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中国林蛙皮抗菌肽提取条件的优化研究

食品科学 2008年第10期29卷 223-227页

作者：金莉莉丁忠福王秋雨辽宁大学生命科学学院辽宁沈阳110036

本研究以林蛙干皮为原料,采用甲醇、乙酸和磷酸盐三种浸提液提取有抑菌活性的多肽,并分别以提取温度、时间、液料比、pH值四因素对每种浸提液的提取方法进行三水平正交试验,以进一步精纯后产物的抑菌活力为指标,探索林蛙抗菌肽的最优分... 详细信息

本研究以林蛙干皮为原料,采用甲醇、乙酸和磷酸盐三种浸提液提取有抑菌活性的多肽,并分别以提取温度、时间、液料比、pH值四因素对每种浸提液的提取方法进行三水平正交试验,以进一步精纯后产物的抑菌活力为指标,探索林蛙抗菌肽的最优分离纯化工艺。结果表明,三种浸提液的最优条件分别是:甲醇法为浸提时间24h、温度0℃、液料比为22.5(W/V)、pH5.4;乙酸法为24h、0℃、液料比22.5、pH3.0;磷酸盐法为24h、20℃、液料比22.5、pH6.4。其中甲醇法浸提产物的抑菌活性最佳,粗提品经G-25层析后,力活提高了5倍,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用。

关键词：中国林蛙抗菌肽分离纯化抑菌活性

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中国林蛙生长发育盐效应的研究进展

生物资源 2019年第5期41卷 397-401页

作者：王立志陕西学前师范学院生命科学与食品工程学院

本文对中国林蛙受精卵、蝌蚪和幼蛙等不同发育阶段生长发育的盐效应进行了综述。盐度对不同发育阶段的中国林蛙均有影响。中国林蛙受精卵孵化的最适盐浓度范围为0~5 g/L,孵化率超过80%;在2~3 g/L盐浓度下孵化的中国林蛙雌性个体超过90%... 详细信息

本文对中国林蛙受精卵、蝌蚪和幼蛙等不同发育阶段生长发育的盐效应进行了综述。盐度对不同发育阶段的中国林蛙均有影响。中国林蛙受精卵孵化的最适盐浓度范围为0~5 g/L,孵化率超过80%;在2~3 g/L盐浓度下孵化的中国林蛙雌性个体超过90%,孵化后中国林蛙蝌蚪的存活率没有显著变化;中国林蛙蝌蚪和变态幼蛙的安全盐度上限分别为2 g/L和1.5 g/L。这些研究结果为中国林蛙野生资源的保护和人工养殖提供了一定的理论基础。

关键词：中国林蛙受精卵蝌蚪幼蛙盐效应

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中国林蛙细胞毒性核糖核酸酶的原核表达

生物技术 2011年第1期21卷 25-27页

作者：范美音董安康吴琼陶凤云赵伟北京联合大学生物化学工程学院北京100023

目的:利用大肠杆菌以非包涵体的形式表达中国两栖动物林蛙的细胞毒性核糖核酸酶,探索原核表达系统表达细胞毒性核糖核酸酶的条件。方法:利用中国林蛙核糖核酸酶基因及表达质粒pFlag-CTS构建重组表达质粒,转导BL21后用IPTG诱导表达,观察... 详细信息

目的:利用大肠杆菌以非包涵体的形式表达中国两栖动物林蛙的细胞毒性核糖核酸酶,探索原核表达系统表达细胞毒性核糖核酸酶的条件。方法:利用中国林蛙核糖核酸酶基因及表达质粒pFlag-CTS构建重组表达质粒,转导BL21后用IPTG诱导表达,观察不同诱导温度下细菌的生长情况。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法进行重组蛋白的检测。结果:通过观察不同诱导温度下细菌的生长情况,发现利用较低温度可以降低宿主细胞对表达产物细胞毒性的敏感性,成功地得到了这种目的基因的表达产物。结论:低温(20℃)可以有效表达目的蛋白。

关键词：中国林蛙核糖核酸酶细胞毒性原核表达

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新疆蛙类遗传多样性与系统发育研究

生物技术 2015年第6期25卷 558-563,612页

作者：叶小芳袁亮吕雪峰何立志王秀玲季荣新疆特殊环境物种保护与调控生物学实验室中亚区域跨境有害生物联合控制国际研究中心新疆师范大学生命科学学院新疆乌鲁木齐830054 新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所新疆乌鲁木齐830000

[目的]为了解新疆地区中国林蛙中亚林蛙、中亚侧褶蛙和阿尔泰林蛙的遗传多样性及系统发育。[方法]分别于新疆7个地方采集了4种蛙类共53个个体,对线粒体12S RNA基因进行了扩增和测序。[结果]经过拼接和比对,得到长度为893 bp片段的序列,... 详细信息

[目的]为了解新疆地区中国林蛙中亚林蛙、中亚侧褶蛙和阿尔泰林蛙的遗传多样性及系统发育。[方法]分别于新疆7个地方采集了4种蛙类共53个个体,对线粒体12S RNA基因进行了扩增和测序。[结果]经过拼接和比对,得到长度为893 bp片段的序列,4种蛙类共定义了21个单倍型,其中,中国林蛙、中亚侧褶蛙和阿尔泰林蛙遗传变异程度高,而中亚林蛙的遗传变异很低。各群体总遗传分化系数Gst为0.367 88,总固定系数Fst为0.871 56,总基因流Nm为0.04。中国林蛙与中亚林蛙之间的遗传距离最大,为0.158,与中亚侧褶蛙之间的遗传距离次之,为0.137,与阿尔泰林蛙之间遗传距离最小,为0.034。聚类分析显示中国林蛙和阿尔泰林蛙聚为一支,中亚林蛙和中亚侧褶蛙聚为一支。[结论]新疆地区的中国林蛙、中亚侧褶蛙和阿尔泰林蛙的遗传多样性丰富,中亚林蛙的遗传多样性较低,各群体遗传分化程度较高。

关键词：中国林蛙中亚林蛙中亚侧褶蛙阿尔泰林蛙 12S RNA

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中国林蛙皮抗菌肽用响应面法优化提取条件

中国医药工业杂志 2010年第8期41卷 576-579页

作者：李玉环安金双张超刘帅孟庆繁吉林大学生命科学学院吉林长春130012

采用响应面法优化了中国林蛙皮抗菌肽的提取条件。结果表明,林蛙皮抗菌肽的最佳提取工艺条件为:浸提液pH1.48,浸提时间3.61h,液料比12.46:1(ml:g),抗菌肽抑菌圈直径预测值为24.8mm,验证值为24.9mm,与理论预测值偏差为0.41%。

关键词：响应面法中国林蛙抗菌肽杯碟法

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中国林蛙繁殖特性及一池多用人工繁殖技术

畜牧兽医科学（电子版） 2020年第1期 69-70页

作者：王春清吕树臣何玉华吉林农业科技学院动物科技学院

随着中国林蛙养殖量不断增大,林蛙产卵、孵化及蝌蚪培育池面积也相应增多,大多数林蛙养殖户采用三池法繁殖技术,在养殖数量多而无地扩建繁殖池时,蝌蚪只能超大密度培育,造成蝌蚪成活率低,养殖效益低,为解决这一技术难题,通过研究试验,... 详细信息

随着中国林蛙养殖量不断增大,林蛙产卵、孵化及蝌蚪培育池面积也相应增多,大多数林蛙养殖户采用三池法繁殖技术,在养殖数量多而无地扩建繁殖池时,蝌蚪只能超大密度培育,造成蝌蚪成活率低,养殖效益低,为解决这一技术难题,通过研究试验,采用一池多用的林蛙繁殖技术,减少林蛙繁殖池面积,降低林蛙养殖管理成本,提高养殖效益,有利于林蛙规模化饲养的发展。该文主要论述了中国林蛙的繁殖特性、种蛙选择、种蛙采集及人工繁殖技术。

关键词：中国林蛙繁殖特性人工繁殖技术

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中国林蛙与黑龙江林蛙、黑斑蛙、蟾蜍的鉴别

江苏农业科学 2011年第4期39卷 312-313页

作者：王春清王海玉吉林农业科技学院吉林吉林132101 吉林省蛟河市白石山畜牧兽医站吉林蛟河132500

从中国林蛙及各种蛙的形态特征、生态习性、蝌蚪生物学及卵团四方面来阐述中国林蛙与黑龙江林蛙、黑斑蛙和蟾蜍的鉴别。

关键词：中国林蛙黑龙江林蛙黑斑蛙蟾蜍鉴别

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林蛙卵油的提取研究

氨基酸和生物资源 2008年第1期30卷 10-12页

作者：张晶胡春霞王战勇苏婷婷辽宁石油化工大学环境与生物工程学院辽宁抚顺113001 抚顺师范高等专科学校生物化学系辽宁抚顺113006

利用林蛙卵提取林蛙卵油，并对影响林蛙卵油提取率的因素，如提取溶剂的选择、提取温度、提取时间及提取料液比等条件进行研究，通过正交试验确定获得最大林蛙卵油产率的条件。即：以石油醚（30～60）作为提取剂；提取温度65℃；提取时... 详细信息

利用林蛙卵提取林蛙卵油，并对影响林蛙卵油提取率的因素，如提取溶剂的选择、提取温度、提取时间及提取料液比等条件进行研究，通过正交试验确定获得最大林蛙卵油产率的条件。即：以石油醚（30～60）作为提取剂；提取温度65℃；提取时间为4h；提取料液比为1：9。并对提制的林蛙卵粗油进行精制。得到具有透明黄色，鱼腥味道的林蛙卵油。

关键词：中国林蛙林蛙卵油正交试验

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中国林蛙皮肤活性多肽基因表达的多样性研究

中国林蛙皮肤活性多肽基因表达的多样性研究

作者：白冰辽宁师范大学

学位级别：硕士

生物活性肽是从动、植物等天然产物中以及微生物中分离出来的肽段,这些肽段可以是只有2个氨基酸组成的双肽,也可以是复杂的长链和环状多肽。生物活性肽按照功能可分为生理活性肽以及其它生物活性肽,其中生理活性肽包括抗菌肽,抗病毒多肽... 详细信息

生物活性肽是从动、植物等天然产物中以及微生物中分离出来的肽段,这些肽段可以是只有2个氨基酸组成的双肽,也可以是复杂的长链和环状多肽。生物活性肽按照功能可分为生理活性肽以及其它生物活性肽,其中生理活性肽包括抗菌肽,抗病毒多肽,神经活性肽,激素以及激素调节肽,免疫活性肽等等。由于人工化学合成或从天然产物中分离生物活性多肽成本高,价格昂贵,实际应用中存在许多困难,这就需要对活性多肽的物理化学性质,基因结构及表达情况等基础性问题进行深入的研究。中国林蛙(Rana chensinensis)是欧洲林蛙的中国亚种,其皮肤中含有大量丰富的生物活性肽。本研究根据蛙类Rana属中抗菌肽的信号肽末端的保守序列设计简并引物,并且利用RT-PCR技术从单个中国林蛙皮肤中共克隆得到196条cDNA序列,其中有173条为有义cDNA序列,共编码了35条不同的抗菌肽前体和23条不同的成熟肽,1条缓激肽前体和一些特殊的活性多肽序列。这点充分说明中国林蛙个体中活性多肽基因表达具有多样性的特点。其活性多肽前体的氨基酸序列呈现一定的规律性,信号肽区和酸性前肽区序列较保守,而成熟肽区域的氨基酸序列差异性较大。根据生物活性多肽中成熟肽序列差异可将这些多肽分为8个不同的抗菌肽家族和2个缓激肽。抗菌肽家族分别为temporin-1,brevinin-1,brevinin-2,chensinin-1, chensinin-2, chensinin-3, chensinin-4和chensinin-5家族,缓激肽分别为Bradykinin和Thr-BK。利用生物信息学软件分析得到,8个家族的抗菌肽都呈阳离子性,理论等电点在5.76～10.07之间,分子量在1460.8～3702.4,一般由13～37个氨基酸残基组成。通过抗菌肽库网站的比对,发现中国林蛙皮肤中的大部分抗菌肽与库中已有的抗菌肽相似性达到70%以上,而抗菌肽brevinin-1CEf和brevinin-1CEf分别与西藏高原中的高山倭蛙(Nanorana parkeri)相似度为58.82%和50%。在二级结构分析中,除brevinin-1CEc,brevinin-1CEb和chensinin-2不具有α-螺旋区域,而是以含有延伸链为主,其余大部分抗菌肽都含有一段α-螺旋区域。从活性多肽的种类分析,中国林蛙皮肤中含有多种具有研究价值的生物活性肽,包括抗菌肽和缓激肽等。从活性多肽的基因和氨基酸序列分析,抗菌肽的序列高度同源,但成熟肽序列变异较大,其二级结构也存在着差异,这点决定了活性多肽在种类,结构,功能等方面具有多样性。

关键词：中国林蛙抗菌肽缓激肽预测多样性