差异无关。2.朱砂叶螨TcOctβ2R对双甲脒和DPMF敏感性分析在前期研究鉴定出朱砂叶螨章鱼胺受体TcOctβ2R是双甲脒作用靶标的基础上,进一步通过哺乳动物异源表达系统和环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)测定技术对激动剂双甲脒和DPMF进行体外活性测定。结果表明,双甲脒和DPMF均能激活TcOctβ2R,诱导细胞内产生c AMP;双甲脒和DPMF有效中浓度(medium effective concentration,EC)分别为75.3 n M和8.71 n M,DPMF的激动效力约是双甲脒的8.65倍。同时,测定两种激动剂章鱼胺(octopamine,OA)和多巴胺(dopamine,DA)对TcOctβ2R的活力,结果表明OA也能有效的激活TcOctβ2R,引起细胞内c AMP水平的提高,但多巴胺并无此反应;章鱼胺的有效中浓度(EC)为158 n M。根据激动效果,DPMF>双甲脒>章鱼胺,表明相比于母体化合物双甲脒和内源性激动剂章鱼胺,代谢物DPMF能够更有效的激活TcOctβ2R。3.朱砂叶螨TcOctβ2R蛋白与双甲脒和DPMF的结合模式分析根据已有朱砂叶螨TcOctβ2R蛋白序列,通过SWISS-MODEL软件对其进行三维结构建模。接着用Autodock对TcOctβ2R蛋白模型和两种配体化合物分别进行分子对接分析。结果显示,双甲脒与TcOctβ2R的自由结合能为-5.78 Kcal/mol,DPMF的自由结合能为-6.23 Kcal/mol,表明DPMF与TcOctβ2R的结合能力比双甲脒更强,这与生物测定的结果一致。对结合模式进行分析,双甲脒和DPMF与TcOctβ2R均以氢键和疏水相互作用结合。双甲脒以氢键作用力分别与TcOctβ2R上Asp109、Ser113、Try407结合;DPMF与Asn106、Ser187、Lys189结合,推测结合位点的不同是双甲脒和DPMF杀螨活性不同的原因。4.朱砂叶螨章鱼胺受体TcOctβ2R突变功能分析利用重叠延伸PCR技术对朱砂叶螨章鱼胺受体TcOctβ2R基因进行定点突变,琼脂糖凝胶电泳和测序结果均显示在体外成功构建I39F突变(微小扇头蜱I61F的同源突变)。构建突变重组表达载体pc DNA3.1(+)-TcOctβ2R,在HEK-293细胞中瞬时表达并测定c AMP浓度的变化。结果显示,相比于突变之前,转染了突变质粒载体的HEK-293细胞对DPMF、双甲脒和章鱼胺的敏感性均降低,DPMF(EC=16.9 n M)、双甲脒(EC=193 n M)和章鱼胺(EC=1208 n M)的激动效力分别降低了约1.94倍、2.56倍和7.65倍。此外,突变前DPMF的敏感性约是双甲脒的8.65倍,突变后两者敏感性提高至11.42倍,突变前后两者敏感性差异并无显著变化。利用分子对接技术,对配体和受体结合的自由结合能和相互作用力进行分析。结果显示,TcOctβ2R与双甲脒(-4.04 Kcal/mol)和DPMF(-4.68 Kcal/mo

关键词：朱砂叶螨双甲脒 DPMF 章鱼胺受体异源表达分子对接

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双甲脒杀螨活性靶标基因初步筛选

双甲脒杀螨活性靶标基因初步筛选

作者：张圆圆西南大学

学位级别：硕士

双甲脒(Amitraz)是一种广谱性甲脒类杀虫杀螨剂,对叶螨科各个发育阶段的螨态均有良好的防控效果,长期用于防治果树、蔬菜、茶叶、棉花、大豆、甜菜等作物上的害虫害螨,前期研究通过体外生理学实验发现双甲脒作用于无脊椎动物的章鱼胺受... 详细信息

双甲脒(Amitraz)是一种广谱性甲脒类杀虫杀螨剂,对叶螨科各个发育阶段的螨态均有良好的防控效果,长期用于防治果树、蔬菜、茶叶、棉花、大豆、甜菜等作物上的害虫害螨,前期研究通过体外生理学实验发现双甲脒作用于无脊椎动物的章鱼胺受体。朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)中存在多种类型的章鱼胺受体,各自参与的下游信号通路也有所不同,但具体哪一种章鱼胺受体是双甲脒的主要作用靶标并没有相关研究。因此,本论文以一种重要农业害螨朱砂叶螨为研究对象,克隆并筛选章鱼胺受体基因,通过分析其分子生物学特性和药理学性质,进行双甲脒敏感性检测和靶标结合位点预测,鉴定了双甲脒在朱砂叶螨体内的具体作用靶标。主要研究结果如下:1.朱砂叶螨章鱼胺受体基因Tc Octβ2R和Tc Tyr1R的克隆及序列分析通过分析和筛选朱砂叶螨转录组数据库和二斑叶螨基因组库,成功克隆获得朱砂叶螨章鱼胺受体基因Tc Octβ2R和Tc Tyr1R的c DNA全长序列。通过TMHMM软件预测发现,2条基因编码的氨基酸序列都具有7个疏水线性α-螺旋跨膜结构,属于典型的G蛋白偶联受体(guanine nucleotide-binding regulatory protein-coupled receptors,GPCRs)家族成员。与其他蜱、昆虫、螨的章鱼胺受体的多重序列比对结果显示这2条基因序列均具有相似的同源保守区域;通过与鞘翅目、双翅目、鳞翅目、半翅目、直翅目和膜翅目昆虫以及蛛形纲其他物种的章鱼胺受体进行系统发育分析,结果显示Tc Octβ2R和Tc Tyr1R分别与其他物种的Octβ2Rs和Tyr1Rs受体聚在一起,同源性较高,亲缘关系较近,证明Tc Octβ2R和Tc Tyr1R分别属于β2-adrenergic-like和OA/tyramine 1章鱼胺受体。2.双甲脒对朱砂叶螨的毒力测定及胁迫表达分析双甲脒对朱砂叶螨的毒力测定结果表明,双甲脒对朱砂叶螨的毒力效果较好,致死中浓度(lethal concentration 50%,LC)为25.02 mg/L。通过实时荧光定量PCR(Real Time Quantitative-Polymerase Chain Reaction,RT-q PCR)技术检测亚致死剂量的双甲脒胁迫处理朱砂叶螨后章鱼胺受体基因转录水平的变化,结果显示,仅Tc Octβ2R基因出现差异下调表达,且下调反应随双甲脒浓度升高而增强,推测该基因可能是双甲脒的靶标基因。而Tc Tyr1R基因在处理组和对照组之间并未出现差异表达,说明该基因对双甲脒并不敏感,推测其不是双甲脒的作用靶标。3.朱砂叶螨Tc Octβ2R和Tc Tyr1R基因功能鉴定和对双甲脒的敏感性检测利用pc DNA3.1(+)质粒构建目的基因重组表达载体,在哺乳动物细胞中表达,章鱼胺受体的模式配体章鱼胺和酪胺均能够有效地激活Tc Octβ2R和Tc Tyr1R,并且其激活能力呈现出浓度依赖性,说明Tc Octβ2R和Tc Tyr1R均在HEK-293细胞和CHO细胞中实现了功能性表达。随后进行了章鱼胺受体对双甲脒的敏感性检测,双甲脒对Tc Octβ2R的激动能力大约是Tc Tyr1R的24倍(半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC):Tc Octβ2R(8.59×10M)>Tc Tyr1R(2.07×10M)),这表明相比于Tyr1型章鱼胺受体,双甲脒能够更好地激活朱砂叶螨Octβ2型章鱼胺受体,证明Octβ2型章鱼胺受体Tc Octβ2R可能是双甲脒主要的靶标基因。4.朱砂叶螨章鱼胺受体Tc Octβ2R和Tc Tyr1R与配体的结合位点分析将朱砂叶螨Tc Octβ2R和Tc Tyr1R构建三维结构模型,显示其具有7个α-螺旋结构,属于典型的GPCR结构。分子对接结果显示,Tc Octβ2R与双甲脒有着比其天然配体章鱼胺更好的结合模式,而Tc Tyr1R与双甲脒的结合强度弱于其天然配体,且双甲脒与Tc Octβ2R的结合强度高于Tc Tyr1R,进一步验证了Tc Octβ2R是双甲脒对朱砂叶螨的主要靶标基因;双甲脒通过氢键作用力与Tc Octβ2R三维结构模型上109位的天冬氨酸(Asp)结合,自由结合能为-6.90 Kcal/mol。章鱼胺受体的天然配体章鱼胺也在Asp109处形成了氢键,两者可能存在竞争结合。朱砂叶螨Tc Octβ2R与其他节肢动物多序列比对的结果,发现多物种在109位处的氨基酸残基都为天冬氨酸(D),推测Asp109是双甲脒作用于Tc Octβ2R的关键氨基酸位点。综上所述,本研究成功克隆并鉴定朱砂叶螨2条章鱼胺受体基因Tc Octβ2R和Tc Tyr1R,进而分析了双甲脒对朱砂叶螨的毒力效果、靶标基因和结合位点,证明了Tc Octβ2R是双甲脒对朱砂叶螨的靶

关键词：朱砂叶螨双甲脒章鱼胺受体真核表达分子对接

表面增强拉曼散射光谱结合化学计量学方法对蜂蜜中双甲脒的高效检测（英文）

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Chinese Journal of Chemical Physics 2019年第4期32卷 444-450,I0002页

作者：聂新明王静王勋田亚平陈斯龙洲洋宗成华江苏师范大学物理与电子工程学院徐州221116 江苏师范大学化学与材料科学学院徐州221116 江苏师范大学科文学院徐州221116

本文建立了一种灵敏、快速、环保的表面增强拉曼光谱(SERS)方法,以银纳米棒阵列为基底,测定了蜂蜜中微量的双甲脒.银纳米棒采用斜角沉积法制备,具有良好的SERS活性,增强因子为-10^7.利用密度泛函理论首先对双甲脒的特征峰进行了归属.进... 详细信息

本文建立了一种灵敏、快速、环保的表面增强拉曼光谱(SERS)方法,以银纳米棒阵列为基底,测定了蜂蜜中微量的双甲脒.银纳米棒采用斜角沉积法制备,具有良好的SERS活性,增强因子为-10^7.利用密度泛函理论首先对双甲脒的特征峰进行了归属.进一步探测了该方法用于双甲脒检测的可行性,其对蜂蜜中双甲脒的最低检测浓度为0.08mg/kg.另一方面,采用偏最小二乘回归分析方法,对SERS全波谱进行分析并与双甲脒的浓度进行关联,建立了一种多元的双甲脒预测模型.结果表明,蜂蜜样本中双甲脒的预测浓度与实际浓度吻合较好.与传统的基于SERS单峰强度的单变量定量模型相比,本文提出的多元预测模型综合了双甲脒的所有特征峰,提高了检测精度和抗干扰能力.

关键词：双甲脒表面增强拉曼光谱方法斜角沉积蜂蜜检测传感银纳米棒密度泛函理论偏最小二乘回归法

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双甲脒和伊维菌素防控猪疥螨病的效果比较

养殖与饲料 2022年第7期21卷 22-25页

作者：李铁梅董仲生何加俊荀来武何土开云南省大理市动物疫病预防控制中心云南大理671003 云南农业职业技术学院昆明650212

[目的]改进猪疥螨病的防控方法。[方法]选择有453个临床病例的6个繁殖母猪场,存栏猪分别采用:①口服伊维菌素1次;②双甲脒喷淋1次;③口服伊维菌素,第9天重复1次;④双甲脒喷淋,第7天重复1次;⑤口服伊维菌素,第7天双甲脒喷淋1次;⑥双甲脒... 详细信息

[目的]改进猪疥螨病的防控方法。[方法]选择有453个临床病例的6个繁殖母猪场,存栏猪分别采用:①口服伊维菌素1次;②双甲脒喷淋1次;③口服伊维菌素,第9天重复1次;④双甲脒喷淋,第7天重复1次;⑤口服伊维菌素,第7天双甲脒喷淋1次;⑥双甲脒喷淋,第9天口服伊维菌素1次等6种方法进行防治。[结果]第7天、第14天,6种方法均100%临床治愈;第21天,第①、②种方法处理的猪场,分别出现0.5%、1.6%的猪疥螨病临床发病率,病灶皮肤刮屑中能检出活疥螨,当天分别用第③、④种方法重新处理;在第1次处理后的第42天、第63天、第126天、第182天检查,6个猪场均无临床病例。[结论]采用③、④、⑤、⑥等4种方法,均可在猪场根治猪疥螨病,给猪场净化猪疥螨病提供了简便方法。

关键词：猪疥螨病双甲脒伊维菌素防控

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双甲脒防治猪疥螨病的试验

山东畜牧兽医 2022年第12期43卷 9-12页

作者：董仲生何土开唐跃华李铁梅荀来武何加俊云南农业职业技术学院云南昆明650212 云南省大理市动物疫病预防控制中心云南大理云南省大理市动物卫生监督所云南大理

为了克服猪疥螨病治愈后容易复发的问题。选择4个有猪疥螨病临床病例的猪场,预先处理猪舍环境,对猪舍和猪体喷淋0.05%双甲脒;并进行不重复、间隔7 d分别重复1、2次的对照试验。结果显示4个猪场,均在首次喷淋双甲脒后,病灶瘙痒加剧,持续... 详细信息

为了克服猪疥螨病治愈后容易复发的问题。选择4个有猪疥螨病临床病例的猪场,预先处理猪舍环境,对猪舍和猪体喷淋0.05%双甲脒;并进行不重复、间隔7 d分别重复1、2次的对照试验。结果显示4个猪场,均在首次喷淋双甲脒后,病灶瘙痒加剧,持续近1 h后症状逐渐减轻,随后瘙痒症状基本消失;第2天,病灶处炎症消退;第7天,病灶痂皮干缩,开始脱落,无蹭痒痕迹;第14、21、63、126、182天,4个场的存栏猪均无疥螨病临床病例。试验结果表明,预先处理好猪舍环境,并用0.05%双甲脒溶液一次将猪舍内、外及猪体喷透,可根治猪场的疥螨病。

关键词：猪疥螨病双甲脒防治试验观察

液相色谱-串联质谱法测定蜂王浆中双甲脒及其代谢物的残留量

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质谱学报 2019年第2期40卷 131-138页

作者：侯建波谢文曾淦宁张文华史颖珠钱艳周启令浙江省检验检疫科学技术研究院浙江杭州310016 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心浙江杭州310016 浙江工业大学海洋学院浙江杭州310014 浙江立德产品技术有限公司浙江杭州310016

采用固相萃取-液相色谱-串联质谱法(SPE-LC-MS/MS)测定蜂王浆中双甲脒、单甲脒、2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺的残留量。样品经氨水稀释、氨化乙腈沉淀蛋白并提取,通过中性Al_2O_3固相萃取柱净化,以液相色谱-串联质谱多反应监... 详细信息

采用固相萃取-液相色谱-串联质谱法(SPE-LC-MS/MS)测定蜂王浆中双甲脒、单甲脒、2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺的残留量。样品经氨水稀释、氨化乙腈沉淀蛋白并提取,通过中性Al_2O_3固相萃取柱净化,以液相色谱-串联质谱多反应监测正离子模式检测,同位素稀释内标法和外标法定量。结果表明,双甲脒、单甲脒、2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺的定量限分别为0.05、0.5、5.0和0.5μg/kg,在空白蜂王浆基质溶液0～300μg/kg范围内绘制线性工作曲线,线性相关系数大于0.997,对空白蜂王浆进行添加浓度5.0、10、100、200μg/kg的实验,总体回收率为50.5%～110%,相对标准偏差为0.8%～15.0%。该方法简便、快捷,定量限能够满足目前国内外残留限量要求,可为蜂王浆中双甲脒及其代谢物残留量的测定提供参考。

关键词：蜂王浆双甲脒代谢物液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)

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双甲脒防治牛疥螨病的试验

中国草食动物科学 2023年第3期43卷 81-84页

作者：杨茂生董仲生杨兴论毕健梁杨旭清云南省腾冲市畜牧工作站腾冲679100 云南农业职业技术学院昆明650212 云南省马龙县王家庄镇农业综合服务中心马龙655102 云南省大理市喜洲镇农业综合服务中心大理671004 云南省大理市畜牧兽医中心大理671003

为解决牛疥螨病治愈后容易复发、皮下注射应激反应较强的问题,选择1个有27例疥螨病的肉牛场,将其中的21头繁殖母牛随机分成A、B、C三组,6头育肥牛作为对照(D组),4个组的试验牛分别隔离到4个栏内饲养。用水泥填平牛舍墙壁、地面和饲槽等... 详细信息

为解决牛疥螨病治愈后容易复发、皮下注射应激反应较强的问题,选择1个有27例疥螨病的肉牛场,将其中的21头繁殖母牛随机分成A、B、C三组,6头育肥牛作为对照(D组),4个组的试验牛分别隔离到4个栏内饲养。用水泥填平牛舍墙壁、地面和饲槽等的缝隙,再清扫,冲洗干净。对牛舍环境和牛体均无死角喷淋0.05%双甲脒溶液。其中A组喷淋1次;B组间隔7 d,共喷淋2次;C组每次间隔7 d,共喷淋3次;D组只对牛体喷淋1次,不喷淋环境。结果表明,所有试验牛均在首次喷淋双甲脒后,病灶瘙痒加剧,约持续0.5 h后瘙痒症状缓解,第2天瘙痒症状消失;第7天脱毛的病灶长出新毛,病灶区无蹭痒痕迹;第14天和第21天,所有试验牛均表现出康复状态;第28天,D组中又发现有2个临床病例,全组按A组处理方法再处理1次。在第1次喷淋后的第63天和第126天,所有试验牛只均无疥螨病临床病例。说明预先处理好牛舍墙壁、地面和饲槽等的缝隙,清扫、冲洗后,再用0.05%双甲脒溶液将环境及牛体喷透1次,即可根治肉牛的疥螨病。

关键词：双甲脒牛疥螨病

分散固相萃取净化/液相色谱-串联质谱法同时测定蜂王浆中双甲脒、单甲脒及其代谢物

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分析测试学报 2019年第4期38卷 455-460页

作者：侯建波谢文钱艳史颖珠姚滨滨汪鹏盛涛浙江省检验检疫科学技术研究院浙江杭州310016 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心浙江杭州310016 浙江立德产品技术有限公司浙江杭州310016

建立了分散固相萃取净化/液相色谱-串联质谱(dSPE/LC-MS/MS)测定蜂王浆中双甲脒、单甲脒(DMPF)及其代谢物2,4-二甲基苯基甲酰胺(DMF)和2,4-二甲基苯胺(DMA)残留量的方法。样品经缓冲溶液(pH 9.0)稀释,乙腈和氯化钠进行蛋白沉淀、盐析提... 详细信息

建立了分散固相萃取净化/液相色谱-串联质谱(dSPE/LC-MS/MS)测定蜂王浆中双甲脒、单甲脒(DMPF)及其代谢物2,4-二甲基苯基甲酰胺(DMF)和2,4-二甲基苯胺(DMA)残留量的方法。样品经缓冲溶液(pH 9.0)稀释,乙腈和氯化钠进行蛋白沉淀、盐析提取后,通过N-丙基乙二胺(PSA)、C_(18)和无水硫酸镁进行分散固相萃取净化。净化液过0.22μm滤膜后,采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,以0.15%甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子方式扫描,多反应监测模式进行检测,同位素内标法定量。结果表明,双甲脒、DMPF、DMF和DMA的线性范围为0～100μg/kg,相关系数(r)大于0.996,方法定量下限(S/N=10)分别为0.10、0.25、5.0、2.5μg/kg。对空白蜂王浆进行5、10、20μg/kg浓度水平的加标实验,回收率为77.0%～107%,相对标准偏差为2.0%～11%。该方法简便、快捷,适用于蜂王浆中双甲脒、DMPF及其代谢物残留量的同时测定。

关键词：蜂王浆双甲脒单甲脒代谢物液相色谱-串联质谱法分散固相萃取

高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜水果中双甲脒及其代谢产物

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色谱 2019年第1期37卷 2-7页

作者：黄娟桂茜雯高玲张晓燕沈伟健吴斌丁涛南京海关动植物与食品检测中心江苏南京210019

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测蔬菜水果中双甲脒(AMZ)及其降解或代谢产物单甲脒(DMPF)、2,4-二甲基苯基甲酰胺(DMF)和2,4-二甲基苯胺(DMA)的分析方法。样品经0. 1 mol/L NaOH溶液稀释、正己烷-异丙醇(2∶1,v/v)混合提取... 详细信息

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测蔬菜水果中双甲脒(AMZ)及其降解或代谢产物单甲脒(DMPF)、2,4-二甲基苯基甲酰胺(DMF)和2,4-二甲基苯胺(DMA)的分析方法。样品经0. 1 mol/L NaOH溶液稀释、正己烷-异丙醇(2∶1,v/v)混合提取液提取,然后采用HPLC-MS/MS对目标物进行定性确证和定量分析。采用Pheno m enex Kinetex C18色谱柱(100 m m×4. 6 m m,2. 6μm)分离,以0. 1%(v/v)甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾电离(ESI)源、正离子监测模式进行检测。在1. 0～200. 0μg/L范围内,4种目标化合物呈良好的线性关系,相关系数(r)大于0. 99;方法的定量限为0. 01～0. 4μg/kg。4种目标化合物在0. 5、5. 0和20. 0μg/kg 3个水平下的加标回收率为62. 5%～105. 0%,RSD为7. 5%～17. 6%。该法简便快捷,准确可靠,灵敏度高,定量限满足目前国内外残留限量要求。

关键词：高效液相色谱-串联质谱代谢产物双甲脒单甲脒 2,4-二甲基苯基甲酰胺 2,4-二甲基苯胺蔬菜水果