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肝片吸虫组织蛋白酶L真核表达载体构建及重组蛋白活性分析

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中国人兽共患病学报 2013年第1期29卷 51-53,58页

作者：闻晓波冉旭华王春仁宋佰芬魏晓曼李晓娟王密苗艳黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

目的构建肝片吸虫组织蛋白酶L(CatL)的真核表达载体,研究重组蛋白的生物学活性。方法以构建好的重组质粒pET30a-FhCatL为模板,利用PCR技术扩增肝片吸虫组织蛋白酶L基因(catL),连接真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-CatL,转染H... 详细信息

目的构建肝片吸虫组织蛋白酶L(CatL)的真核表达载体,研究重组蛋白的生物学活性。方法以构建好的重组质粒pET30a-FhCatL为模板,利用PCR技术扩增肝片吸虫组织蛋白酶L基因(catL),连接真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-CatL,转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,Western blotting检测重组蛋白表达情况。结果重组质粒pEGFP-N1-CatL在HeLa细胞中获得了表达,Western blotting结果表明真核表达质粒表达的重组蛋白能与自然感染肝片吸虫的山羊阳性血清发生特异性反应。结论肝片吸虫CatL真核表达载体构建成功,真核表达产物可与自然感染的山羊阳性血清发生特异性反应,具有免疫反应性,可做为分子疫苗的候选和诊断抗原进行进一步的研究。

关键词：肝片吸虫 catL基因真核表达活性分析

猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区的原核表达

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中国畜牧兽医 2010年第1期37卷 51-54页

作者：冉旭华闻晓波王密李冬野侯喜林黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室大庆163319

用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端的主要抗原表位区。通过对GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列进行分析,确定了其N端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了1对特异性引物,RT-PCR扩增该区段,并将此片段... 详细信息

用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端的主要抗原表位区。通过对GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列进行分析,确定了其N端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了1对特异性引物,RT-PCR扩增该区段,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2N,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/LIPTG37℃诱导表达。RT-PCR扩增得到424 bp的片段,重组蛋白大小约为21.8 ku,与预期大小相符。West-ern blotting分析结果表明,该蛋白能与阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有生物学活性。猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区在大肠杆菌中成功表达,具有一定的反应原性,为进一步用其建立诊断方法奠定基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区表达

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维生素C对黄鳝非特异性免疫机能的影响

长江大学学报（自科版）（中旬） 2008年第4期5卷 41-44页

作者：曹志华文华温小波罗静波付斌长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国水产科学研究院长江水产研究所湖北荆州434000 华南农业大学动物科学学院广东广州510632

以体重16.8～24.3g的黄鳝(Monopterus albus Zuiew)为研究对象,在其基础饲料中分别添加不同比例的维生素C磷酸酯(其中VC添加量分别为0.0、50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0mg/kg),在23～25℃水温下饲喂14d,以了解VC对黄鳝非特... 详细信息

以体重16.8～24.3g的黄鳝(Monopterus albus Zuiew)为研究对象,在其基础饲料中分别添加不同比例的维生素C磷酸酯(其中VC添加量分别为0.0、50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0mg/kg),在23～25℃水温下饲喂14d,以了解VC对黄鳝非特异性免疫功能的影响。结果显示,吞噬细胞活性在饲料中VC添加量为400.0～600.0mg/kg时达到最高,而溶菌酶活性在VC添加量为200.0mg/kg时达到最高。在不同组织中SOD的活性有显著差异,与对照组相比,当饲料中VC添加量为50.0mg/kg时,SOD活性显著降低。这表明当饲料中VC添加量在400.0～800.0mg/kg时,黄鳝能获得最好的非特异性免疫。

关键词：黄鳝(Monopterus albus Zuiew) 维生素C 非特异性免疫

猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达

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动物医学进展 2010年第1期31卷 24-27页

作者：冉旭华闻晓波王密李冬野侯喜林黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室黑龙江大庆163319

利用分子生物学软件分析GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列,确定了其C端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,RT-PCR扩增该区域,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2C,然后... 详细信息

利用分子生物学软件分析GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列,确定了其C端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,RT-PCR扩增该区域,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2C,然后转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。结果表明,RT-PCR扩增得到301 bp的片段,重组蛋白大小约为18 ku,与预期大小相符。Western blot分析表明,该蛋白与阳性血清发生特异性反应,为进一步利用其建立诊断方法奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区表达

肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆表达及活性分析

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中国人兽共患病学报 2009年第9期25卷 891-894页

作者：冉旭华李晓娟李树东王春仁朴范泽闻晓波黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室大庆163319

目的克隆和表达肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因(FhGST)以研究重组蛋白免疫学特性。方法参考Gen-Bank上发表的FhGST基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR法扩增FhGST基因,将扩增产物克隆入pET-30a(+),构建重组表达载体。经PCR、双酶切... 详细信息

目的克隆和表达肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因(FhGST)以研究重组蛋白免疫学特性。方法参考Gen-Bank上发表的FhGST基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR法扩增FhGST基因,将扩增产物克隆入pET-30a(+),构建重组表达载体。经PCR、双酶切和序列测定鉴定后转入***21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对该重组蛋白进行分析和鉴定。结果成功获得肝片吸虫GST基因全长为657bp的编码序列,SDS-PAGE结果表明重组蛋白分子量为31.3kDa,以包涵体形式表达。Western blotting结果证实重组蛋白能被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能与感染肝片吸虫的绒山羊血清发生反应,表明重组蛋白具有免疫反应性。结论成功的克隆了肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因,实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,并具有良好的免疫学活性。

关键词：肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因原核表达

新城疫病毒F、NP、M和HN基因在昆虫细胞内的共表达

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中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 257-262页

作者：闻晓波闫丽辉曹殿军刘培欣刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建杆状病毒转移载体,通过PCR的方法将F48E9株新城疫病毒F基因上的Stu I位点和NP基因上的Xba I位点进行突变,扩增出全长的F、NP以及F48E9株新城疫病毒M和HN基因片段,将其克隆到pMD18-T载体,再将F、NP、M和HN基因依次亚克隆到杆状病... 详细信息

为构建杆状病毒转移载体,通过PCR的方法将F48E9株新城疫病毒F基因上的Stu I位点和NP基因上的Xba I位点进行突变,扩增出全长的F、NP以及F48E9株新城疫病毒M和HN基因片段,将其克隆到pMD18-T载体,再将F、NP、M和HN基因依次亚克隆到杆状病毒转移载体pAcAB_4上,F基因和M基因均在p10启动子的操控之下,NP基因和HN基因构建到两个polyhedrin启动子下游,构建重组杆状病毒转移载体pAcAB4_4-F-NP-M-HN。pAcAB_4-F-NP-M-HN与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-F-NP-M-HN。重组杆状病毒感染Sf9细胞,72h后收集细胞和培养上清。Western blot分析显示:M、NP、F和HN蛋白在培养上清中得到了共表达,大小与预期结果一致;感染细胞内只检测到了HN蛋白的表达。这表明M、NP、F和HN蛋白在昆虫细胞内共表达可以自我装配成病毒样颗粒,并且以出芽的方式释放到培养基中。该重组杆状病毒的获得为研究新城疫病毒各结构蛋白之间的相互作用和确定病毒粒子出芽的驱动力等方面奠定了基础。

关键词：新城疫病毒杆状病毒转移载体表达

检测PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2008年第7期30卷 544-547,556页

作者：冉旭华赵喜红闻晓波倪宏波李树东周恩民黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

用大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达PRRSV重组N蛋白作为包被抗原,建立检测猪群PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法,并对临床上采集的256份猪血清样本进行检测,结果66份呈阳性,用IDEXXPRRSV抗体检测试剂盒检测,检出的阳性血清为63份,两者的符合率为... 详细信息

用大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达PRRSV重组N蛋白作为包被抗原,建立检测猪群PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法,并对临床上采集的256份猪血清样本进行检测,结果66份呈阳性,用IDEXXPRRSV抗体检测试剂盒检测,检出的阳性血清为63份,两者的符合率为98.8%。Western blot检测结果58份阳性,两者的符合率为96.9%。试验结果表明,本试验所建立的间接阻断ELISA方法具有良好敏感性和特异性,可用于PRRS流行病学调查和疾病的诊断。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接阻断ELISA 流行病学调查

On the Centralizers of Rescaling Separating Differentiable Vector Fields

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Acta Mathematica Sinica,English Series 2024年第11期40卷 2671-2683页

作者： bo HAN xiao wen School of Mathematical Sciences Beihang UniversityBeijing100191P.R.China LMIB Institute of Artificial Intelligence&School of Mathematical SciencesBeihang UniversityBeijing100191P.R.China Beijing Zhongguancun Laboratory Beijing100094P.R.China

In this paper,we introduce a new concept of expansiveness,similar to the separating ***,we consider a compact Riemannian manifold M without boundary and a C^(1)vector field X on M,which generates a flowφ_(t)on *** say that X is rescaling separating on a compact invariant setΛof X if there is a constantδ>0 such that,for any x,y∈Λ,if d(φ_(t)(x),φ_(t)(y))≤δ∥X(φ_(t)(x))∥for all t∈R,then y∈Orb(x).We prove that if X is rescaling separating onΛand every singularity of X inΛis hyperbolic,then any C^(1)vector field Y,whose flow commutes withφ_(t)onΛ,must be collinear to X onΛ.As applications of this result,we show that the centralizer of a rescaling separating C^(1)vector field without nonhyperbolic singularity is *** also proved that there is an open and dense set u⊂χ^(1)(M)such that for any star vector fieldχ∈u,the centralizer of X is collinear to X on the chain recurrent set of X.

关键词： Centralizer expansiveness hyperbolicity

基于OLAP的电子对抗作战部署要素分析方法

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电子信息对抗技术 2017年第5期32卷 41-45,51页

作者：耿松涛操新文原晓波国防大学联合作战学院石家庄050084

为了分析多个实验要素(实验因子)与实验结果之间的因果关系,从而探索电子对抗作战部署问题规律,对基于联机分析处理技术(OLAP)的实验要素分析方法进行研究。基于实验要素分析的几类需求,提出基于OLAP的探索分析方法,并进行了详细论述说... 详细信息

为了分析多个实验要素(实验因子)与实验结果之间的因果关系,从而探索电子对抗作战部署问题规律,对基于联机分析处理技术(OLAP)的实验要素分析方法进行研究。基于实验要素分析的几类需求,提出基于OLAP的探索分析方法,并进行了详细论述说明,然后通过将该方法应用于解决电子对抗作战部署的要素分析,展示具体运用方法。

关键词：实验要素联机分析处理技术(OLAP) 电子对抗作战部署