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利用宏基因组方法对四川地区规模化养猪场粪便中耐药基因污染特征的研究

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黑龙江畜牧兽医 2021年第18期 58-64页

作者：潘梦肖璐林毅曹冶李兴玉叶健强张明国康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室成都610066 凉山科华奶牛繁育有限公司四川西昌615000

为了解四川地区部分规模化养猪场粪便中的耐药基因污染特征,试验采用宏基因组测序技术,基于Illumina Hiseq 4000测序平台,分析了采集自四川地区6家规模化养猪场粪池中粪便的菌群、抗生素耐药基因、耐药基因的耐药机制类型。结果表明:6... 详细信息

为了解四川地区部分规模化养猪场粪便中的耐药基因污染特征,试验采用宏基因组测序技术,基于Illumina Hiseq 4000测序平台,分析了采集自四川地区6家规模化养猪场粪池中粪便的菌群、抗生素耐药基因、耐药基因的耐药机制类型。结果表明:6家规模化养猪场粪池中的粪便测序结果显示,本次共获得963793条有效序列,注释到155个门、108个纲、218个目、477个科、2072个属、11824个种,共鉴定出1506个抗生素本体(antibiotic resistance ontology,ARO),涉及11种主要的耐药基因类别,主要对应6种耐药机制类型。四川地区规模化养猪场粪便中菌群的优势菌属是不动杆菌属(12.65%)、普氏菌属(6.83%)及假单胞菌属(4.03%);耐药基因平均绝对丰度最高的主要为四环素类(19747.1 mg/kg)、氨基糖苷类(15167.7 mg/kg)、大环内酯类(12533.0 mg/kg)及氯霉素类(10646.5 mg/kg)等;耐药基因种类最多的为外排泵类(20.2%)、氨基糖苷类(15.1%)、β-内酰胺类(13.6%)、四环素类(10.8%)等;耐药机制主要为抗生素失活(41.4%)、抗生素外排泵(34.2%)、抗生素靶点结构改变(12.5%)等。此外,本次调查粪便样品中检测出了黏菌素类(MCR-1/4/5)、利福平类(rphA/B)、磷霉素类(fosC2/A2/A5)以及口恶唑酮类(optrA)耐药基因。说明四川地区规模化养猪场粪便中菌群种类丰富,ARO种类多,其ARO绝对丰度、种类及耐药机制存在一定的差异;新型耐药类型及其代表ARO的检出提示四川地区部分规模化养猪场抗生素耐药情况十分严峻,全面“禁抗令”的推进刻不容缓。

关键词：猪场粪便宏基因组抗生素耐药基因菌群分析

消毒剂对规模化蛋鸡舍消毒效果的影响因素研究

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中国家禽 2010年第19期32卷 10-13页

作者：康润敏王红宁郑炜超李保明曹薇徐昌文杨潇燕四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室四川成都610064 中国农业大学农业部设施农业工程重点开发实验室北京100083

本文对用最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)以及定量杀菌能力测定筛选出的4种消毒剂在规模化蛋鸡舍中消毒效果的影响因素进行研究,为建立规模化蛋鸡舍消毒程序提供依据。试验采用正交设计表L16(45)设计消毒种类、消毒浓度(mg/L)、... 详细信息

本文对用最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)以及定量杀菌能力测定筛选出的4种消毒剂在规模化蛋鸡舍中消毒效果的影响因素进行研究,为建立规模化蛋鸡舍消毒程序提供依据。试验采用正交设计表L16(45)设计消毒种类、消毒浓度(mg/L)、喷雾量(mL/m3)、消毒时间(min)为影响消毒效果的因素,每个因素设计4个水平,用极差分析评价各因素对空气消毒效果的影响主次,用方差分析进行显著性检验。结果:消毒剂浓度对消毒效果影响极显著(P0.05)。结果表明,在对规模化蛋鸡舍进行消毒时,使用同种消毒剂情况下浓度是影响消毒效果的主要因素。

关键词：规模化蛋鸡舍消毒剂消毒效果正交设计

鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用

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中国畜牧兽医 2019年第2期46卷 565-572页

作者：谢晶于吉锋周泷曹冶林毅李兴玉肖璐叶勇刚潘梦康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室成都610066

试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 环介导的等温扩增技术(LAMP) TK基因

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中药复方提取物治疗兔肠道球虫病效果观察

黑龙江畜牧兽医 2021年第18期 115-118,154页

作者：叶勇刚于吉锋魏勇叶健强谢晶张先惠钟光旭吴学婧康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室成都610066 雷波县农业农村局四川雷波616550

为评价中药复方提取物治疗兔肠道球虫病的效果,试验将60只轻度感染肠道球虫的新西兰白兔随机分为6组,分别为感染不用药组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、地克珠利组和氯苯胍组,均人工接种1×105个孢子化卵囊(大型艾美耳... 详细信息

为评价中药复方提取物治疗兔肠道球虫病的效果,试验将60只轻度感染肠道球虫的新西兰白兔随机分为6组,分别为感染不用药组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、地克珠利组和氯苯胍组,均人工接种1×105个孢子化卵囊(大型艾美耳球虫、中型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫和小型艾美耳球虫孢子化卵囊的混合物)。接种后第3天,前4组分别每天灌服生理盐水及1,0.5,0.2 g/mL中药提取物各8 mL;地克珠利组每天在饮水中按0.3 mL/L添加5%地克珠利溶液;氯苯胍组每天在饲料中按600 mg/kg添加氯苯胍,连用7 d,随后停止用药。每天观察并记录兔的临床症状,间隔7 d采集所有兔粪便,检测每克粪便卵囊数(OPG),记录每只兔增重和死亡情况,计算存活率,并对死亡兔进行剖检。结果表明:中药高剂量组、地克珠利组和氯苯胍组兔存活率均为100%,3组兔治疗7,14,21后OPG均差异不显著(P>0.05),中药高剂量组和氯苯胍组兔试验期间增重差异不显著(P>0.05),地克珠利组在试验期间平均增重显著高于氯苯胍组和中药高剂量组(P0.05),试验期间平均增重显著低于地克珠利组(P<0.05)。中药低剂量组兔存活率为70%,其给药后第14,21天OPG、试验期间平均增重均显著低于其他用药组(P<0.05)。说明中药复方制剂治疗兔肠道球虫病存在量效关系,高剂量治疗效果最佳。

关键词：中药复方提取物兔卵囊肠道球虫病治疗效果

密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 668-677页

作者：于吉锋谢晶黄勇肖璐林毅曹冶叶勇刚魏勇吴学婧李江凌康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室成都610066 四川农业大学动物医学院成都611130

[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据... 详细信息

[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。

关键词：兔出血症病毒2型(RHDV2) 病毒样颗粒(VLP) 密码子偏好性重组杆状病毒免疫原性

基于16S rDNA扩增子测序技术分析四川省奶牛乳房炎乳汁中微生物菌落多样性

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畜牧与兽医 2021年第5期53卷 77-82页

作者：肖璐谢晶于吉锋廖党金曹冶林毅李兴玉潘梦叶健强叶勇刚康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

为了掌握四川省部分地区奶牛乳房炎致病微生物的主要流行趋势,为针对性地使用抗生素治疗和防控奶牛乳房炎提供科学依据,本研究利用16S rDNA扩增子测序技术对四川成都市、眉山市、凉山州3地区的10家养殖场的奶牛乳房炎乳汁和正常乳汁微... 详细信息

为了掌握四川省部分地区奶牛乳房炎致病微生物的主要流行趋势,为针对性地使用抗生素治疗和防控奶牛乳房炎提供科学依据,本研究利用16S rDNA扩增子测序技术对四川成都市、眉山市、凉山州3地区的10家养殖场的奶牛乳房炎乳汁和正常乳汁微生物菌群多样性进行比较分析。结果表明:本地调查的正常奶牛乳汁与患乳房炎奶牛乳汁中无乳链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓隐秘菌、绿色气球菌分布丰度存在显著性差异(P0.05)。由此可见四川省部分地区奶牛乳房炎流行的主要致病菌为无乳链球菌,而非金黄色葡萄球菌;环境致病菌以凝固酶阴性葡萄球菌、化脓隐秘菌、绿色气球菌为主。

关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌凝固酶阴性葡萄球菌化脓隐秘菌绿色气球菌四川省

A low redox potential and long life organic anode material for sodium-ion batteries

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Journal of Energy Chemistry 2025年第1期100卷 557-564页

作者： Zhi Li Yang Wei kang Zhou Xin Huang Xing Zhou Jie Xu Taoyi Kong Junwei Lucas Bao Xiaoli Dong Yonggang Wang Department of Chemistry and Shanghai Key Laboratory of Molecular Catalysis and Innovative Materials Institute of New Energy Collaborative Innovation Center of Chemistry for Energy Materials (iChEM) Fudan University Department of Chemistry Boston College School of Materials Science and Engineering Anhui University of Technology

Sodium-ion batteries （SIBs） with organic electrodes are an emerging research direction due to the sustainability of organic materials based on elements like C,H,O,and sodium ***,organic electrode materials for SIBs are mainly used as cathodes because of their relatively high redox potentials（>1 V）.Organic electrodes with low redox potential that can be used as anode are ***,a novel organic anode material （tetrasodium 1,4,5,8-naphthalenetetracarboxylate,Na4TDC） has been developed with low redox potential （<0.7 V） and excellent cyclic *** three-sodium storage mechanism was demonstrated with various in-situ/ex-situ spectroscopy and theoretical calculations,showing a high capacity of 208 mAh/g and an average decay rate of merely 0.022%per ***,the Na4TDC-hard carbon composite can further acquire improved capacity and cycling stability for 1200 cycles even with a high mass loading of up to 20 mg *** pairing with a thick Na3V2（PO4）3cathode (20.6 mg cm-2),the as-fabricated full cell exhibited high operating voltage （2.8 V）,excellent rate performance and cycling stability with a high capacity retention of 88.7% after 200 cycles,well highlighting the Na4TDC anode material for SIBs.

关键词： Organic anode material Low redox potential Composite anode Sodium-ion batteries

猪δ冠状病毒重庆流行株的诊断与N基因序列分析

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畜禽业 2024年第2期35卷 1-8页

作者：吴学婧于吉锋叶勇刚肖璐毛从剑曹冶康润敏四川省畜牧科学研究院四川成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronav... 详细信息

2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),命名为CQ2023株。该毒株N基因序列全长1029 bp,与30株GenBank中登录的参考毒株N基因序列比对显示,核苷酸序列相似性为96.7%~99.4%,其中PDCoV CQ2023株与CHN-HeN06-2022株的相似性最高,为99.4%。遗传进化分析显示PDCoV CQ2023株属于国内流行株,与国内PDCoV毒株CHN-HeN06-2022等处于同一进化分支,亲缘关系最近。该次研究成功鉴定出该猪场腹泻疫情由PDCoV感染引起,并进行了N基因序列分析,为PDCoV的流行病学研究、遗传进化、预防及诊断试剂的研究提供数据支持。

关键词：猪δ冠状病毒诊断 N基因遗传进化分析

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中医手法整复治疗踝关节骨折研究进展

山东中医杂志 2022年第10期41卷 1131-1136页

作者：孙小辉刘传强孙鲁刘树兴康润民孙亚超山东中医药大学山东济南250355 山东省中医院山东济南250014

针对踝关节骨折的中医整复治疗,通过分析中医正骨流派手法整复的临床经验,综述相关文献报道,阐述各中医流派借助手法整复操作治疗踝关节骨折的过程,归纳手法整复治疗理念与治疗特色,进而探讨中医手法整复的治疗优势,展望其临床应用前景... 详细信息

针对踝关节骨折的中医整复治疗,通过分析中医正骨流派手法整复的临床经验,综述相关文献报道,阐述各中医流派借助手法整复操作治疗踝关节骨折的过程,归纳手法整复治疗理念与治疗特色,进而探讨中医手法整复的治疗优势,展望其临床应用前景。参考文献60篇。

关键词：踝关节骨折手法整复中医正骨学术流派治疗特色临床疗效