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大肠杆菌外膜蛋白ompW基因敲除菌的构建及其对两种抗生素的敏感性

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微生物学报 2012年第8期52卷 1021-1026页

作者：吴贤斌邹海杰田丽花潘建义赵辅昆浙江理工大学生命科学学院杭州310018

探讨大肠杆菌ompW基因敲除后,硫酸新霉素和氨苄青霉素对敲除菌最低抑菌浓度(MIC)和生存率的影响,进而分析OmpW的功能。【方法】运用Red重组技术将大肠杆菌K12染色体上基因ompW敲除,构建缺陷株ΔompW。然后分别测定硫酸新霉素和氨苄青霉... 详细信息

探讨大肠杆菌ompW基因敲除后,硫酸新霉素和氨苄青霉素对敲除菌最低抑菌浓度(MIC)和生存率的影响,进而分析OmpW的功能。【方法】运用Red重组技术将大肠杆菌K12染色体上基因ompW敲除,构建缺陷株ΔompW。然后分别测定硫酸新霉素和氨苄青霉素对正常菌和ΔompW菌的最小抑菌浓度(MIC)及次抑菌浓度(1/2 MIC)下K12和ΔompW菌的生存率。【结果】经PCR鉴定和通过提取膜蛋白进行western blot分析表明,成功获得ompW敲除菌。抗生素分析表明,K12菌对硫酸新霉素的MIC为8.0μg/mL,生存率为98.0%;ΔompW菌对新霉素的MIC为1.7μg/mL,而其生存率仅为39.0%。而k12对氨苄新霉素的MIC为16.0μg/mL,ΔompW为3.3μg/mL;1/2 MIC下K12生存率为70.4%,而ΔompW为30.3%。【结论】ompW基因缺陷株对两抗生素的敏感性大大增强,表明ompW在细菌抗性方面起着关键作用。

关键词： Red同源重组外膜蛋白 OmpW 最小抑菌浓度生存率

Wnt-10a在氯高铁血红素诱导K562细胞分化过程中的作用

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解剖学报 2015年第6期46卷 772-779页

作者：王婕胡江江赵辅昆张世馥浙江理工大学生命科学学院杭州310018

目的探讨Wnt-10a在氯高铁血红素(hemin)诱导K562细胞分化过程中的变化及功能。方法通过联苯胺染色检测K562细胞被hemin诱导的阳性率,利用Western blotting和免疫细胞化学分析K562细胞诱导分化过程中Wnt-10a表达水平和细胞定位的变化情况... 详细信息

目的探讨Wnt-10a在氯高铁血红素(hemin)诱导K562细胞分化过程中的变化及功能。方法通过联苯胺染色检测K562细胞被hemin诱导的阳性率,利用Western blotting和免疫细胞化学分析K562细胞诱导分化过程中Wnt-10a表达水平和细胞定位的变化情况,通过半定量PCR与Real-time PCR检测K562细胞诱导分化过程中Wnt信号途径关键因子的表达水平及其变化,通过Wnt信号途径激活剂与构建Wnt-10a高表达K562细胞株的方法探讨Wnt途径改变后对K562细胞诱导分化的影响。结果在hemin诱导K562细胞分化过程中,细胞中的Wnt-10a蛋白表达量和mRNA量都出现了短暂下降后回复的趋势,同时Wnt-10a向胞膜迁移,Wnt蛋白所参与的3条信号途径中关键因子的表达水平均有着不同程度的变化。使用Wnt信号通路抑制剂后,诱导分化过程中的细胞增殖活力加强,Wnt-10a高表达的K562细胞被hemin诱导分化的能力开始提高,并且Wnt经典信号途径的关键因子表达水平也有上升。结论 Wnt-10a与hemin诱导K562细胞红系分化的过程密切相关。

关键词： Wnt-10a K562 氯高铁血红素红系分化免疫印迹法人

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腺样囊性癌肺转移相关蛋白质的筛选鉴定

中华口腔医学杂志 2004年第2期39卷 114-117页

作者：孙俊勇郭伟安杰袁泉赵辅昆上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔颌面外科200011 中国科学院生物与生化研究所

目的　初步筛选和鉴定人涎腺腺样囊性癌肺转移相关蛋白质。方法　利用腺样囊性癌细胞株 (ACC 2 )及其肺高转移细胞株 (ACC M) ,通过蛋白质组学方法 ,差减处理 ,发现两细胞株间蛋白质表达的差异 ,并对差异蛋白质点进行分析鉴定。结果　发... 详细信息

目的　初步筛选和鉴定人涎腺腺样囊性癌肺转移相关蛋白质。方法　利用腺样囊性癌细胞株 (ACC 2 )及其肺高转移细胞株 (ACC M) ,通过蛋白质组学方法 ,差减处理 ,发现两细胞株间蛋白质表达的差异 ,并对差异蛋白质点进行分析鉴定。结果　发现ACC 2和ACC M细胞系之间有 12个蛋白质点表达水平明显不同。其中转酮醇酶、v Ha ras蛋白等在ACC 2中低表达 ,在ACC M中高表达 ;肿瘤坏死因子超家族成员 4 (配合基 )在ACC 2中高表达 ,在ACC M中低表达 ,Pirin仅在ACC 2中表达。结论　 12个差异蛋白质可能通过不同途径参与腺样囊性癌肺高转移。

关键词：腺样囊性癌肺转移蛋白质肿瘤转移恶性肿瘤

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S-腺苷甲硫氨酸合成酶反应条件的优化

工业微生物 2008年第2期38卷 6-10页

作者：罗赟星袁中一罗贵民赵辅昆吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130023 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组重点实验室上海200031

优化了重组毕赤酵母表达的S-腺苷甲硫氨酸合成酶催化L-甲硫氨酸(Met)和ATP合成S-腺苷甲硫氨酸的条件,确定了该酶的最适酶活力检测条件为20mmol/L的L-Met,26mmol/L的ATP,52mmol/L的MgCl2,300mmol/L的KCl,8mmol/L的还原型谷胱甘肽,100mmo... 详细信息

优化了重组毕赤酵母表达的S-腺苷甲硫氨酸合成酶催化L-甲硫氨酸(Met)和ATP合成S-腺苷甲硫氨酸的条件,确定了该酶的最适酶活力检测条件为20mmol/L的L-Met,26mmol/L的ATP,52mmol/L的MgCl2,300mmol/L的KCl,8mmol/L的还原型谷胱甘肽,100mmol/L的Tris,反应液pH 8.5,35°C反应1h,比活力达到23.84U/mg。该酶还可以催化以DL-Met代替L-Met为底物的S-腺苷甲硫氨酸合成反应,以降低生产成本。

关键词： S-腺苷甲硫氨酸合成酶 S-腺苷甲硫氨酸酶法合成

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纤维素酶的研究进展

生命科学 2005年第5期17卷 392-397页

作者：李燕红赵辅昆中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

纤维素酶是糖苷水解酶的一种,它可以将纤维素物质水解成简单糖,进而发酵产生乙醇,从嘶解决农业、再生能源以及环境污染等问题。初期的研究主要集中在对微生物纤维素酶的研究,随着对纤维素酶研究的不断深入,“动物自身不含纤维素酶”这... 详细信息

纤维素酶是糖苷水解酶的一种,它可以将纤维素物质水解成简单糖,进而发酵产生乙醇,从嘶解决农业、再生能源以及环境污染等问题。初期的研究主要集中在对微生物纤维素酶的研究,随着对纤维素酶研究的不断深入,“动物自身不含纤维素酶”这一传统理论被推翻,动物纤维素酶成为纤维素酶研究的热点。另外,生物化学、分子生物学以及基因工程等多种交叉学科的快速发展,获得适合工业化的高比活力的纤维素酶已指日可待。

关键词：纤维素酶简单糖动物纤维素酶工业化高比活力

巨噬细胞应激的铜绿假单胞菌磷酸化蛋白质组分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第2期34卷 91-95页

作者：潘建义王长一叶智鸧陈冉赵辅昆浙江理工大学生命科学学院蛋白质组学与分子酶学研究所杭州310018

目的鉴定巨噬细胞应激的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）磷酸化蛋白质组，分析磷酸化修饰在该菌应答应激中的作用。方法采用强阳离子交换层析和固相金属离子亲和层析（SCX-IMAC）富集应激细菌的磷酸化肽段，并利用纳升级液相色... 详细信息

目的鉴定巨噬细胞应激的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）磷酸化蛋白质组，分析磷酸化修饰在该菌应答应激中的作用。方法采用强阳离子交换层析和固相金属离子亲和层析（SCX-IMAC）富集应激细菌的磷酸化肽段，并利用纳升级液相色谱-质谱联用技术（1lanOLC-MS／MS）进行鉴定和分析其磷酸化蛋白质组。结果在应激细菌中鉴定到14个磷酸化肽段，对应于12个磷酸化蛋白质，其中膜蛋白占50％，提示膜蛋白的磷酸化修饰在这一过程中具有关键作用。蛋白质功能分析显示这些磷酸化蛋白质主要涉及应激应答、铁摄取转运、厌氧呼吸、过氧化氢的应激应答、磷酸化介导的信号转导等生物过程。结论铜绿假单胞菌的蛋白质磷酸化修饰对其转导应激信号及应答巨噬细胞内的缺铁、缺氧和氧化应激等不利生存环境具有关键作用，该结果为深入理解该菌的毒力及致病机制提供新的思路。

关键词：铜绿假单胞菌巨噬细胞应激蛋白质磷酸化磷酸化蛋白质组致病机制

非翻译区(UTR)结合蛋白对雌激素受体mRNA转录后调控的功能及机制研究

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非翻译区(UTR)结合蛋白对雌激素受体mRNA转录后调控的功能及机制...

华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会

作者：戚熙君王大巾赵辅昆丁明浙江理工大学生命科学学院

雌激素(Estrogen)不仅参与细胞的生长和分化、个体发育、组织特异性基因表达等许多重要的生理过程,也是许多荷尔蒙相关疾病的重要因素。研究发现乳腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌甚至骨质疏松症等都与雌激素的失衡有关。有多种信号通路参与...

雌激素(Estrogen)不仅参与细胞的生长和分化、个体发育、组织特异性基因表达等许多重要的生理过程,也是许多荷尔蒙相关疾病的重要因素。研究发现乳腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌甚至骨质疏松症等都与雌激素的失衡有关。有多种信号通路参与了该调控过程。ER mRNA的非编码区(Un-Translated Region,UTR)对ER的转录后调控非常重要,雌激素能够提高ER mRNA的稳定性,有证据表明,这一作用是通过ER mRNA的3’UTR进行的,但目前尚不清楚雌激素

关键词：

来源： cnki会议评论

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PBDC1蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

基础医学与临床 2014年第2期34卷 222-225页

作者：戚武林胡江江曹玲玲赵辅昆张世馥浙江理工大学生命科学学院蛋白质组学与分子酶学研究室浙江杭州310018

目的原核表达、纯化PBDC1蛋白,制备PBDC1多克隆抗体。方法将PBDC1基因克隆到pET-28a(+)质粒中,构建成重组质粒pET-28a(+)-PBDC1。将此重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,IPTG诱导其在宿主菌中大量表达,并进行SDS-PAGE检测。经镍离子亲... 详细信息

目的原核表达、纯化PBDC1蛋白,制备PBDC1多克隆抗体。方法将PBDC1基因克隆到pET-28a(+)质粒中,构建成重组质粒pET-28a(+)-PBDC1。将此重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,IPTG诱导其在宿主菌中大量表达,并进行SDS-PAGE检测。经镍离子亲和柱纯化得到PBDC1融合蛋白,并以此免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果经质谱鉴定,获得了高纯度的PBDC1蛋白。经Western blot验证,获得了抗PBDC1蛋白的多克隆抗体。结论成功获得抗PBDC1蛋白的多克隆抗体,为研究PBDC1在红系分化中的功能提供了有利工具。

关键词： PBDC1蛋白多克隆抗体

大肠杆菌外膜蛋白OmpW的克隆及在外膜上高表达

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中国生物工程杂志 2011年第12期31卷 46-50页

作者：邹海杰吴贤斌潘建义赵辅昆浙江理工大学生命科学学院杭州310018

目的:利用表达载体pLLP-OmpA实现大肠杆菌K12外膜蛋白OmpW在外膜上高表达。方法:PCR扩增ompW基因,构建重组表达载体pLLP-OmpA-ompW,然后转化大肠杆菌K12,得到在外膜上高表达的菌株。提取该菌外膜蛋白,利用免疫小鼠制备得到的抗血清进行W... 详细信息

目的:利用表达载体pLLP-OmpA实现大肠杆菌K12外膜蛋白OmpW在外膜上高表达。方法:PCR扩增ompW基因,构建重组表达载体pLLP-OmpA-ompW,然后转化大肠杆菌K12,得到在外膜上高表达的菌株。提取该菌外膜蛋白,利用免疫小鼠制备得到的抗血清进行Western blot分析验证高表达的OmpW是否定位于外膜。结果:成功构建了重组表达载体,经转化后成功筛选到高表达菌株,并经Western blot证实高表达的OmpW定位在外膜上。结论:首次成功获得OmpW在外膜上的高表达,该高表达菌株可为深入研究OmpW在细菌致病机制中的作用及其它功能提供研究基础。

关键词：大肠杆菌K12 OmpW 重组载体抗血清制备