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血管生成素样蛋白4通过促进表皮干细胞增殖和迁移加速小鼠皮肤创面再上皮化

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血管生成素样蛋白4通过促进表皮干细胞增殖和迁移加速小鼠皮肤创...

作者：杨元扬州大学

学位级别：硕士

皮肤组织中的表皮干细胞具有自我更新和增殖、分化能力,是表皮层稳态维持和损伤修复的关键细胞。但目前对表皮干细胞自我更新和增殖的调控机制尚不完全清楚。血管生成素样蛋白4(Angiopoietin-like 4,ANGPTL4)是一种分泌蛋白,文献报道Ang... 详细信息

皮肤组织中的表皮干细胞具有自我更新和增殖、分化能力,是表皮层稳态维持和损伤修复的关键细胞。但目前对表皮干细胞自我更新和增殖的调控机制尚不完全清楚。血管生成素样蛋白4(Angiopoietin-like 4,ANGPTL4)是一种分泌蛋白,文献报道Angptl4基因敲除小鼠的角质细胞迁移能力和分化能力降低,皮肤创面愈合过程中再上皮化延迟。我们推测ANGPTL4可能通过调控表皮干细胞的增殖和迁移影响皮肤创面的再上皮化和愈合。目的利用Angptl4基因敲除小鼠和离体培养的表皮干细胞,通过整体和离体实验,明确ANGPTL4在小鼠皮肤创面再上皮化中的作用,探究ANGPTL4发挥作用的机制。方法利用皮肤活检打孔器小鼠背部制备全层皮肤缺损创面。通过H&E染色观察创面再上皮化情况。通过免疫组化染色检测ANGPTL4、细胞增殖标志分子(PCNA)及表皮干细胞标志分子(β1整合素、α6整合素)在皮肤组织中的表达。分离、培养小鼠皮肤表皮干细胞。通过流式细胞术检测表皮干细胞的标志分子和细胞周期分布。通过MTT实验及BrdU掺入实验检测表皮干细胞增殖。采用RT-PCR和Western Blot检测细胞周期蛋白表达。通过体外培养细胞划痕实验检测表皮干细胞的迁移。结果免疫组化染色显示,在皮肤创面愈合过程中,ANGPTL4的表达在创面周围表皮的基底层细胞中显著增加。Angptl4基因敲除延缓了小鼠皮肤创面的愈合。H&E染色显示ANGPTL4缺失导致小鼠皮肤创面再上皮化受损,包括创面周围新生表皮层的厚度、长度和面积都显著小于野生型小鼠。免疫组化染色检测PCNA、β1整合素、α6整合素表达细胞,结果显示在皮肤创面愈合过程中,ANGPTL4缺失小鼠创面周围新生表皮的基底层表皮干细胞数量和增殖都显著低于野生型小鼠。在分离培养的小鼠表皮干细胞,发现ANGPTL4缺失显著降低表皮干细胞的增殖能力,使G1期细胞增多,G2期细胞减少,细胞周期蛋白D1和A2的表达降低。通过在ANGPTL4缺失的表皮干细胞转染ANGPTL4表达质粒回补ANGPTL4能使G1期细胞减少,S期细胞增多,细胞周期蛋白D1和A2的表达升高。此外,ANGPTL4的缺失抑制了表皮干细胞的迁移,这也能通过ANGPTL4的过表达得到逆转。通过转染ANGTPL4表达质粒在野生型表皮干细胞过表达ANGPTL4能显著促进表皮干细胞增殖和迁移。结论ANGPTL4在皮肤损伤后表达升高,通过上调细胞周期蛋白D1和A2的表达加速细胞周期G1/S期转换,从而促进表皮干细胞增殖。ANGPTL4通过刺激表皮干细胞增殖和迁移促进皮肤创面再上皮化。本研究揭示了 ANGPTL4是参与皮肤创面愈合过程中表皮干细胞激活和再上皮化的新分子。

关键词：血管生成素样蛋白4 创面愈合再上皮化表皮干细胞细胞增殖细胞迁移细胞周期蛋白

富血小板血浆通过促进再上皮化加速皮肤创面愈合

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中华烧伤杂志 2021年第1期37卷 452-452页

作者：宋菲(编译) 董叫云(审校) Xu PC Wu YG Zhou LN Department of Burn and Plastic Surgery General Hospital of Southern Theater Command PLA Guangzhou China Department of Dermatology Southwest Hospital Third Military Medical University (Army Medical University) Chongqing China Department of Endocrinology Southwest Hospital Third Military Medical University (Army Medical University) Chongqing China State Key Laboratory of Trauma Burn and Combined Injury Institute of Burn Research Southwest Hospital Third Military Medical University (Army Medical University) Chongqing 400038 China Chongqing Key Laboratory for Disease Proteomics Chongqing 400038 China

自体富血小板血浆(PRP)已被证明对创面愈合有效,然而有证据显示PRP在伴急慢性创面患者中的使用是不足的。本研究目的是深人研究PRP对急性皮肤创面修复的有效性和协同作用,并探讨其可能的机制。在C57/BL6小鼠背部制作全层皮肤缺损创面,... 详细信息

自体富血小板血浆(PRP)已被证明对创面愈合有效,然而有证据显示PRP在伴急慢性创面患者中的使用是不足的。本研究目的是深人研究PRP对急性皮肤创面修复的有效性和协同作用,并探讨其可能的机制。在C57/BL6小鼠背部制作全层皮肤缺损创面,分别将PRP或生理盐水作用至创面区域。在伤后第3、5、7、14天观测创面愈合率及局部炎症、血管生成、再上皮形成和胶原沉积情况。在体内外研究中进一步探讨表皮干细胞(ESC)的生物特点,其具备促进表皮再上皮化的能力。

关键词：局部炎症上皮形成再上皮化富血小板血浆表皮干细胞胶原沉积 C57/BL6小鼠全层皮肤缺损

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组织工程气管再上皮化的研究进展

中华胸心血管外科杂志 2018年第3期34卷 180-183页

作者：陈帅杨文龙史宏灿仲毅扬州大学临床医学院胸心外科江苏省中西医结合老年病防治重点实验室扬州大学转化医学中心 225001

当气管缺损超过成人气管总长度的50％以及婴儿气管长度30％以上时往往需要人工气管来修补。现已被采用的气管替代方案，包括自体移植物、同种异体移植物、假体或其组合等，均具有包括炎症、感染等的局限性。随着近年来组织工程（TE）的... 详细信息

当气管缺损超过成人气管总长度的50％以及婴儿气管长度30％以上时往往需要人工气管来修补。现已被采用的气管替代方案，包括自体移植物、同种异体移植物、假体或其组合等，均具有包括炎症、感染等的局限性。随着近年来组织工程（TE）的快速发展，研究人员开始着手利用由聚合物或同种异体移植物制成的支架来修补气管缺损。鉴于上皮在气管中至关重要的作用，气管移植物上皮化已逐渐成为组织工程气管重建研究的重点，本文将结合目前组织工程气管上皮化的相关研究进行综述。

关键词：人工气管再上皮化组织工程同种异体移植物自体移植物气管长度气管缺损气管替代

转录因子FoxO3a在慢性创面中的表达及其对人角质形成细胞再上皮化的作用及机制研究

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转录因子FoxO3a在慢性创面中的表达及其对人角质形成细胞再上皮化...

作者：刘婷中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景:皮肤是人体最大的器官,其作为环境保护屏障,承担着感觉、吸收、分泌、排泄和保护等重要的生理功能,参与体内多种代谢过程,维持内环境的稳定。因此,皮肤完整性一经破损就需要立刻修复以恢复其功能。而基于烧伤、烫伤、血管病变... 详细信息

研究背景:皮肤是人体最大的器官,其作为环境保护屏障,承担着感觉、吸收、分泌、排泄和保护等重要的生理功能,参与体内多种代谢过程,维持内环境的稳定。因此,皮肤完整性一经破损就需要立刻修复以恢复其功能。而基于烧伤、烫伤、血管病变引发的皮肤溃疡、压疮、糖尿病溃疡足等由于内、外在因素作用下而引起的大面积皮肤完整性缺损,创面发生病理性炎症反应,不能通过正常的修复程序实现愈合,进而导致愈合缓慢或不愈,引起患者严重伤残或死亡,同时给患者家庭带来沉重的经济负担。因而,寻找针对慢性创面的诊断和治疗靶点,是该领域亟待解决的关键科学问题。创面修复涉及一系列复杂的事件,包括炎症、角质细胞迁移、增殖、肉芽组织形成和基质重塑等诸多生理过程,这些事件与转录因子（愈合过程中的关键分子）、效应基因及其蛋白质产物（包括细胞因子IL-1,IL-6）、生长因子（TGF、EGF、KGF、PDGF、FGF）、蛋白水解酶及其抑制剂（即基质金属蛋白酶MMPS/TIMPS）和细胞外基质成分（胶原,透明质酸）等密切相关。尽管在过去的几年中,一些效应基因及其蛋白产物已经被鉴定出来,但对皮肤创面愈合过程的转录调控的了解却少之又少。转录因子是创伤反应中微调基因表达的关键分子,通过促进或抑制下游靶基因转录,进而调控创面边缘角质形成细胞再上皮化,影响创面愈合。转录因子FoxO3a（Forkhead box O3a）基因定位于人染色体6q21上,编码673个氨基酸,其转录活性受磷酸化、乙酰化、泛素化和甲基化等多种翻译后修饰作用所调节。FoxO3a在人体内分布广泛,在皮肤角质形成细胞及成纤维细胞中均有表达,与细胞衰老密切相关,随着年龄的增长,皮肤中FoxO3a的表达逐渐增加。既往文献报道,FoxO3a是一个参与多种细胞关键信号通路的重要转录因子,通过与其它转录因子的相互作用,整合不同信号参与内环境稳定的调控,在细胞、组织与胚胎的发育、卵泡的成熟、葡萄糖内稳态、细胞增殖与凋亡、DNA的损伤修复等过程中发挥着重要作用。在肿瘤发生过程中,FoxO3a作为抑癌基因,通过促进肿瘤细胞凋亡、抑制增殖及控制肿瘤细胞分化、抑制血管生成、调节其它抑癌基因表达而发挥抑癌作用,上调FoxO3a表达,可显著抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移能力。在前列腺癌细胞中,FoxO3a通过介导经典Wnt信号通路,靶向调控β-catenin蛋白表达,负向调控细胞上皮间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）进程。然而,FoxO3a在创面再上皮化中是否对角质形成细胞EMT同样发挥类似的调控作用,进而影响创面愈合,目前尚未见报道。在创伤修复领域,有学者通过对正常的皮肤组织与愈伤组织进行转录因子芯片筛查分析显示,与正常的皮肤组织相比,皮肤愈伤组织中的转录因子FoxO1、FoxO4、FoxO3a和FoxO6均发生不同程度表达的下调,其中FoxO3a表达差异较显著。因此,为了探索FoxO3a在创面愈合过程中发挥的功能及作用机制,在本研究中,通过临床取材,在人体组织水平分析急、慢性创面组织中的FoxO3a表达水平的变化及分布,评价FoxO3a对慢性创面发生、发展的意义;在细胞水平,观察过表达或干扰FoxO3a基因后对细胞的增殖与迁移能力的影响,通过构建体外细胞模型并对其可能机制进行研究,为慢性创面的治疗提供新的切入点。此外,在临床上通过对2009年1月至2016年12月收治在我院整形美容外科的慢性创面患者进行回顾性分析和调查,分析慢性创面患者创面的特点以及采取的相关治疗措施,以期为慢性创面的预防和治疗提供有用信息。方法:一、FoxO3a蛋白在人急性创面和慢性创面组织中的表达及分布1.通过临床取材,分别收集人慢性创面（伤后至少4周）和急性创面（伤后一周内）组织标本,分别采用Real-time PCR和Western blot,在分子水平定量分析FoxO3a的表达差异。2.采用免疫组织染色技术分析FoxO3a在急慢性创面组织中的表达和分布,评价FoxO3a对慢性创面发生、发展的意义。二、FoxO3a在人角质形成细胞Ha Ca T细胞中的功能研究1.设计、合成靶向沉默FoxO3a的3条si RNA,并筛选最佳干扰效果的si RNA,通过脂质体转染入人角质形成细胞Ha Ca T中,分别采用Real-time PCR和Western blot观察FoxO3a在转录水平和蛋白水平的干扰效率。2.构建人FoxO3a基因重组慢性病毒颗粒Lenti-Flag-FoxO3a并感染人角质形成细胞Ha Ca T,分别采用Real-time PCR和Western blot检测FoxO3a在m RNA和蛋白水平的过表达效率。3.CCK8法分析干扰或过表达FoxO3a基因后对Ha Ca T细胞增殖能力的影响。4.体外划痕实验检测干扰或过表达FoxO3a基因后对Ha Ca T细胞迁移能力的影响。5.通过Real-time PCR和

关键词： FoxO3a 增殖与迁移上皮间质转化角质形成细胞再上皮化慢性创面

2 μm激光前列腺汽化切除术后尿道再上皮化动物模型的建立

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中华泌尿外科杂志 2018年第1期39卷 58-61页

作者：唐小虎李帅杰柳浩王振高振宇胡建新曹颖杨秀书罗光恒贵州医科大学附属人民医院泌尿外科贵阳550002 遵义医学院动物外科实验室

目的建立2 μm激光前列腺汽化切除术后前列腺部尿道再上皮化动物模型。方法2016年3—4月选取未去势雄性中华田园犬15只，年龄（6.3±0.6）岁，范围5～7岁。体重（20.5±1.3）kg，范围18～22 kg。经腹腔注射水合氯醛麻醉后，行经膀胱2 μ... 详细信息

目的建立2 μm激光前列腺汽化切除术后前列腺部尿道再上皮化动物模型。方法2016年3—4月选取未去势雄性中华田园犬15只，年龄（6.3±0.6）岁，范围5～7岁。体重（20.5±1.3）kg，范围18～22 kg。经腹腔注射水合氯醛麻醉后，行经膀胱2 μm激光前列腺汽化切除术，术中见前列腺凸向尿道，前列腺部尿道变窄。记录手术时间、麻醉苏醒时间、存活率、初次饮水时间、初次进食时间、初次站立时间、初次排便时间、膀胱冲洗液清亮时间、切口愈合时间。术后3 d及术后1、2、3、4周分别随机选择3只犬进行观察。沿原手术路径在膀胱镜下观察前列腺部尿道创面的修复情况，观察结束立即取膀胱、前列腺及前列腺远端部分尿道的连续组织行病理检查，分别观察大体标本，以及HE染色和免疫组化染色检查结果。结果本组15只犬的手术时间为（70.5±18.3）min，范围50～90 min。麻醉苏醒时间为（120.1±21.1）min，范围95～145 min。15只犬术后均存活。术后初次饮水时间为（6.5±1.8）h，范围4.5～9.0 h；初次进食时间为（10.3±2.1）h，范围8.0～13.0 h；初次站立时间为（23.7±5.6）h，范围18.0～30.0 h；初次排便时间为（26.3±3.1）h，范围23.0～30.0 h。术后膀胱冲洗液清亮时间为（5.2±1.6）d，范围4～7 d。切口愈合时间为（8.7±1.5）d，范围6～11 d。膀胱镜观察，术后3 d和1周时创面被苍白坏死组织覆盖；2周时创面被覆上皮；3周时创面被覆上皮组织更厚；4周时前列腺部被覆上皮组织，与正常尿路上皮颜色接近。HE染色结果显示，术后3 d时创面未见上皮被覆；1周时少数创面已有点片状单层或2～3层立方再生上皮被覆；2周时创面均见被覆上皮覆盖，上皮为2～3层，缺乏极性；3周时创面被覆上皮细胞增厚至5～6层，表面可见少数伞细胞，极性排列；4周时创面被覆上皮为5～6层，表面见较多伞细胞，呈极性排列。免疫组化染色结果显示，术后3 d及1、2周时创面或被覆上皮尿斑蛋白（－）；3周时创面部分被覆上皮尿斑蛋白（＋）；4周时创面被覆上皮尿斑蛋白（＋）。结论对中华田园犬行2 μm激光前列腺汽化切除术能成功建立前列腺部尿道再上皮化的动物模型。

关键词：激光前列腺汽化切除术再上皮化

CCN1促进表皮细胞的迁移和增殖加速创面愈合的再上皮化

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CCN1促进表皮细胞的迁移和增殖加速创面愈合的再上皮化

作者：杜恒宇上海交通大学

学位级别：硕士

背景:再上皮化是创面愈合过程的重要组成部分,对预后具有显著影响。CCN家族成员1（CCN1或CYR61）是一种基质细胞蛋白,它在再上皮化中的作用仍不清楚。目的:确定伤口愈合过程中CCN1的表达及其在再上皮化过程中对角质形成细胞的影响,对于... 详细信息

背景:再上皮化是创面愈合过程的重要组成部分,对预后具有显著影响。CCN家族成员1（CCN1或CYR61）是一种基质细胞蛋白,它在再上皮化中的作用仍不清楚。目的:确定伤口愈合过程中CCN1的表达及其在再上皮化过程中对角质形成细胞的影响,对于未来临床新型药物的开发,具有重要意义。方法:采用分析GEO数据库的基因芯片数据和免疫荧光技术,检测随时间变化的表达情况。通过伤口划痕试验、胶体金试验、Cell Titer-Glo试验和Ed U试验研究CCN1对人表皮细胞迁移和增殖的影响。同时,使用小鼠全层皮肤伤口模型和浅二度烧伤模型,研究CCN1对伤口愈合和再上皮化的作用。结果:在伤口愈合的早期阶段,CCN1表达呈先上调后下降的趋势,且基本在表皮部位表达;体外实验结果表明,CCN1处理可促进人表皮细胞的迁移和增殖;局部注射CCN1,能加速伤口愈合和再上皮化;在浅二度烧伤模型中,烧伤后4天时,在CCN1治疗组中检测到新生表皮舌更长,以及增殖标志物PCNA和Ki67的更高表达,提示局部注射CCN1促进了表皮细胞的迁移和增殖;同时,在体外和体内实验中,结果显示CCN1治疗组与b FGF治疗组对表皮细胞的迁移和增殖的影响没有明显差别,部分结果甚至优于b FGF组。结论:这些结果表明,CCN1通过促进角质形成细胞的迁移和增殖来加速再上皮化,具有成为促进创面再上皮化的新靶点的可能性。

关键词： CCN家族成员1 再上皮化表皮细胞迁移增殖

羊膜上皮细胞调控糖尿病创面再上皮化及肉芽组织形成的研究

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羊膜上皮细胞调控糖尿病创面再上皮化及肉芽组织形成的研究

作者：张连杰中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景我国目前有超过1.1亿的糖尿病患者,排名世界首位。约25%的患者在其患病的某一时期会并发糖尿病足部溃疡。临床上常常采用在控制血糖的基础上,给予创面彻底清创换药、控制局部感染、周围血管再通、手术修复等方法,效果往往有限,... 详细信息

研究背景我国目前有超过1.1亿的糖尿病患者,排名世界首位。约25%的患者在其患病的某一时期会并发糖尿病足部溃疡。临床上常常采用在控制血糖的基础上,给予创面彻底清创换药、控制局部感染、周围血管再通、手术修复等方法,效果往往有限,最终只能靠截肢来救治的大约占14-25%,而截肢后的五年生存率仅为40-50%。糖尿病创面因其高发病率、创面迁延不愈、容易复发、截肢率高等因素,给患者、医院和整个社会都带来了严重的痛苦和负担。因此临床急需新型有效的治疗手段促进糖尿病创面的愈合。人羊膜来自胎盘最内层,为人体内最厚的基底膜,是不含有神经、血管、淋巴等组织的具有五层结构的半透膜。羊膜作为生物敷料在创面愈合中的应用已经有了一百多年的历史。其促进创面愈合是通过抗感染、降低创面炎症反应、促进创面再上皮化、减轻瘢痕形成等作用来实现。人们发现羊膜中的羊膜上皮细胞能表达干细胞的多种表面标记物,具有向三个胚胎层细胞系分化的潜能;能通过旁分泌功能释放多种细胞因子;还具备低免疫原性、免疫调节能力、低成瘤性、取才方便,不受伦理制约等优势,已经在心血管疾病、肝脏疾病、呼吸系统疾病、帕金森、口腔修复、组织工程化皮肤等领域中得到广泛应用,在干细胞治疗和再生医学中发挥着越来越重要的作用。但是人羊膜上皮细胞如何调控糖尿病创面愈合的应用研究鲜有报道。在本课题实验研究中,我们体外分离培养人羊膜上皮细胞,将其移植至全层皮肤缺损的糖尿病小鼠模型中,评价其对创面愈合中再上皮化和肉芽组织生成的作用和影响,并初步探讨其作用机制。第一部分人羊膜上皮细胞培养鉴定及干细胞特性检测研究目的:培养人羊膜上皮细胞进行生物学特性与干细胞性能鉴定。方法:收集人新鲜羊膜,采用酶消化法获得羊膜上皮细胞,体外传代培养;经流式细胞仪计数并测定人羊膜上皮细胞表型;采用免疫荧光法测定人羊膜上皮细胞干性标志物表达;诱导人羊膜上皮细胞向三个胚层分化,检测其多向分化潜能。结果:镜下观察人羊膜上皮细胞呈椭圆形或多边形,中央明显凸出而边缘扁平,轮廓较清楚,以鹅卵石样集落生长,贴壁牢固。传代后细胞生长速度减慢,增殖能力降低,传至P3代基本不再增殖。流式细胞仪检测发现羊膜上皮细胞表面标志物CD105、CD90、CD73、CD44、CD29等高表达,而CD45、CD34等表面标志物低表达。免疫荧光法测定发现人羊膜上皮细胞能表达OCT4、SSEA-4等干性标志物。诱导分化实验证实人羊膜上皮细胞能被诱导分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞,具有多向分化潜能。结论:从羊膜中分离培养的细胞为人羊膜上皮细胞,具有干细胞特性。第二部分:人羊膜上皮细胞在糖尿病创面动物模型中的应用研究目的:探讨人羊膜上皮细胞在小鼠糖尿病创面中的作用。方法:动物模型为db/db鼠全层皮肤缺损创面,于创面分别给予羊膜上皮细胞注射及PBS注射(空白对照组)。观察计算比较两组创面的大体形态、创面愈合率;HE染色后观察创面病理学组织结构、计算创面再上皮化率及肉芽组织厚度;Western Blot方法检测两组创面I型、III型胶原表达。结果:(1)人羊膜上皮细胞注射组在创面第7及12d时创面愈合率较空白对照组显著增加(P上皮细胞组的创面再上皮化速度较空白对照组明显增加(P上皮细胞组I型、III型胶原表达明显高于空白对照组。结论:人羊膜上皮细胞可以提高糖尿病小鼠创面愈合率、加快创面再上皮化速度、增加创面肉芽组织厚度及促进创面I型和III型胶原生成。第三部分:人羊膜上皮细胞调控糖尿病创面愈合中再上皮化及肉芽组织形成的机制研究目的:研究人羊膜上皮细胞促进糖尿病创面愈合的作用机制方法:收集人羊膜上皮细胞条件培养基,设置三个实验组:人羊膜上皮细胞条件培养基组;阴性对照为高糖DMEM培养基组;阳性对照为10%FBS高糖DMEM培养基组。以各组培养基分别培养表皮细胞、成纤维细胞。通过CCK-8法测定各组表皮细胞、成纤维细胞增殖情况;划痕实验及Transwell小室测定各组表皮细胞、成纤维细胞迁移能力;RT-PCR检测各组成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原m RNA表达;蛋白芯片检测人羊膜上皮细胞条件培养基内生长因子表达情况。结果:(1)通过CCK-8试剂盒检测发现培养于人羊膜上皮细胞条件培养基的表皮细胞、成纤维细胞的增殖活性较阴性对照组明显增加(P上皮细胞条件培养基组的表皮细胞、成纤维细胞的创面愈合率较阴性对照组明显增加(P上皮细胞条件培养基组的表皮细胞、成纤维细胞的细胞迁移能力较阴性对照组明显增多(P上皮细胞条件培养基组的成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原m RNA表达较空白对照组明显增高(P<0.01);(5

关键词：人羊膜上皮细胞创面愈合糖尿病再上皮化肉芽组织形成

富血小板纤维蛋白在兔硬腭黏膜缺损愈合过程中对炎症、再上皮化、胶原和TGF-β1的影响

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富血小板纤维蛋白在兔硬腭黏膜缺损愈合过程中对炎症、再上皮化、...

作者：王磊山西医科大学

学位级别：硕士

目的:构建具有科学性、重复性、相似性、可靠性、标准化的口腔角化黏膜缺损动物模型,以富血小板纤维蛋白(Platelet-rich fibrin,PRF)作为干预手段,研究富血小板纤维蛋白在兔硬腭黏膜缺损愈合过程中对炎症、再上皮化、胶原和TGF-β1表达... 详细信息

目的:构建具有科学性、重复性、相似性、可靠性、标准化的口腔角化黏膜缺损动物模型,以富血小板纤维蛋白(Platelet-rich fibrin,PRF)作为干预手段,研究富血小板纤维蛋白在兔硬腭黏膜缺损愈合过程中对炎症、再上皮化、胶原和TGF-β1表达的影响。方法:将27只3月龄雄性日本大耳白兔随机分为PRF实验组(A组,n=12)、空白对照组(B组,n=12)和正常组(C组,n=3)。每只兔于硬腭中三分之一中份,距上颌牙10mm和两侧黏膜边缘2.5mm处制备10mm角化黏膜缺损。C组制备PRF膜和正常的黏膜组织块,并对PRF膜进行HE染色,C组织块进行HE、VG和TGF-β1染色。A组缺损处缝合PRF膜,B组不做任何处理。测量各组黏膜组织块的平均厚度,排除因其厚度不同所带来的误差。A组和B组分别于术后3天、7天、14天和21天进行大体观察和创面愈合率的分析,处死后于术区取材,然后进行HE、VG和TGF-β1染色,并对炎症等级、上皮平均厚度、胶原纤维OD值和TGF-β1 OD值进行统计分析。结果:1.PRF膜HE染色:均质红染的纤维蛋白末端有大量的核蓝染的白细胞。2.各组黏膜组织块平均厚度无统计学差异(P>0.05)。3.大体观察:术后3天A组炎症相对较轻,PRF膜牢固覆盖在创面,B组创面红肿严重;术后7天两A组创缘不红肿,PRF膜与周围黏膜牢固结合,B组创缘稍红肿;术后14天,两组均被黏膜上皮覆盖,A组创面凹陷较B组小;术后21天两组创面凹陷继续缩小,A组比B组小,B组创缘有瘢痕挛缩迹象。4.创面愈合率:分组和时间的交互作用有统计学差异(P0.05)。5.HE染色结果:术后3天,两组基本全部为坏死组织,A组炎细胞浸润较B组少;术后7天,A组可见PRF膜引导出新生上皮,B组部分为坏死组织,炎细胞浸润明显,两组都出现了肉芽组织;术后14天和21天,两组都出现了完整的上皮结构,炎症明显减轻,上皮下结缔组织明显。6.炎症等级:A组和B组各组内有统计学差异(PA),在术后其他时间点上无统计学差异(P>0.05);两组分别在术后3天和7天高于C组(P0.05)。7.上皮平均厚度:分组和时间的交互作用有统计学差异(P0.05);B组在术后14天小于A组(P0.05)。8.胶原纤维OD值:分组和时间的交互作用有统计学差异(PB;14天PB;21天P0.05)。A组和B组在术后21天大于C组(PB;21天P0.05)。A组和B组在术后21天大于C组(P化黏膜缺损动物模型,为后续研究促进口腔角化黏膜修复的方法、材料和机制奠定了基础。2.PRF可能通过早期调控炎症反应、引导角化黏膜上皮再生、增加胶原纤维的合成来促进口腔角化黏膜缺损的愈合。3.PRF可能通过下调TGF-β1表达调控炎症反应和瘢痕挛缩,上调TGF-β1表达促进胶原沉积和血管再生。

关键词：富血小板纤维蛋白口腔角化黏膜再上皮化胶原纤维转换生长因子-β1

新型水凝胶促进深Ⅱ度烫伤创面再上皮化的研究

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新型水凝胶促进深Ⅱ度烫伤创面再上皮化的研究

作者：廖昭会遵义医学院

学位级别：硕士

目的:探讨局部应用新型水凝胶治疗深Ⅱ度烫伤创面愈合的疗效及其再上皮化的可能机制。方法:将SD大鼠(N=80)随机分为四组:正常对照组(n=20),模型组(造模后不予处理,n=20)、清创胶组(造模后局部应用康惠尔清创胶,n=20)、新型水凝胶组(造... 详细信息

目的:探讨局部应用新型水凝胶治疗深Ⅱ度烫伤创面愈合的疗效及其再上皮化的可能机制。方法:将SD大鼠(N=80)随机分为四组:正常对照组(n=20),模型组(造模后不予处理,n=20)、清创胶组(造模后局部应用康惠尔清创胶,n=20)、新型水凝胶组(造模后局部应用新型水凝胶,n=20)。每日用药一次,直至取材前一日;并每24 h观察创面的变化情况,记录最终的创面完全脱痂时间并每隔3日计算各组创面愈合率;治疗后第3、7、14、21 d切取各组创面标本,进行组织HE染色和创面修复的组织病理学评分;Masson染色观察胶原纤维的沉积情况;整合素β1及角蛋白14(K14)免疫组化染色行ESCs的分析;PCNA免疫组化观察细胞增殖情况;荧光定量PCR(q PCR)检测创面组织中KGF、IL-1、IL-6、IL-10、TGF-β、EGF、VEGF、HIF-1α、整合素α3、整合素β1基因的m RNA表达情况。结果:大鼠烫伤模型制备后烫伤部位的皮肤即变为苍白色,略肿胀,皮肤弹性降低。4 h后创面出现点片状瘀血、肿胀,创面湿润。2 d后创面变红、淤血、创面湿润、肿胀,无渗液及化脓;3 d后创面呈棕红色,各组创面结软痂后变硬,创缘有一红圈。脱痂后各创面周围均可见部分新生上皮,中间铺满肉芽组织,创面有少量淡黄色渗出液。模型组第21 d创面未达到完全再上皮化,创面中央有少量肉芽组织生长,无渗液。新型水凝胶组和清创胶组大鼠在第21 d创面基本达到再上皮化。新型水凝胶组的完全脱痂时间快于清创胶及模型组(P0.05)。HE染色显示,在第7、14和21 d新型水凝胶及清创胶的组织病理学评分均高于模型组(P化的结果表明,随着创面的愈合,各组的整合素β1、K14的表达量和PCNA阳性细胞率逐渐增加,在第14 d达高峰,且新型水凝胶组的整合素β1、K14的表达量和PCNA的阳性率高于模型组(P上皮化而缩短创面愈合时间,提高愈合质量,但新型水凝胶对深Ⅱ度烫伤创面的完全脱痂时间早于清创胶,在促进毛囊、汗腺等皮肤附属器官修复上新型水凝胶也更胜一筹。新型水凝胶促进烧伤创面再上皮化的作用主要通过提供低氧、潮湿的环境,促进胶原的沉积、减轻创面炎症反应,促进ESCs迁移、增殖,促进烫伤前期EGF、VEGF、TGF-β、HIF-1α、整合素α3的高表达,同时促进烫伤后期整合素β1的高表达机制有关。

关键词：烫伤创面愈合再上皮化水凝胶