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卵形鲳鲹肌肉细胞系的建立与应用

卵形鲳鲹肌肉细胞系的建立与应用

作者：张路珂中国农业科学院

学位级别：硕士

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus),属鲈形目(Perciformes)、鲹科(Carangidae)、鲳鲹属(Trachinotus),俗称金鲳、黄腊鲳,广泛分布于中国、澳大利亚和日本的温热带海域。卵形鲳鲹以其生长速度快、食性简单、肉质鲜美、容易饲养等优点,成为我... 详细信息

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus),属鲈形目(Perciformes)、鲹科(Carangidae)、鲳鲹属(Trachinotus),俗称金鲳、黄腊鲳,广泛分布于中国、澳大利亚和日本的温热带海域。卵形鲳鲹以其生长速度快、食性简单、肉质鲜美、容易饲养等优点,成为我国华南沿海地区重要的海水养殖鱼类之一。近年来,卵形鲳鲹养殖业发展迅速,然而随着养殖产业集约化程度的扩大和养殖密度的增加,由寄生虫、细菌和病毒引起的传染病频繁发生,造成严重的经济损失并制约卵形鲳鲹养殖业的发展。鱼类细胞系作为一种体外培养系统,因其具有成本低、试验重复性好、条件可精确控制的优点而成为该鱼种相关研究的重要工具。(1)本研究通过组织块贴壁法,以卵形鲳鲹肌肉组织为材料,建立了卵形鲳鲹肌肉细胞系(Golden pompano muscle cell line,GPM)。形态学观察结果显示GPM细胞在光学显微镜下呈纤维状,目前已连续稳定传至80余代。对GPM细胞的最适生长条件探究表明,GPM细胞的最适宜生长条件为:血清含量为20%,培养基类型为L-15。将扩增的COI(Cytochrome oxidase subunit I)基因片段和NCBI上已公布的卵形鲳鲹COI基因序列进行比对,结果显示两者的同源性为100%,证实GPM细胞来源于卵形鲳鲹。经核型分析实验发现,GPM细胞有非整倍体染色体数目出现,但依然保存了48条特征性染色体组型数。(2)通过脂质体转染技术,增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因成功在GPM细胞系中表达,转染效率约为60%,表明GPM细胞具有表达外源基因的能力,可用于体外基因功能研究。病毒敏感性实验显示GPM细胞对赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)敏感。此外,为评估宿主对RGNNV感染的免疫应答,检测了GPM细胞中6个免疫相关基因的转录水平。检测结果显示:6个基因在感染细胞中的表达水平均显著高于对照组(P卵形鲳鲹肌肉细胞凋亡、氧化应激和内质网应激(ERS)模型,探讨牛磺酸对高糖引起细胞不利表现的影响及作用机制。结果表明:牛磺酸能显著缓解高糖诱导的ADP/ATP比值和活性氧(ROS)水平的升高以及线粒体膜电位(MMP)的降低。对于线粒体相关基因,HG组OPA1和MFN2的m RNA水平显著降低,而HG+T组和对照组之间没有发现差异。高糖诱导细胞色素C(Cyt C)释放和细胞凋亡,牛磺酸可抑制细胞凋亡。高糖还通过增加葡萄糖摄取能力和影响糖原合成酶和糖原磷酸化酶的m RNA表达,导致细胞糖原累积,补充牛磺酸后有效缓解。采用尼罗红染色观察GPM细胞内脂质沉积情况,RT-q PCR检测内质网应激和脂代谢相关基因m RNA表达水平,结果显示ERS在GPM细胞脂质沉积过程被激活,HG+T组能够显著缓解高糖引起的脂质沉积。综上所述,牛磺酸有效缓解了GPM细胞中由高糖诱导的ERS、糖原累积、细胞凋亡和线粒体氧化应激。ROS的产生、GRP78/PERK、AMPK/PGC-1α信号通路和线粒体功能是牛磺酸在高糖条件下生物学效应的主要靶点。

关键词：卵形鲳鲹肌肉细胞系高糖牛磺酸氧化应激

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卵形鲳鲹腌制加工技术研究与即食产品开发

卵形鲳鲹腌制加工技术研究与即食产品开发

作者：张进伟上海海洋大学

学位级别：硕士

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus),俗称金鲳,在我国主要分布为东海、南海等,其肉质鲜嫩肥美,且无肌间刺,是海水养殖经济鱼种,广受消费者喜爱。随着卵形鲳鲹养殖产业的发展,其产量不断增加,多数为鲜鱼直销或冷冻销售,因此迫切需要改变原有... 详细信息

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus),俗称金鲳,在我国主要分布为东海、南海等,其肉质鲜嫩肥美,且无肌间刺,是海水养殖经济鱼种,广受消费者喜爱。随着卵形鲳鲹养殖产业的发展,其产量不断增加,多数为鲜鱼直销或冷冻销售,因此迫切需要改变原有的商品形式,提高其深加工程度,延长鱼肉的货架期。本研究以卵形鲳鲹原料,分析比较干腌法、湿腌法、超声波辅助腌制法对卵形鲳鲹理化指标及挥发性风味物质的影响,探究了卵形鲳鲹在腌制、风干过程中蛋白质氧化和游离氨基酸变化规律,最后研发即食腌鱼制品,优化了产品配方,并分析了其理化性质及挥发性风味物质。研究内容和结果如下:1、腌制方式对卵形鲳鲹理化指标及其挥发性风味成分的影响为了探究干腌、湿腌、超声波辅助腌制对卵形鲳鲹的理化特性及挥发性风味成分的影响,实验对腌制加工后鱼肉的基本营养成分、盐含量、p H、硫代巴比妥酸(TBA)值、脂肪酸组成及挥发性风味成分等指标进行测定分析。结果显示,在腌制加工后,卵形鲳鲹粗蛋白和粗脂肪含量升高、而水分含量下降。与卵形鲳鲹原料相比,干腌、超声波辅助腌制、湿腌鱼肉中盐含量增加,而鱼肉的p H值下降。在腌制加工后,卵形鲳鲹脂质发生氧化反应,TBA值增加,干腌、湿腌、超声波辅助腌制鱼肉的TBA值分别为(0.80±0.07)、(0.55±0.09)和(0.73±0.08)mg MDA/kg,饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸含量增加,而多不饱和脂肪酸含量减少。原料、干腌、湿腌、超声波辅助腌制鱼肉中分别检测出54、56、62和57种挥发性风味物质,主要为醛类、醇类和酮类。2、卵形鲳鲹在腌制风干过程中蛋白质氧化及游离氨基酸的变化为了探究卵形鲳鲹在腌制、风干过程中蛋白质氧化及游离氨基酸的变化规律,对腌制、风干过程中卵形鲳鲹质构特性、蛋白质二级结构、巯基含量、羰基含量、蛋白质水解指数、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱和游离氨基酸等指标进行测定分析。结果表明:卵形鲳鲹在腌制、风干过程中盐含量显著增加,水分含量下降,鱼肉的硬度增加,而弹性则先上升后下降。羰基含量显著增加,而巯基含量显著下降。蛋白二级结构中α-螺旋含量下降,而无规则卷曲含量增加。在加工过程中肌球蛋白重链条带明显变浅,表明肌原纤维蛋白发生降解。在加工过程中卵形鲳鲹蛋白质水解指数增加,总氮含量呈下降趋势,而在腌制后非蛋白氮含量下降,风干后非蛋白氮含量增加。游离氨基酸总量先增加而在风干后期下降,鲜味氨基酸、苦味氨基酸的含量呈现增加趋势。3、即食产品开发及其理化特性的研究本研究以卵形鲳鲹为原料,经腌制、风干、油炸等制备成即食腌鱼食品,以感官评价为评定指标,通过单因素试验及正交试验对其调味配方进行优化,结果表明:料酒添加量为16%、酱油添加量为5%、白糖添加量为4%、辣椒粉添加量为2%,产品感官评分最高。对该工艺条件下的产品的理化指标及挥发性风味物质进行测定,发现其水分含量为45.24%±0.39%,灰分含量为7.82%±0.31%,盐含量为(4.46±0.16g)/100 g,亚硝酸盐含量为(1.26±0.06)mg/kg,未检测出硝酸盐。挥发性风味物质共有132种,其中醛类、酮类、醇类、酯类、烃类、杂环类、酸类、其他类分别为15、13、20、11、32、22、8、11种,其中烃类物质含量最高约占挥发性风味物质总量的40.19%,其次为醇类和杂环类占比为23.31%和16.31%。

关键词：卵形鲳鲹腌制干制蛋白质挥发性风味物质

卵形鲳鲹促性腺激素释放激素基因的鉴定及其在生殖调控中的功能研究

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卵形鲳鲹促性腺激素释放激素基因的鉴定及其在生殖调控中的功能研...

作者：任席林广东海洋大学

学位级别：硕士

促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormone,GnRH)是生殖系统中重要的肽类激素,对动物性腺发育成熟和生殖行为起着十分重要的作用。卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是我国南方沿海重要的海产经济鱼类之一,但目前关于卵形鲳鲹的... 详细信息

促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormone,GnRH)是生殖系统中重要的肽类激素,对动物性腺发育成熟和生殖行为起着十分重要的作用。卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是我国南方沿海重要的海产经济鱼类之一,但目前关于卵形鲳鲹的繁殖生物学等研究比较薄弱。为了完善卵形鲳鲹繁殖生物学的调控机理,本研究以生殖调控最关键的因子GnRH为切入点,开展以下研究,结果如下:1.卵形鲳鲹gnrh基因的克隆和表达模式本研究在卵形鲳鲹中鉴定出三种gnrh基因亚型,分别为sbgnrh、cgnrh-Ⅱ和sgnrh。gnrh mRNA在卵形鲳鲹不同组织中的表达水平结果显示:三种gnrh基因均在雌雄卵形鲳鲹的脑中高表达。sbgnrh在所有组织中均有表达,显示出了广泛的组织分布模式;cgnrh-Ⅱ和sgnrh主要在脑中表达,在肾、肠、肌肉和鳃等组织中的表达相对较弱。2.GnRH多肽对fshβ和lhβmRNA的表达影响在体注射不同剂量的三种GnRH多肽,注射3 h后发现,10 ng/gbw和100 ng/gbw剂量的sbGnRH多肽对fshβ的表达有显著的促进作用。1 ng/gbw和10 ng/gbw剂量的sbGnRH多肽对lhβ的表达有显著的促进作用;100 ng/gbw的s GnRH多肽对fshβ和lhβ的表达有显著促进作用。注射6 h后,100 ng/gbw剂量的三种GnRH多肽均对fshβ的表达有显著的促进作用。1 ng/gbw和10 ng/gbw剂量的sbGnRH多肽对lhβ的表达有显著的促进作用,而100 ng/gbw剂量的sbGnRH多肽对lhβ的表达没有影响。100ng/gbw剂量的cGnRH-Ⅱ多肽对lhβ的表达有显著的促进作用。在离体实验中,孵育3 h和6 h后,10μM的sbGnRH多肽对fshβ和lhβ的表达均有显著促进作用。孵育3 h后,1μM和10μM的s GnRH多肽对fshβ的表达有显著的促进作用,孵育6 h后,10μM的cGnRH-Ⅱ多肽对fshβ的表达有显著促进作用,对lhβ的表达均无显著影响。3.雌激素/雄激素对GnRH的反馈调节作用不同浓度的雌激素和雄激素离体孵育卵形鲳鲹下丘脑,处理时间为3 h、6 h和12 h。结果表明,E呈剂量依赖性抑制sbgnrh的表达,而E对cgnrh-Ⅱ和sgnrh的表达没有显著的影响。同样,MT抑制sbgnrh的表达,但对cgnrh-Ⅱ和sgnrh的表达没有显著影响。4.sbGnRH多肽对肝脏生殖调控相关基因的表达影响10 ng/gbw sbGnRH多肽在体注射3 h后,转录组测序结果表明,检测出的99种差异表达基因,包括77个上调基因和22个下调基因。KEGG通路显示,差异表达基因主要富集在卵母细胞减数分裂、孕酮介导的卵母细胞成熟、GnRH信号通路、MAPK信号通路和mTOR信号通路等与生殖相关的信号通路中。其中vtg、cpeb1b、rps6ka3b和egr1等生殖调控相关基因表达水平显著上调。脂代谢结果显示,高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量增加。脂代谢酶活性结果表明,肝脏中肉毒碱脂酰转移酶的活性和肝脂酶活性增强,而乙酰辅酶A氧化酶、脂肪酸合成酶、肝脏脂肪酶和脂蛋白脂酶的活性降低。因此,sbGnRH能通过肝脏直接参与生殖调控。综上所述,在卵形鲳鲹中存在3中不同的GnRH亚型,均能促进fshβ和lhβ基因的表达,但显示出不同的作用效率;其中sbGnRH对GTHs的作用存在脱敏效应,并且在生殖调控过程中发挥最主要的作用;sbGnRH能通过肝脏直接参与生殖调控过程。

关键词：卵形鲳鲹 GnRH 反馈调节肝脏生殖调控

卵形鲳鲹黄嘌呤氧化酶抑制肽的制备及其工艺优化

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食品与发酵工业 2021年第23期47卷 185-192页

作者：侯梦凡胡晓杨贤庆陈胜军吴燕燕许加超中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003 中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部水产品加工重点实验室广东广州510300

以卵形鲳鲹为原料,采用不同蛋白酶对其进行水解以制备黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制肽。以水解度和XOD抑制活性为评价指标,在单因素试验的基础上结合响应面法优化了酶解法制备XOD抑制肽的工艺,并对酶解产物的分子质量分布和... 详细信息

以卵形鲳鲹为原料,采用不同蛋白酶对其进行水解以制备黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制肽。以水解度和XOD抑制活性为评价指标,在单因素试验的基础上结合响应面法优化了酶解法制备XOD抑制肽的工艺,并对酶解产物的分子质量分布和氨基酸组成进行了分析。结果表明中性蛋白酶为最适用酶,确立的最佳酶解工艺条件为:料液比1∶3(g∶mL),酶解温度54℃,pH 7.0,酶解3.85 h,加酶量0.19%。在此条件下测得水解度和XOD抑制活性值分别为11.82%和52.41%,与预测值基本一致。该法制备所得的XOD抑制活性肽主要以分子质量卵形鲳鲹的精深加工和高值化利用提供指导。

关键词：卵形鲳鲹黄嘌呤氧化酶抑制肽多肽酶解工艺肽分子质量氨基酸分析

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卵形鲳鲹细胞系稳定内参基因的筛选及应用

卵形鲳鲹细胞系稳定内参基因的筛选及应用

作者：赵娜海南大学

学位级别：硕士

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)养殖产业受细菌和病毒性疾病的影响较大,已成为制约其发展的重要因素之一。卵形鲳鲹吻细胞(Golden pompano snout cells,GPS cells)及头肾细胞系(Golden pompano head kidney cells,GPHK cells)已被证明是体外病原感染研究的重要工具。q RT-PCR因其灵活性、准确性、动态范围和高通量等特点,已作为一种分析目的基因表达的重要技术,其中相对定量实验需要稳定的内参基因来保证数据分析的准确性和可信度。然而到目前为止还没有发现有一种内参基因能应用于所有实验条件,因此筛选出特定条件下的稳定内参基因对卵形鲳鲹特定方向的分析具有重要意义。本研究以卵形鲳鲹GPS和GPHK细胞系为研究对象,从7个候选内参基因中(Actin、B2M、GAPDH、RPL13、EF1A、18S和UBCE),筛选出在正常生理条件下、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或多聚肌苷-多聚胞苷酸(Polyinosinicpolycytidylic acid,Poly I:C)刺激条件后的稳定内参基因。基于q RT-PCR实验得出的Ct值,利用ge Norm、Norm Finder和Best Keeper软件进行分析,以评估内参基因的稳定性,最后基于三种软件综合分析得出最稳定的内参基因。并利用筛选出的稳定内参基因或其它稳定内参基因以及最不稳定的内参基因作为参照基因,来分析两种不同刺条件下,GPS细胞系中干扰素刺激基因15(Interferon-stimulated gene 15,ISG15)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL2)的表达水平变化;GPHK细胞系中干扰素调节因子1和7(Interferon regulatory factor 1 and 7,IRF1和IRF7)的表达水平变化,从而验证所筛选的稳定内参基因的可靠性。实验结果表明,在正常生理条件下,GPS细胞系中内参基因的稳定性排名为:18S>GAPDH>UBCE>Actin>EF1A>B2M>RPL13;GPHK细胞中内参基因的稳定性排序为:RPL13>18S>EF1A>UBCE>Actin>B2M>GAPDH。在LPS刺激条件下GPS细胞系中内参基因的稳定性排序为:RPL13>Actin>EF1A>B2M>18S>UBCE>GAPDH;GPHK细胞系中内参基因的稳定性排序为:18S>Actin>UBCE>EF1A>RPL13>B2M>GAPDH。在Poly I:C刺激条件下GPS细胞系中内参基因的稳定性排名为:UBCE>Actin>18S>EF1A>RPL13>GAPDH>B2M;GPHK细胞系中内参基因的稳定性排序为:EF1A>Actin>RPL13>UBCE>18S>B2M>GAPDH。因此,在正常生理条件下,GPS和GPHK细胞中最稳定的内参基因分别是18S和RPL13。在LPS刺激2、4、8和12 h后,GPS细胞中最稳定的内参基因为RPL13;而GPHK细胞中最稳定的内参基因为18S。在Poly I:C刺激2、4、8和12 h后,GPS细胞中最稳定的内参基因为UBCE;而GPHK细胞中最稳定的内参基因分别EF1A。另外,稳定内参基因验证结果显示,在LPS或Poly I:C刺激条件下,若采用稳定的内参基因或其它稳定的内参基因作为参照基因时,目的基因ISG15、BCL2在GPS细胞系中的表达变化和IRF1和IRF7在GPHK细胞系中的表达变化呈现出一定的规律,且均有一定的上调。反之,如果选择不稳定的内参基因做参照基因时,ISG15、BCL2在GPS细胞系中的表达趋势和IRF1和IRF7在GPHK细胞系的表达趋势均有较大差异。综上所述,本研究以GPS和GPHK为研究对象,分析了正常生理条件下与LPS和Poly I:C刺激条件下的稳定内参基因,并使用已筛选出的稳定内参基因分析了免疫相关基因的表达水平变化,验证已筛选出的内参基因的可靠性。总之,本文对卵形鲳鲹不同细胞系在不同条件下的内参基因的稳定性进行了评估,研究结果可以为卵形鲳鲹在分子水平上的表达分析提供理论基础。

关键词：卵形鲳鲹细胞系内参基因 LPS PolyI:C

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不同干燥方式对卵形鲳鲹鱼片风味的影响

水产学报 2022年第7期46卷 1188-1200页

作者：吴燕燕陈茜石慧魏涯王悦齐上海海洋大学食品学院中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部水产品加工重点实验室

为探究不同方式干燥卵形鲳鲹鱼片的风味差异，实验选取冰鲜卵形鲳鲹为原料，采用热风干燥、热泵干燥和冷冻干燥3种方式干制卵形鲳鲹鱼片，分别测定并分析其TBA值、呈味核苷酸含量、游离氨基酸含量和挥发性风味物质等指标。结果显示，干... 详细信息

为探究不同方式干燥卵形鲳鲹鱼片的风味差异，实验选取冰鲜卵形鲳鲹为原料，采用热风干燥、热泵干燥和冷冻干燥3种方式干制卵形鲳鲹鱼片，分别测定并分析其TBA值、呈味核苷酸含量、游离氨基酸含量和挥发性风味物质等指标。结果显示，干燥后的卵形鲳鲹鱼片中TBA值与K值均显著上升，其中冷冻干燥鱼肉的TBA值仅比冰鲜鱼片增加1.6倍，但热泵干燥和热风干燥则分别增加了5.5和4.5倍。干燥后鱼肉中的总游离氨基酸含量及味精当量较冰鲜卵形鲳鲹鱼片显著降低，其中热风干燥鱼肉的味精当量则下降了50.83%。热泵干燥鱼肉中苦味氨基酸含量和鲜味氨基酸含量分别占总氨基酸含量的19.11%和7.37%，而冷冻干燥组鱼肉中甜味氨基酸相对百分含量最高，为53.62%。3种干燥方式中，热泵干燥卵形鲳鲹的味精当量最高，为4.47谷氨酸钠(MGS)/100 g，表明热泵干燥卵形鲳鲹鱼片的鲜味程度最高。就挥发性风味成分而言，热泵干燥鱼肉酯类和酮类较多，其主要呈现果香味和焙烤坚果味；热风干燥中烃类和芳香类的相对含量约占70%，醛类和酯类相对含量达20%；而冷冻干燥中烃类与芳香类相对含量占到90%以上，醛类和酯类相对含量不足8%，其风味较淡。研究表明，3种干燥方式的卵形鲳鲹鱼片均具有较好的食用品质，其中热泵干燥使鱼肉中的鲜味更为明显，而冷冻干燥能有效抑制和延缓鱼肉脂肪的氧化，更适合应用于脂肪含量较高的鱼肉中。本研究结果可为卵形鲳鲹轻便干燥食品加工提供技术参考。

关键词：卵形鲳鲹热风干燥热泵干燥冷冻干燥呈味核苷酸游离氨基酸挥发性成分

卵形鲳鲹鱼片热风干燥条件优化及其品质特性研究

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食品与发酵工业 2019年第17期45卷 129-135页

作者：石慧杨少玲吴燕燕林婉玲杨贤庆黄卉中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部水产品加工重点实验室广东广州510300 上海海洋大学食品学院上海201306

为丰富大宗养殖卵形鲳鲹的加工方式和技术,该文研究卵形鲳鲹鱼片的热风干燥技术,以感官评价、水分含量和复水率作为综合品质评分标准,分别对第一阶段干燥时间、温度,第二阶段干燥时间、温度等因素进行单因素实验,在此基础上进一步通过... 详细信息

为丰富大宗养殖卵形鲳鲹的加工方式和技术,该文研究卵形鲳鲹鱼片的热风干燥技术,以感官评价、水分含量和复水率作为综合品质评分标准,分别对第一阶段干燥时间、温度,第二阶段干燥时间、温度等因素进行单因素实验,在此基础上进一步通过正交实验确定了最佳的热风干燥工艺条件,并分析最佳干燥条件下产品的品质特性。结果表明,最优的工艺条件为第一阶段干燥时间、温度为4h、80℃,第二阶段干燥时间、温度为2h、70℃。在此条件下干燥得到的卵形鲳鲹鱼片表面干燥,咀嚼性、硬度有所上升,色泽金黄,风味优良,综合评分为(62.54±2.62)。其水分含量为33.69g/100g,粗蛋白含量为38.52g/100g,粗脂肪含量为24.12g/100g。并发现其饱和脂肪酸降低了3.48%,单不饱和脂肪酸上升了9.35%,多不饱和脂肪酸下降了6.45%。该文创新地将两段式变温干燥应用到卵形鲳鲹加工上,并对干燥条件进行优化,为卵形鲳鲹等大宗养殖海水鱼类的工业化生产提供理论依据。

关键词：卵形鲳鲹热风干燥两段式干燥条件品质特性

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卵形鲳鲹幼鱼对叶酸的需要量

动物营养学报 2019年第9期31卷 4152-4161页

作者：黄倩倩林黑着黄忠周传朋虞为荀鹏伟杨育凯黄小林王珺王芸中国水产科学研究院南海水产研究所农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广州510300 上海海洋大学水产与生命学院上海201506 中国水产科学研究院南海水产研究所深圳实验基地深圳518121

本试验旨在研究饲料中叶酸水平对卵形鲳鲹(Trachinotusovatus)幼鱼生长性能、体成分、血清生化和免疫指标、肝脏抗氧化指标和叶酸积蓄量的影响,以确定卵形鲳鲹幼鱼对叶酸的需要量。试验选择平均初始体重为(7.77±0.10) g的健康卵形鲳鲹... 详细信息

本试验旨在研究饲料中叶酸水平对卵形鲳鲹(Trachinotusovatus)幼鱼生长性能、体成分、血清生化和免疫指标、肝脏抗氧化指标和叶酸积蓄量的影响,以确定卵形鲳鲹幼鱼对叶酸的需要量。试验选择平均初始体重为(7.77±0.10) g的健康卵形鲳鲹幼鱼525尾,随机分成7组,每组3个重复,每个重复25尾。各组分别投喂叶酸水平依次为0.31(对照)、0.94、1.76、2.83、4.20、5.69和6.32 mg/kg的7种试验饲料。试验期8周。结果表明:1) 4.20 mg/kg组卵形鲳鲹幼鱼的增重率和特定生长率显著高于对照组(P卵形鲳鲹幼鱼的生长性能,增强机体的免疫力和抗氧化能力。以增重率和肝脏叶酸积蓄量作为评价指标,通过回归分析得出卵形鲳鲹对饲料中叶酸的需要量分别为4.53和4.94 mg/kg。

关键词：卵形鲳鲹叶酸生长性能肝脏抗氧化能力需要量

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卵形鲳鲹耐低氧性状遗传基础研究

卵形鲳鲹耐低氧性状遗传基础研究

作者：伞利择河北农业大学

学位级别：硕士

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)作为中国南方沿海地区重要的经济鱼类之一,具有重要的经济价值。由于有害藻华的暴发、潮水交换不及时和寄生虫爆发等原因造成的水体缺氧时有发生,给卵形鲳鲹养殖业造成了巨大的经济损失。卵形鲳鲹养殖多采... 详细信息

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)作为中国南方沿海地区重要的经济鱼类之一,具有重要的经济价值。由于有害藻华的暴发、潮水交换不及时和寄生虫爆发等原因造成的水体缺氧时有发生,给卵形鲳鲹养殖业造成了巨大的经济损失。卵形鲳鲹养殖多采用海上网箱养殖方式,当水体溶解氧水平下降时,对于开放式水域并没有很好的抢救措施,因此选育有较强耐低氧能力的卵形鲳鲹具有重要意义。随着高通量测序技术的发展,分子标记辅助育种广泛应用在水产动物选择育种中,相比较传统的育种方法它具有育种周期短、育种成本低和准确性高等优点。本研究基于卵形鲳鲹重测序技术采用全基因组关联分析的方法对耐低氧性状进行关联分析,筛选与耐低氧性状显著关联的分子标记(SNP和InDel),并对不同低氧处理时间的鳃组织进行转录组分析,进一步从分子的角度解析低氧胁迫对卵形鲳鲹的影响,以期为卵形鲳鲹耐低氧性状的遗传改良提供重要的技术支撑。其主要结果如下:(1)本研究中以卵形鲳鲹在低于窒息点的溶解氧环境中的存活时间作为衡量其耐低氧能力的指标,对500尾卵形鲳鲹进行耐低氧能力的测定。按照其死亡先后顺序分为两组,死亡顺序的前10%为低氧敏感组,后10%为低氧耐受组。将两组100尾卵形鲳鲹进行基因组重测序,采用全基因组关联分析的方法挖掘与卵形鲳鲹耐低氧性状显著关联的SNP,并对潜在的候选基因挖掘。研究结果表明,4个SNP标记与卵形鲳鲹耐低氧性状显著关联。通过对显著性SNP位点上下游50 Kb的区域注释与耐低氧性状相关的候选基因,共检测到16个与耐低氧性状相关的候选基因。并且,在验证群体中,4个与耐低氧性状显著关联的SNP位点中的3个SNP位点不同基因型的个体的存活时间差异显著,与全基因组关联分析结果一致。3个SNP位点中,SNP24101852和SNP24194184不同基因型个体的存活时间差异极显著(P卵形鲳鲹基因组重测序数据,通过比较敏感组和耐受组的InDel数据,挖掘与耐低氧性状显著关联InDel位点,并探讨与耐低氧性状相关的候选基因。结果表明,测序共获得693.48 Gb数据,其中Q30的平均值为90.8%,注释分析发现了共2574178个InDel位点。敏感组所特有的InDel位点共249395个,其中有2209个位于外显子上,发现在核苷酸切除修复信号通路和细胞黏着分子中存在变异基因。通过将InDel位点与耐低氧性状关联分析,结果发现了 3 个 InDel 位点(InDel22883061,InDel24919481 和 InDel14451779)接近显著性阈值,另外对InDel位点进行注释分析获得了 9个候选基因。筛选到的InDel位点对后期分子标记选择育种的选择和鉴定有重要价值。(3)本研究为了探究低氧环境影响卵形鲳鲹生命活动的分子机制,对正常氧组、低氧处理组和溶解氧恢复组3组不同时间点卵形鲳鲹的鳃组织进行转录组测序,分析了卵形鲳鲹在不同低氧环境下鳃组织的基因表达模式。研究结果发现,低氧处理8h的差异表达基因数量最多,是卵形鲳鲹受到低氧胁迫的关键时间点。低氧胁迫后,趋化因子、趋化因子受体、白细胞介素、补体因子等免疫因子相关基因显著下调,这可能是鱼类在缺氧环境下易受病原体感染的原因。通过对差异表达基因进行KEGG通路分析,许多下调的基因显著富集在类固醇生物合成、黏着斑以及细胞外基质-受体相互作用信号通路中,这些信号通路影响细胞信号转导、黏附和凋亡。与低氧处理组相比,溶解氧恢复组中与吞噬和蛋白降解相关基因的表达量上调,糖酵解途径相关基因的表达量下调。这些结果表明,在溶解氧水平恢复后,鱼体通过快速去除错误折叠的蛋白质来修复低氧引起的损伤,糖酵解途径在低氧胁迫过程中为鱼体提供能量发挥重要作用。这些结果为进一步了解卵形鲳鲹适应缺氧环境机制提供了依据。

关键词：卵形鲳鲹全基因组关联分析分子标记 SNP InDel 转录组分析